鼻咽癌篩查診斷中應用鼻咽部滲液苯胺藍染色技術的效果觀察

鐘啟龍 傅國武 梁小明

廣東省茂名市人民醫院耳鼻咽喉科，廣東茂名 525000

鼻咽癌是我國高發的惡性腫瘤之一，是發病率最高的耳鼻咽喉惡性腫瘤[1]。其發病部位在鼻咽腔頂部和側壁，患者以鼻塞、涕中帶血、聽力下降為臨床癥狀，惡性度較高，預后較差[2]。但是早期鼻咽癌大多對放療的敏感性較高，是治療鼻咽癌的首選治療方法[3]。因此鼻咽癌的早期篩查和診斷是治療的關鍵。病理檢查雖然是鼻咽癌確診的金標準，但是因其屬于有創檢查，所以不能用來作為篩查手段[4-5]。鼻咽部滲液腫瘤細胞原血紅素（TCPH）a/b/c作為鼻咽癌的生物標志因子，是目前鼻咽癌篩查的主要標志物，為了貫徹鼻咽部滲液苯胺藍reset技術對鼻咽癌篩查和診斷價值，本院進行了相關研究，以便為后續的臨床工作提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選擇2015年1月～2017年1月至我院診斷為鼻咽癌的患者100例作為實驗組，所有患者均經病理檢查確定診斷，本次試驗經本院醫學倫理委員會批準，患者知情同意。其中男64例，女36例，年齡 35～ 74歲，平均（42.3±10.5）歲。隨機選擇同期至我院耳鼻喉科檢查，患有易鼻咽部出血但非鼻咽癌的患者100例作為對照組。其中男 66例，女 34例，年齡 32 ～ 76歲，平均（42.8±11.1）歲。其中外鼻息肉51例，鼻腔血管瘤22例，鼻中隔偏曲27例。兩組患者性別、年齡差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。所有患者均對本次研究知情同意。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 所有患者均行鼻咽部滲液苯胺藍染色技術檢查TCPH。首先選擇適宜的鼻咽拭子從鼻腔置入至鼻咽部位，左右各旋轉180°，再按鼻咽后壁、咽鼓管咽口、咽鼓管園枕、咽隱管的順序擦拭，取得鼻咽部滲液0.5～1mL，通常要求采樣拭子全部濕潤即可。對于過度敏感影響采樣的患者，可以給予適量局麻，或者在間接鼻咽鏡、鼻內鏡下進行采樣。將采樣后的拭子插入樣本瓶保存液，輕輕攪動，將鼻咽部滲液和樣本保存液均勻混合，取得樣本液。向樣本管內依次加入試劑A、試劑B各0.5mL，蓋好管塞后，混勻樣本液與試劑，靜置5min，觀察反應液顯色情況，與比色板比對得到最終結果。如果結果顯示不變色，則判定為陰性；顯示淡藍色，則判定可疑陽性；顯示為藍色，則判定為陽性；顯示深藍色，則判定為強陽性。如果出現粉色或黃色，說明樣本內粘液過多，再延長5min觀看結果。如果標本即刻顯示深藍色，然后變成深黃或者紅棕色，則說明標本內有血液混合，判斷為強陽性。強陽性和陽性結果判斷為陽性診斷結果；可疑陽性和陰性結果判定為陰性診斷結果。

1.2.2 分析指標[6]以病理診斷結果為最終診斷，觀察實驗組TCPH檢測的陽性診斷結果，靈敏度、特異度以及陽性診斷符合率。觀察兩組患者TCPH檢測的陽性結果是否有統計學差異。

1.3 統計學處理

用SPSS19.0統計學數據處理軟件處理研究中所有相關數據，計量資料用（±s）表示，并采用t檢驗，計數資料采用（n，%）表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 病理診斷結果

經過病例診斷后有100例鼻咽癌患者，鼻咽部深夜TCPH檢測陽性為31例，陽性65例，可疑陽性1例，陰性結果3例，共計陽性96例，陰性結果4例，陽性率為96.00%，陽性診斷符合率為96.00%。其陽性診斷符合率與病理診斷無明顯差異（χ2=2.296，P=0.130）。

2.2 兩組患者TCPH檢測結果比較

病理診斷為鼻咽癌與鼻炎檢查無異常發現或非癌病例TCOH檢測率計較，具有統計學差異（P＜0.05）；對照組患者TCPH強陽性患者2例，陽性患者14例，可疑陽性患者16例，陰性患者68例，共計陽性患者16例，陽性率16.00%，陰性患者84例，陰性率84.00%。實驗組患者TCPH陽性率為96.00%，明顯高于對照組患者16.00%，且差異有統計學意義（P＜ 0.05），詳見表 1 ～ 2。

表1 對照組鼻咽部深夜TCPH檢測結果

表2 兩組患者TCPH檢測結果比較[n（%）]

3 討論

鼻咽癌是耳鼻喉科常見的惡性腫瘤，具有較高的惡性度，預后不佳，有數據統計，對放療不敏感的鱗狀細胞癌的5年存活率為0～10%，而對放療敏感的淋巴上皮癌5年存活率約30%[7-8]。因此鼻咽癌早期診斷，早期治療就成為改善患者預后的關鍵。鼻咽癌的診斷以術后病理診斷作為最終診斷結果。但是這種檢查方式無法應用于鼻咽癌的篩查中。病理活檢雖然方法簡便，但是由于取材部位，假陰性率較高，陽性準確率低[9]。對于頸側淋巴結腫大的患者可以進行淋巴結細胞學活檢，但是對于初期無淋巴結轉移的患者無法使用[10]。近年來細針抽吸細胞學檢查的臨床應用為提高細胞學檢驗的準確率提供了新的途徑，但是對于部分初期，病變部位較小的患者仍然不夠準確[11]。內窺鏡、CT、MRI等影像學檢查雖然能確定腫瘤的位置結構，但是對于早期的篩查效果不佳[12]。因此尋找一種準確性較高標志物就成為診斷的重點。

原血紅素是存在與組織滲液中的一種物質，由腫瘤細胞所釋放，是特異性的腫瘤標志物。因此，對局部組織滲液中的原血紅素含量進行測定，能夠對該組織是否有癌變細胞進行早期篩查。原血紅素是血紅素存在于人體內的一種形式，同時也是血紅素結合蛋白的活性基。依據其結構和功能共計有a、b、c三種分型，在腫瘤發生過程中，原血紅素a、b、c會被釋放出來，因此能夠作為腫瘤標志物[13-14]。其釋放過程尚未完全明確，但是目前認為是致癌因素導致細胞的代謝發生異常，產生高代謝水平，使微環境處于高氧化和高間質壓力之下，在這種情況下，大量產生的自由基會對線粒體造成氧化損傷，使線粒體基膜中的血紅素結合蛋白釋放出原血紅素。通常狀況下檢測結果如果為陰性，則表示細胞無異變，如果為可疑陽性，則表示細胞的代謝發生了異常變化，可能屬于危險人群范疇[15]。如果檢測結果為陽性，則代表細胞已經發生了代謝異常，需要高度警惕惡變發生的可能性。

TCPH因為本質是酶樣物質，所以具有過氧化酶樣作用，因此在實際檢測中往往采用苯胺藍染色法進行的定。研究已經發現，TCPH的測定結果與鼻咽部上皮細胞的癌變程度是正相關。在檢驗過程中，使用脂溶性較強的物質進入細胞和細胞器中，這種物質發生氧化還原反應后，所得到的產物能夠和TCPH中的鐵離子相互結合，最終形成藍色的沉淀物。從而發生染色反應。因此最終得到的顏色越藍，說明滲液中的TCPH濃度越大。如果得到的并非藍色，則說明滲液中無TCPH，以確定為陰虛結果。

從本次研究中看，實驗組患者100例病理診斷為鼻咽癌患者，TCPH診斷陽性96例，陰性結果4例，陽性率為96.00%，陽性診斷符合率為96.00%。病理診斷為鼻咽癌與鼻炎檢查無異常發現或非癌病例TCOH檢測率計較，差異有統計學意義（P＜0.05）；其陽性診斷符合率與病理診斷無明顯差異（χ2=2.296，P=0.130）。說明鼻咽部滲液苯胺藍染色技術所檢測到的TCPH結果具有較高的陽性率，能夠對鼻咽癌患者做出早期提示。從兩組的比較上來看，實驗組患者TCPH陽性率為96.00%，明顯高于對照組患者16.00%，且差異有統計學意義（P＜0.05），說明非鼻咽癌患者的TCPH檢測陽性率明顯降低，因此在鼻咽癌早期篩查中具有重要的臨床價值。

綜上所述，鼻咽部滲液苯胺藍染色技術對鼻咽癌篩查具有重要的診斷價值，操作簡便，對患者無損傷，患者容易接受，且具有較高的陽性準確率，因此能夠為后續的臨床工作提供可靠依據。但是這種檢查方式仍然有一定的假陽性和假陰性結果，所以對于疑似病例應進行詳細的檢查才能確定診斷。