氣相色譜-三重四極桿串聯質譜法檢測貝類中得克隆殘留量

黃福勇，董湘君，王 揚

(浙江省水產技術推廣總站，浙江 杭州 311100)

得克隆(dechlorane plus，DP)，分子式為C18H12Cl12，是一種添加型高氯代阻燃劑，其工業品包含2種異構體，分別為syn-DP和anti-DP。由于其具有阻燃效率高、熱穩定性好、與基材和基材中的其他組分不發生化學反應，且價格便宜等優點，所以作為替代滅蟻靈的新型氯代阻燃劑在全球推廣[1-2]。2006年之后，得克隆在全球生物、大氣、室內灰塵和底泥中廣泛檢出[3-7]，由此帶來的環境污染問題引起了人們廣泛關注。現有研究表明，DP具有明顯的持久性有機污染物(persistent organic pollutants，POPs)特性，具有難降解、生物富集性、生物毒性等性質。縊蟶、貽貝等貝類都屬于濾食性生物，能在體內軟組織內積累、富集環境中的污染物質。這2種貝類是我國沿海重要的養殖對象，是理想的海洋環境監測指示性生物。本研究采用自動凝膠滲透色譜(GPC)技術進行樣品的前處理，氣相色譜-三重四極桿串聯質譜(GC-QQQ)進行分析測定，建立了貝類中2種DP異構體的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

氣相色譜-三重四極桿串聯質譜儀(Agilent 7890氣相色譜儀配7000B三重四極桿質譜儀，HP-5MS色譜柱(30 m×0.25 mm)，美國Agilent公司)；VORIO凝膠滲透色譜儀(德國LCTech公司)；GPC標準柱(500 mm×25 mm，德國LCTech公司)；RE2000B型旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)；SK-15GT超聲波清洗儀(上海科導超聲儀器有限公司)；XH-C型旋渦振蕩器(常州邁科諾儀器有限公司)。

DP標準品(質量濃度均為50 μg·mL-1，美國AccuStandard公司)；正己烷、丙酮、環己烷和乙酸乙酯(HPLC級，美國TEDIA公司)；無水硫酸鈉(分析純，華東試劑有限公司)；海砂(化學純，國藥集團化學試劑有限公司)。

1.2 供試樣品

樣品為采自浙江溫州市、臺州市和舟山市農貿市場的縊蟶和貽貝鮮活樣品。樣品進行去殼、去內臟處理。

1.3 樣品前處理

取20 g貝類肌肉樣品(去內臟)，放入50 mL塑料離心管，加5 g海沙、10 g無水硫酸鈉，旋渦振蕩5 min，再加入30 mL正己烷/丙酮(1∶1，V/V)溶液，漩渦混勻后，超聲提取30 min。5 000 r·min-1離心10 min，取上清液，旋轉蒸發至近干，用乙酸乙酯/環己烷(1∶1，V/V)溶液定容到10 mL，待GPC凈化。

將上述提取液轉移至自動凝膠凈化系統，進樣管定容至10 mL，進樣量為5 mL。流動相為乙酸乙酯/環己烷(1∶1，V/V)溶液，流速5 mL·min-1。收集25～40 min的流動組分并旋轉蒸發至近干，正己烷定容至1 mL，待分析。

1.4 檢測條件

1.4.1 色譜條件

進樣口溫度250 ℃，載氣為高純氦氣，純度≥99.999%，柱流量為1.0 mL·min-1；不分流進樣，進樣量1 μL；定量方法外標法。色譜柱升溫順序為90 ℃保留1 min后，以每分鐘15 ℃的速度升溫到300 ℃，保留10 min。

1.4.2 串聯質譜條件

色譜-質譜接口溫度280 ℃，電離方式EI，電離能量70 eV，離子源溫度250 ℃，等電流35 μA，測定方式為MRM多重反應監測模式。分析參數見表1。

表1 得克隆質譜檢測參數

注：*表示定量離子。

2 結果與討論

2.1 樣品前處理方法

由于貝類中含水量較大，前處理時應適量加入無水硫酸鈉吸水。試驗樣品中加入海砂，可以起到分散樣品的效果，避免因樣品聚團板結而降低萃取效率。本試驗采用超聲萃取法進行樣品處理，利用超聲波輻射壓強產生的強烈空化應效應、機械振動、擾動效應、高的加速度、乳化、擴散、擊碎和攪拌作用等多級效應，增大物質分子運動頻率和速度，增加溶劑穿透力，從而加速目標成分進入溶劑，促進提取的進行。應用上述方法進行樣品萃取，具有快速、簡便、提取效率高等優點。樣品凈化采用GPC凈化法進行，該方法具有回收率高、平行性好等優點。

2.2 色譜條件

本研究先后選用DB-5MS毛細管柱[8]、DB-35MS毛細管柱和HP-5MS毛細管柱進行檢測分析，最終選定HP-5MS毛細管柱進行色譜分析。HP-5MS毛細管柱在色譜峰分離、離子響應2方面具有顯著優勢，分離效果最好且響應值最好。研究發現，syn-DP組分中，在確定的分析條件下，出峰時間在22.93 min，監測離子響應最高為271.8(m/z)，anti-DP出峰時間為24 min，監測離子響應最高為296.9(m/z)，因此分別選定為母離子271.8和296.9，再嘗試用多種碰撞能量轟擊母離子，結合儀器自帶軟件，進行分析，選定子離子。

2.3 線性范圍和定量下限

配制一系列濃度分別為0.1、0.2、0.4、0.5、1.0和2.0 mg·L-1的標準工作溶液，在上述色譜條件和質譜條件下進行測定，syn-DP線性方程為y=26 953.515 3x+1 582.531 2，anti-DP線性方程為y=5 978.329 2x+395.175 6，相關系數均為0.999。以信噪比為3估算定量下限(LOQ)，syn-DP和anti-DP的LOQ分別為0.2、0.5 μg·kg-1。

2.4 樣品分析結果

通過對儀器分析參數、超聲萃取和凝膠滲透凈化色譜條件的優化，初步形成了海洋貝類中得克隆殘留檢測的方法，并應用該方法對分別采自溫州、臺州和舟山3地的42個海洋貝類樣品進行檢測分析，確定了方法檢出限。syn-DP和anti-DP的檢出限分別為0.1、0.3 μg·kg-1；syn-DP回收率為85.1%～103.6%，anti-DP回收率為84.3%～102.5%。42個海洋貝類樣品中，22個樣品檢出得克隆，含量在13.69～113.43 ng·kg-1。

3 小結

近年來，得克隆作為新興有機污染物得到廣泛關注[9]。由于海洋貝類的特殊生活習性，比其它海洋生物更易富集有機污染物，常作為海洋污染指示性生物。本研究建立了海洋貝類中得克隆殘留量的氣相色譜-串聯質譜測定方法。該方法以正己烷/丙酮溶液為萃取試劑，超聲方法提取，經GPC凈化，GC-MS/MS進行分析測定。該方法樣品前處理簡便，方法靈敏度高、定性可靠、定量準確，并成功應用于市售貝類產品中2種得克隆同分異構體測定。該方法為海洋生物中得克隆殘留監測、海洋貝類作為得克隆指示性生物監測以及相關檢測標準制定等多方面的研究提供了參考。

參考文獻：

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[9] 李宇霖, 孟祥周, 趙麗芳,等. 環境中新興有機污染物得克隆的研究進展[J]. 環境科學與技術, 2012, 35(2):79-83.