常規(guī)試管凝集試驗(yàn)與虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測布病抗體結(jié)果對比分析

張宇 王志堅(jiān)

本文的主要研究目的，是通過虎紅平板凝集試驗(yàn)以及常規(guī)試管凝集試驗(yàn)對布魯菌病進(jìn)行檢測，并且分析對比兩者的檢測結(jié)果。在實(shí)際檢測的過程中，主要運(yùn)用試管凝集試驗(yàn)以及虎紅平板凝集試驗(yàn)這兩種方法。通過對試驗(yàn)結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，在四百份的高溫血清當(dāng)中，其中有十八份試管凝集試驗(yàn)陽性，完全來自于三十六份的虎紅平板凝集試驗(yàn)的陽性當(dāng)中。因此我們能夠得出，在對布魯菌病的實(shí)際檢測過程中，應(yīng)用通過虎紅平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行有效的篩選，所得到的陽性樣品可以通過試管凝集試驗(yàn)來進(jìn)行復(fù)核。

所謂布魯菌病，通常也被人稱作布病或者波狀熱病。這種疾病主要是布魯菌所引發(fā)的，并且在世界范圍內(nèi)分布廣泛，人類與牲畜都會(huì)感染這種慢性的細(xì)菌性傳染疾病。布魯菌病在我國隸屬于二類牲畜疫病。在我國大多數(shù)布魯菌病發(fā)病率高的區(qū)域，國家頒布了2015年必須對該疾病進(jìn)行有效的控制，到了2020年必須徹底的清除該疾病。因此，對于布魯菌病陽性高效的檢測手段，對該疾病的預(yù)防與醫(yī)治都有著至關(guān)重要的意義。疾病控制機(jī)構(gòu)通過運(yùn)用試管凝集試驗(yàn)方法以及虎紅平板凝集試驗(yàn)方法對四百例高危群體的樣品血清進(jìn)行檢測對比分析。其詳細(xì)的分析檢測報(bào)告結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 材料

在實(shí)際檢測的過程中，所使用的材料包括：試管凝集抗原試劑，虎紅平板凝集抗原試劑，并且都在有效期之間進(jìn)行使用。所檢測的血清樣品來自于四百例布魯菌疾病的高危群體。

1.2 方法

1.2.1 虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）

在實(shí)際檢測的過程中，將需要進(jìn)行檢測的血清樣品，取出0.03mL，放置于玻片上，并且將0.03mL的虎紅平板抗原加入到其中，并且均勻混合，其判定結(jié)果將會(huì)在5min之內(nèi)產(chǎn)生。如果玻片上的混合物當(dāng)中產(chǎn)生顆粒狀的物質(zhì)或者產(chǎn)生凝集片，其檢測結(jié)果都為陽性（+）。如果混合液體呈現(xiàn)出十分渾濁的狀態(tài)，其檢測結(jié)果都為陰性（-）。

1.2.2 試管凝集試驗(yàn)（SAT）

在運(yùn)用該種方法進(jìn)行實(shí)際檢測的過程中，需要稀釋被檢測的血清樣品。對于每一份的血清樣品，需要使用五支小試管，將2.3mL生理鹽水加入到第一個(gè)試管當(dāng)中，對于第二個(gè)試管，不需要加入生理鹽水，接下來將0.5mL加入到第三個(gè)試管、第四個(gè)試管以及第五個(gè)試管當(dāng)中。之后，通過對1mL吸管的有效使用，將需要進(jìn)行檢測的0.2mL血清樣品吸入到其中，并且將其放置到第一個(gè)試管當(dāng)中，保證液體的均勻混合。在確定液體的均勻混合之后，繼續(xù)運(yùn)用此吸管來吸取第一個(gè)試管當(dāng)中的血清，并且將這些血清分別以0.5mL的容量加入到第二個(gè)試管與第三個(gè)試管當(dāng)中，并且保證第三個(gè)試管當(dāng)中的液體均勻混合。之后吸出0.5mL的第四試管液體，將其融入到第五個(gè)試管當(dāng)中，并且確保第五個(gè)試管當(dāng)中的液體均勻混合，然后取出0.5mL的第五試管液體并將其丟棄。通過對這些試管當(dāng)中的血清稀釋度進(jìn)行分析對比，我們發(fā)現(xiàn)第二個(gè)試管一直到第五個(gè)試管的稀釋度分別為1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100。在第二個(gè)試管以及第五個(gè)試管的稀釋血清檢測樣品當(dāng)中，分別將0.5mL的抗原稀釋液加入到其中。通過觀察發(fā)現(xiàn)，血清樣品的稀釋度第二個(gè)試管一直到第五個(gè)試管的稀釋度分別為1∶25、1∶50、1∶100、1∶200。同時(shí)進(jìn)行抗原對照以及陽性與陰性的對照，并且對判斷比濁管進(jìn)行制備。將所有的比濁管、對照管、試驗(yàn)管有效震蕩之后，將其放置到37℃的溫箱之內(nèi)二十二個(gè)小時(shí)，將其取出在室溫的環(huán)境中放置兩個(gè)小時(shí)，之后將比濁管作為判斷的重要依據(jù)，進(jìn)行試驗(yàn)結(jié)果的判定。陽性血清的診斷準(zhǔn)則：試管凝集反應(yīng)血清 1∶100 稀釋度凝集現(xiàn)象++及以上就可以判定為布魯菌病陽性。

2 結(jié)果

通過四百份高危群體的樣品血清進(jìn)行細(xì)致的檢測，其中試管凝集試驗(yàn)有十八份的陽性監(jiān)測結(jié)果，虎紅平板凝集試驗(yàn)有三十六份陽性監(jiān)測結(jié)果，并且試管凝集試驗(yàn)的十八例陽性結(jié)果全部包含在虎紅平板凝集試驗(yàn)的三十六例陽性結(jié)果當(dāng)中。試管凝集試驗(yàn)以及虎紅平板凝集試驗(yàn)這兩種試驗(yàn)手段有著十分重要的統(tǒng)計(jì)學(xué)含義，兩種檢測手段的陽性結(jié)果有著極大的差異性（χ2=16.06，P﹤0.005）。如下表所示：

通過對試驗(yàn)信息數(shù)據(jù)的有效分析，能夠得知試管凝集試驗(yàn)方法所產(chǎn)生的陽性概率為4.50%，虎紅平板凝集實(shí)驗(yàn)方法所產(chǎn)生陽性的概率為9.00%，因此，相比之下虎紅平板凝集實(shí)驗(yàn)相較于試管凝集試驗(yàn)的陽性測定有著非常大的優(yōu)勢。

我國國標(biāo)運(yùn)用試管凝集試驗(yàn)檢測手段以及虎紅平板凝集試驗(yàn)手段來進(jìn)行檢測。通過實(shí)際操作我們發(fā)現(xiàn)，虎紅平板有著更快的反應(yīng)速度，并且操作方式極為簡單快捷，但是非常容易導(dǎo)致特異凝集的產(chǎn)生，致使假陽性的出現(xiàn)，該種方法對于大面積篩查非常適合。試管凝集試驗(yàn)可以定量定性，并且有著非常強(qiáng)的敏感性與特異性，有著非常精準(zhǔn)的判斷結(jié)果。但是使用該種方法的過程中，所需要的群體血清以及布魯菌凝集抗原的量比較大。

在大面積篩查的過程中，虎紅平板凝集試驗(yàn)?zāi)軌虬l(fā)揮重要作用。養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)在現(xiàn)今得到了飛速的發(fā)展，檢測工作者也在持續(xù)的增多，想要更加高效精準(zhǔn)的得出檢測結(jié)果，相關(guān)工作者可以將兩種檢測方法結(jié)合進(jìn)行，進(jìn)行優(yōu)勢互補(bǔ)，這樣才能使工作效率得到大幅度的提升。

（作者單位：111000遼寧省遼陽市太子河區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）