鮮紅天麻化學(xué)成分研究△

鄭秀花，劉偉，陳龍，王曉，郭蘭萍，董紅敬*

[1.山東中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355；2.齊魯工業(yè)大學(xué)(山東省科學(xué)院) 山東省分析測(cè)試中心 山東省中藥質(zhì)量控制技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250014；3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 中藥資源中心，北京 100700]

多數(shù)中藥需炮制后才能供臨床使用，經(jīng)過(guò)炮制后其藥性、化學(xué)成分等均發(fā)生了一定程度的變化[1-5]。天麻為蘭科植物天麻GastrodiaelataBl.的干燥塊莖，具有息風(fēng)止痙、平抑肝陽(yáng)、祛風(fēng)通絡(luò)的功能，常用于頭痛、肢體麻木等癥狀的治療[6-7]。歷代本草記載天麻的炮制方法主要有酒制、姜制等，現(xiàn)多用其蒸制品[8-12]。目前關(guān)于天麻干品化學(xué)成分的研究頗多，發(fā)現(xiàn)其主要含有天麻素、巴利森苷等酚類化合物[13-16]。然而對(duì)新鮮天麻化學(xué)成分的研究確鮮有報(bào)道，目前多采用LC-UV/MS等分析方法對(duì)其炮制前后的成分變化進(jìn)行推測(cè)，并不能對(duì)其變化后的成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)[17]。對(duì)鮮紅天麻的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)分離，可為紅天麻炮制前后化學(xué)成分變化研究提供良好的物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters 2695高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司)；RIGOL-3000系列高效液相色譜儀(北京普源精電科技有限公司)；CHEETAHTMMP系列中壓制備液相色譜儀(天津博納艾杰爾科技有限公司)；分析型色譜柱為Waters-Symmetry?C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)(沃特世公司)；半制備型色譜柱為YMC Pack ODS-A(250 mm×10.0 mm，5 μm)(日本YMC公司)；Bruker-400核磁共振波譜儀(瑞士布魯克公司)；Agilent 6520四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司)。

1.2 材料

色譜級(jí)甲酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；色譜級(jí)甲醇(山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司)；色譜乙腈(美國(guó)Tedia公司)。

實(shí)驗(yàn)所用紅天麻采集于云南省昭通市彝良縣小草壩天麻種植基地，經(jīng)云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究所劉大會(huì)研究員鑒定為蘭科天麻屬植物紅天麻GastrodiaelataBl.f.elata的新鮮塊莖。

2 提取與分離

鮮紅天麻36 kg，洗凈，切塊，榨汁，過(guò)濾，濾液采用D101大孔樹脂進(jìn)行分離純化，分別用純水(25 L)，10%(25 L)、30%(25 L)、50%(25 L)、70%(25 L)、95%乙醇(25 L)水梯度洗脫，合并70%乙醇水部位，濃縮得浸膏19.695 g。取70%乙醇水部位浸膏，采用50%甲醇水溶解后過(guò)0.45 μm有機(jī)濾膜，采用中壓制備色譜(C18反相柱，40 mm×400 mm)，分別以甲醇-0.1%甲酸水(30%、50%、100%)進(jìn)行梯度洗脫，共分離得到10個(gè)流分(Fr.1～10))。分別取 Fr.3～5(1.283 g)、Fr.7(108 mg)，采用甲醇-0.1%甲酸水(50∶50，V/V)進(jìn)行等度洗脫，得到化合物1(22 mg)、2(15 mg)、3(156 mg)、4(72.3 mg)；Fr.8(160 mg)用甲醇-0.1%甲酸水(69∶31，V/V)進(jìn)行等度洗脫，得化合物5(10 mg)、6(9 mg)；Fr.10(89 mg)用甲醇-0.1%甲酸水(70∶30，V/V)等度洗脫，得到化合物7(19 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針晶，ESI-MS：m/z243.10[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：6.99(2H，d，J=8.0 Hz，H-2′，6′)，6.95(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6)，6.92(1H，br d，H-2)，6.78(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.65(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，4.20(2H，s，H-7)，3.73(2H，s，H-7′)，3.19(3H，s，-OCH3)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：155.8(C-4′)，154.9(C-4)，131.7(C-1′)，130.5(C-2)，129.5(C-1)，128.3(C-3)，128.8(C-2′，6′)，127.3(C-6)，115.4(C-3′，5′)，115.2(C-5)，74.2(C-7)，57.5(-OCH3)，34.8(C-7′)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[18]，化合物1鑒定為4-羥基-3-(4-羥基芐基)芐基甲基醚。

化合物2：白色結(jié)晶，ESI-MS：m/z205.06[M+H]+；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：9.20(2H，s，4，4′-OH)，6.96(4H，d，J=8.4 Hz，H-2，2′，6，6′)，6.66(4H，d，J=8.4 Hz，H-3，3′，5，5′)，3.68(2H，s，H-7)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：155.9(C-4，4′)，132.6(C-1，1′)，129.9(C-2，2′，6，6′)，115.6(C-3，3′，5，5′)，39.4(C-7)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[19]，化合物2鑒定為4，4′-二羥基二苯甲烷。

化合物3：淡黃色粉末，ESI-MS：m/z175.07[M+Na]+，151.08[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：9.35(1H，br s，4-OH)，7.11(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，6.72(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，4.30(2H，s，H-7)，3.41(3H，q，J=7.2 Hz，H-1′)，1.11(3H，t，J=7.2 Hz，H-2′)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：157.2(C-4)，129.7(C-2，6)，129.3(C-1)，115.4(C-3，5)，72.0(C-7)，64.9(C-1′)，15.6(C-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[20]，化合物3鑒定為對(duì)羥芐基乙基醚。

化合物4：白色粉末，ESI-MS：m/z253.09[M+H]+，229.09[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：9.50(2H，-OH)，7.11(4H，d，J=8.4 Hz，H-2，2′，6，6′)，6.73(4H，d，J=8.4 Hz，H-3，3′，5，5′)，4.33(4H，s，H-7，7′)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：157.3(C-4，4′)，129.7(C-2，2′，6，6′)，129.1(C-1，1′)，115.5(C-3，3′，5，5′)，71.4(C-7，7′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[21]，化合物4鑒定為4，4′-二羥基二芐基醚。

化合物5：白色粉末，ESI-MS：m/z307.15[M+H]+，305.12[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：9.16(3H，-OH)，6.97(2H，d，J=8.0 Hz，H-2′，6′)，6.92(2H，d，J=8.0 Hz，H-2″，6″)，6.84(1H，d，J=2.4 Hz，H-3)，6.77(1H，dd，J=8.0，2.4 Hz，H-5)，6.68，(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，6.64(2H，d，J=8.0 Hz，H-3″，5″)，6.62(2H，d，J=8.0 Hz，H-3′，5′)，3.68(2H，s，H-7′)，3.63(2H，s，H-7″)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：155.8(C-3″)，155.7(C-4″)，153.4(C-1)，132.6(C-4)，132.5(C-1″)，131.9(C-2)，130.9(C-3)，129.9(C-2′，6′)，129.8(C-2″，6″)，128.3(C-1′)，127.4(C-5)115.5(C-3′，5′)，115.4(C-6，3″，5″)，39.8(C-7″)，34.9(C-7′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[22]，化合物5鑒定為2，4-二對(duì)羥基芐基苯酚。

化合物6：白色粉末，ESI-MS：m/z353.23[M+NH4]+，335.13[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：8.32(2H，-OH)，7.24(2H，d，J=8.4 Hz，H-2″，6″)，7.23(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，7.13(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，6.96(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，6.77(2H，d，J=8.0 Hz，H-3″，5″)，6.73(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，4.93(2H，s，H-7′)，4.38(2H，s，H-7)，4.35(2H，s，H-7″)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：158.4(C-4)，157.7(C-4″)，157.3(C-4′)，135.0(C-1)，131.0(C-1′)，130.1(C-2′，6′)，129.8(C-2″，6″)，129.0(C-2，6)，127.6(C-1″)，115.6(C-3″，5″)，115.5(C-3″，5″)，115.0(C-3，5)，71.5(C-7′)，71.1(C-7)，69.7(C-7″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[23]，化合物6鑒定為天麻酚A(Gastrol A)。

化合物7：白色粉末，UV λmax(nm)：201.3，230.8，274.7。ESI-MS：m/z281.1147[M+Na]+(理論值281.114 8，化合物分子式為C16H18O3)；1H-NMR數(shù)據(jù)7.24(2H，d，J=8.4 Hz)，7.22(2H，d，J=8.4 Hz)，6.94(2H，d，J=8.4 Hz)，6.76(2H，d，J=8.4 Hz)可歸屬于二組 AA′BB′偶合的苯環(huán)質(zhì)子信號(hào)，顯示化合物中含有兩個(gè)對(duì)位取代的苯環(huán)；δH4.93(2H，s)、4.35(2H，s)顯示有兩個(gè)亞甲基信號(hào)，HMBC顯示，δH4.93與δC127.6、130.0、158.3有遠(yuǎn)程相關(guān)，δH4.35與δC129.5、65.1有遠(yuǎn)程相關(guān)，說(shuō)明兩個(gè)亞甲基信號(hào)連接在苯環(huán)上，推斷化合物為4，4′-二羥基二芐基醚的衍生物[21]。1H-NMR數(shù)據(jù)δH3.43(2H，q)、1.12(3H，t)及1H-1H COSY數(shù)據(jù)顯示化合物中含有-OCH2CH3基團(tuán)；HMBC顯示δH3.43(2H，q)與71.7有遠(yuǎn)程相關(guān)。故確定-OCH2CH3連在芐基上。因此，化合物7鑒定為4-乙氧甲基苯基-4′-羥基芐醚[24]，化合物7的主要HMBC及1H-1HCOSY關(guān)系如圖1所示，具體碳?xì)湫盘?hào)歸屬見表1。

圖1 化合物7的主要HMBC及1H-1H COSY關(guān)系

表1 化合物7的1H-NMR(400 MHz)和13C-NMR(100 MHz)數(shù)據(jù)(DMSO-d6)

4 結(jié)論

文獻(xiàn)報(bào)道，干天麻中主要含有巴利森苷類、天麻素、對(duì)羥基苯甲醇的多聚體等化合物，本研究對(duì)鮮紅天麻70%乙醇水的大孔樹脂部位進(jìn)行了分離，得到的主要是分子量較小的苯基取代衍生物，可為紅天麻炮制前后化學(xué)成分變化研究提供一定的物質(zhì)基礎(chǔ)。

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