注射用左卡尼汀含量測定方法學建立

于梅

摘 要： 目的：本文通過建立高相液相色譜法對注射用左卡尼汀含量的測定，并對建立的方法進行方法學驗證。方法：Agela XBP-C18色譜柱，檢測波長：225nm；流速：1.0ml/min；進樣量：20μl；柱溫：室溫。結(jié)果：濃度在1.19～8.00mg/ml范圍內(nèi)，Y=144.43X+7.2867，r為0.9997，線性關系良好，中間精密度平均含量為100.9%，RSD為0.22%，重復性RSD為0.43%；平均回收率為100.10%，RSD為0.24%。結(jié)論 高效液相色譜法檢測注射用左卡尼汀的含量具有簡便、準確度高、重復性強等特點，值得推廣應用使用此方法檢測注射用左卡尼汀含量。

關鍵詞： 高相液相色譜法；注射用左卡尼汀；含量測定

左卡尼汀是哺乳動物能量代謝的必需的體內(nèi)天然物質(zhì)，其主要功能是促進脂類代謝。它既能將長鏈脂肪酸帶進線粒體基質(zhì)，并促進脂類氧化分解，為人體內(nèi)的細胞提供足夠的能量，又能將其線粒體內(nèi)產(chǎn)生的短鏈脂酰基輸出。本品的補充可緩解其因體內(nèi)缺乏引起的骨骼肌和心肌脂肪代謝紊亂等組織的功能障礙，且注射用左卡尼汀也未見不良反應，療效較好，臨床應用本品的患者較多[1]。因此為了臨床用藥安全，本文建立了注射用左卡尼汀的含量測定方法，能夠準確的檢測。

1.儀器與試藥

1.1儀器

Agilent-1200型高效液相色譜儀. 紫外檢測器； XS105DU電子天平：梅特勒公司

1.2試藥

試劑：磷酸（分析純）：哈爾濱化工化學試劑廠；甲醇（色譜純）：SK Chemicals Ulsan

庚烷磺酸鈉（色譜純）：山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司；水：注射用水。

對照品：來源：中國食品藥品檢定研究院，批號：101041-201503，純度99.9%。

2.方法與結(jié)果

2.1色譜條件系統(tǒng)適用性

色譜柱：1、Agela XBP-C18，5μm， 4.6×250mm。流動相：0.05mol/L磷酸鹽緩沖液（取磷酸11.5ml，加1mol/L氫氧化鈉溶液100ml，加水稀釋至2000ml，用磷酸或1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至2.4）-甲醇-庚烷磺酸鈉（82ml：18ml：0.4g）。檢測波長：225nm；流速：1.0ml/min；進樣量：20μl；柱溫：室溫

2.2測定法

精密稱取本品適量，加水稀釋制成加水溶解并制成每1ml中含左卡尼汀4mg的溶液，搖勻。精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取左卡尼汀對照品適量，加水溶解并制成每1ml中含左卡尼汀4mg的溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算供試品中左卡尼汀的含量[2]。

3.方法學驗證

3.1 方法專屬性試驗

精密稱取空白輔料和量取空白溶劑20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。在左卡尼汀主峰位置沒有色譜峰出現(xiàn)，說明溶劑和空白輔料對含量測定無干擾。專屬性較好。

3.2線性關系試驗

精密稱取左卡尼汀對照品（含量：99.9%）603.21mg，置50ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1.0 ml、1.7 ml、3.0 ml、3.3 ml、5.0 ml、6.7ml，分別置10ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成系列線性溶液。分別吸取上述系列對照品溶液各20μl注入色譜儀，記錄色譜圖。

結(jié)果表明：左卡尼汀溶液濃度在1.19～8.00mg/ml范圍內(nèi)，Y=144.43X+7.2867，r為0.9997，線性關系良好，可滿足含量測定的要求[3]。

3.3進樣精密度試驗

對照溶液配制：取對照品40.05mg，置10ml量瓶中，用流動相溶解并定量稀釋至刻度，配成每1ml約含4mg的溶液。取上述對照品溶液，照上述色譜條件，連續(xù)進樣6次。結(jié)果RSD為0.66%：本品含量測定方法精密度好。

3.4中間精密度試驗

考察隨機變動因素對精密度的影響，在同一實驗室，不同日期、由不同分析人員、用不同實驗設備測定結(jié)果之間的精密度。

取本品（批號：170629），照上述色譜條件，進行試驗。計算中間精密度平均值及RSD 結(jié)果表明：有不同分析人員，在不同日期不同設備測得的左卡尼汀注射液平均含量為100.9%，RSD為0.22%，該試驗符合測定要求。

3.5重復性試驗

取本品（批號：170629）6份，分別用流動相稀釋制成每1ml約含左卡尼汀4mg的溶液，分別搖勻，作為供試溶液，分別精密吸取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果：RSD為0.43%，本品含量測定的重復性良好。

3.6回收率試驗

分別精密稱取左卡尼汀原料藥（含量：98.96%）32.33mg、40.42mg、48.50mg，置于10ml量瓶中，制成含左卡尼汀分別為標示量的80%、100%、120%的供試品溶液，每個濃度各3份。另精密稱取對照品約40mg，置于10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為對照品溶液。分別精密量取供試品溶液、對照品溶液各20μl，照上述色譜條件試驗，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算。由測得量與加入量的比值，即得回收率[4]。

結(jié)果表明：平均回收率為100.10%，RSD為0.24%，符合準確度試驗要求。

3.7溶液穩(wěn)定性試驗

取本品（批號：170629），照上述色譜條件，室溫放置，分別于0、1、2、4、6、8小時進樣，試驗結(jié)果：供試品溶液在8個小時內(nèi)測定結(jié)果的相對標準偏差為0.28%，結(jié)果表明供試品溶液在室溫放置8小時較穩(wěn)定。

3.8樣品含量測定

精密稱取適量，用流動相稀釋制成每1ml中約含4mg的溶液，作為供試品溶液；另精密稱取左卡尼汀對照品適量，用流動相稀釋制成每1ml中約含4mg的溶液，作為對照品溶液。分別取上述兩種溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算，即得。左尼汀注射液樣品3批及被仿制藥，依法測定，三批供供試品及被仿制藥的含量測定結(jié)果分別是：供試品：99.85%、100.22%、99.46%；被仿制藥：98.77%。%結(jié)果表明：三批供試品及被仿制藥含量均不少于90.0% [5]。

4.結(jié)論

通過對注射用左卡尼汀的含量測定方法學驗證，結(jié)果：線性1.19～8.00mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關系，且重復性、準確度、中間精密度較高，溶液在8小時能穩(wěn)定。結(jié)果表明此方法能準確的測定注射用左卡尼汀的含量，因此該方法可行性較高。建議使用此方法測定注射用左卡尼汀的含量。

參考文獻

[1]閔翠娥 陸媛 江少儀 譚勝連 HPLC法測定左卡尼汀注射液含量及有關物質(zhì) 廣東藥學院學報 2009， 25（6）.

[2]高立軍 王濤 全東琴高效液相色譜法測定左卡尼汀注射液的含量 科學技術(shù)與工程2011， 11（30）.

[3]李峰 高效液相色譜法用于左卡尼汀注射液的含量檢測 中國基層醫(yī)藥 2010， 17（16）.

[4]袁彩君 朱天新高效液相色譜法測定左卡尼汀注射液的含量及雜質(zhì)A 中國當代醫(yī)藥 2015， （19）.

[5] 耿銀銀 許麗曉 方會超 王莉 劉萬卉 親水作用色譜法測定左卡尼汀注射液含量及雜質(zhì)A 煙臺大學學報（自然科學與工程版） 2017， 30（3）.