乳腺癌組織中血管內皮生長因子C及其受體FLT-4表達與淋巴結轉移的關系

周紅林，岳文彬，趙保平，李偉芳

( 濮陽市油田總醫院腫瘤二科，河南 濮陽 457000)

乳腺癌是發生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，腫瘤細胞生長、增殖依靠于淋巴結的轉移。轉移是惡性腫瘤最常見的生物學行為，大部分惡性腫瘤患者均因惡性腫瘤向不同器官轉移而最終死亡，故可知轉移是導致惡性腫瘤患者死亡的重要原因。淋巴結轉移是乳腺癌細胞生長、增殖過程中的重要載體，而在這一過程中血管內皮生長因子C(vascular endothelial growth factor C，VEGF-C)及其受體FLT-4高表達可能發揮了一定的作用[1]。為進一步研究VEGF-C和FLT-4的表達與淋巴結轉移的關系，選取我院47例乳腺浸潤性導管癌患者與30例健康體檢者正常乳腺標本進行研究，現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取我院2016年6月至2017年2月收治的乳腺浸潤性導管癌患者47例作為研究組，均切取乳腺浸潤性導管癌標本，所有患者之前均未接受過其他形式的化療、放療，年齡18～58(37.9±5.4)歲，均為女性患者。其中32例患者發生淋巴結轉移，15例未發生淋巴結轉移；病理學分級：Ⅰ級12例，Ⅱ級18例，Ⅲ級17例。選取同期在我院接受健康體檢者30例作為正常組，采集乳腺組織。2組研究對象的年齡、體質量等各項基本資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法利用美國Santa Cruz公司的VEGF-C和FLT-4多克隆抗體進行免疫組化染色，免疫組化染色S-P試劑盒、DAB試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。標本留取之后進行石蠟包埋，對其連續切片，切片厚度為4 μm，根據試劑盒說明書進行相應操作。微波抗原修復時一抗的工作濃度是1100，利用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照，將已知陽性的結腸癌組織切片作為陽性對照。

1.3診斷標準以改良SHIMIZU法為依據進行結果判定：陽性著色判定標準為通過顯微鏡觀察細胞質內有棕黃色顆粒，結合染色強度和著色范圍進行半定量處理，在200倍顯微鏡下隨機選取觀察視野5個，著色范圍為陽性染色細胞在視野內所有細胞中所占百分比，其積分相乘范圍為：0分：≤1%；1分：>1%～20%；2分：>20%～50%；3分：>50%。著色強度積分為：0分：無著色；1分：淺著色；2分：深著色。著色強度、著色范圍積分乘積為表達強度積分，陰性為積分<2；弱陽性：為2～<3；陽性：3～<4；強陽性：≥4。

1.4統計學處理采用SPSS 17.0進行數據分析，計數資料用百分數表示，比較用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2　結果

2.12組VEGF-C、FLT-4表達的比較VEGF-C主要在細胞質中表達，細胞膜和細胞核未染色；FLT-4主要在瘤巢周圍細胞間質中表達，細胞質未染色。研究組VEGF-C和FLT-4陽性表達率分別為76.6%、61.7%，顯著高于正常組的0.0%、0.0%，差異均有統計學意義(χ2=29.87、19.67，P均<0.05)。見表1。

表1　2組乳腺癌組織中VEGF-C、FLT-4表達的比較　n(%)

注：2組VEGF-C、FLT-4比較，χ2=29.87、19.67，P均<0.05

2.2乳腺癌組織中VEGF-C、FLT-4表達與淋巴結轉移的關系淋巴結轉移組的VEGF-C和FLT-4陽性表達率分別為87.5%、81.3%，顯著高于淋巴結未轉移組的53.3%、46.7%，差異均有統計學意義(χ2=4.88、4.30，P均<0.05)。見表2。

表2　乳腺癌組織中VEGF-C、FLT-4表達與淋巴結轉移的關系　n(%)

注：淋巴結轉移與淋巴結未轉移組VEGF-C、FLT-4比較，χ2=4.88、4.30，P均<0.05

3　討論

乳腺癌是臨床常見惡性腫瘤，女性患者居多，占全部患者的99%。一旦乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性，細胞之間連接松散，就很容易發生脫落[2]，腫瘤細胞脫落后會隨著血液循環或淋巴液擴散至患者全身，形成血行和淋巴結轉移，波及重要臟器，危及患者生命，目前乳腺癌已經成為社會的重大公共衛生問題，嚴重威脅著女性身心健康和生命安全。

VEGF及其受體在正常組織中不表達或表達量很低，主要集中于血管內皮細胞，因此，測定VEGF及其受體FLT-4的組織表達情況可以了解該組織血管增生程度和其在腫瘤組織病理變化中所起的作用[3]。FLT-4是一種新發現的VEGF受體，具有獨特分子結構和復雜的信號傳導途徑，主要參與淋巴管、血管的形成，最終介導腫瘤的淋巴及血行轉移[4]；研究[5]發現，FLT-4胚胎早期主要在淋巴管叢胚胎靜脈的發芽處，但特異性表達于胚胎發育的后期、正常成體以及腫瘤組織的淋巴管內皮細胞中。FLT-4多是在淋巴管內皮細胞上呈現特異性表達。VEGF-C和FLT-4是VEGF的同源物，VEGF-C作用于相應的受體FLT-4，引發相應信號傳導途徑，促進乳腺癌細胞血管生成和淋巴結轉移[6]。研究[7]發現，腫瘤細胞在分泌VEGF-C之后，FLT-4被絲氨酸蛋白纖溶酶等水解后變成FLT-4活性形式，該形式的FLT-4和FLT-4(在淋巴管內皮細胞上表達)之間的親和力與原VEGF-C相比升高400倍，而VEGF-C和FLT-4結合之后可以快速發生磷酸化，能夠對下游信號傳導發揮誘導作用，如可對FLT-4引發的ERK1、ERK2的活化及Shc磷酸化過程予以激活[7-8]，促使淋巴管內皮細胞不斷增生，最終可導致淋巴管發生擴張或增生，促使腫瘤發生淋巴道轉移的風險大幅升高。

本研究結果證明，研究組標本的VEGF-C、FLT-4陽性表達率顯著高于正常組(P均<0.05)，高倍顯微鏡下切片著色顯示VEGF-C主要表達于乳腺癌細胞的細胞質內，而FLT-4主要表達于瘤巢周圍的間質組織內，強陽性的染色主要集中在淋巴結轉移組的淋巴管內皮細胞、血管內皮細胞中。腫瘤組織中新生淋巴管相對較少，而腫瘤組織周邊有較多新生淋巴管，不同淋巴管的管腔形態及增大程度均不一致，且管腔中可以看到存在的瘤栓。目前，對瘤周淋巴管增多的原因有不同觀點，一種觀點表示瘤周淋巴管增多是因為淋巴管增生所致，而也有人認為正常生理功能下只有一些淋巴管參與到淋巴液分泌及運輸過程，其余大多數淋巴管處于靜息坍陷狀態，在腫瘤浸潤生長過程中儲備狀態中的淋巴管不斷擴張，最終造成瘤周淋巴管的數量不斷增加。本研究結果還顯示，淋巴結轉移組的VEGF-C、FLT-4陽性表達率顯著高于淋巴結未轉移組(P<0.05)，提示乳腺癌組織中VEGF-C、FLT-4的高表達在淋巴結轉移過程中起到促進作用。

總之，乳腺癌組織中VEGF-C和FLT-4的高表達能夠促進乳腺癌患者區域淋巴結的轉移，VEGF-C和FLT-4可能成為新的抗乳腺癌治療藥物靶點，阻斷VEGF-C和FLT-4的結合，抑制信號傳導通路，可能會有效阻滯乳腺腫瘤的增殖、轉移。