肥胖及超重不孕婦女抗精子抗體的評價

江歡，李曉紅，朱偉杰

(1.深圳市龍崗區婦幼保健院生殖內分泌科，深圳 518172；2.暨南大學生命科學技術學院生殖免疫研究所，廣州 510632)

肥胖是體內脂肪細胞(adipocyte)數目增多或體積增大，脂肪堆積過多，使體重超過標準體重20%以上的病理狀態。隨著現代生活水平的提高和生活方式的改變，以及體內激素代謝變化的影響，育齡婦女的肥胖率逐漸升高[1]。肥胖參與了女性不孕的病因學發生和發展[2]。脂肪細胞具有內分泌作用，通過分泌多種脂肪細胞因子(ACK)影響女性生殖激素的合成和代謝。肥胖婦女卵巢內雄激素合成增加，性激素結合球蛋白(SHBG)分泌減少，可導致卵巢的卵泡發育受阻或閉鎖，發生排卵障礙和不孕[3]。

脂肪細胞與免疫反應關系密切，多種ACK可以影響機體的免疫功能，參與機體內炎性反應的過程[4]。肥胖通常伴隨著機體的慢性炎癥狀態，這種炎癥的發生發展與多種免疫細胞密切相關，如T淋巴細胞、B淋巴細胞、自然殺傷細胞和巨噬細胞等，因此，肥胖者普遍存在不同程度的免疫紊亂[5]。抗精子抗體(ASA)是機體免疫系統針對精子抗原產生的特異性抗體，是引起女性免疫不孕的原因之一[6]。肥胖婦女體內多種免疫因子高表達，機體處于亞炎癥狀態，是否更易被精子抗原激起免疫反應尚無統一觀點。本研究檢測了肥胖及超重不孕婦女體內的ASA水平，為探討ASA是否介導肥胖婦女的生育力降低提供參考資料。

資料與方法

一、研究對象

收集2017年2～12月于深圳市龍崗區婦幼保健院生殖內分泌科的就診的190例不孕婦女為研究對象，年齡26～35歲，不孕年限2～7年。根據世界衛生組織(WHO)診斷標準，按照不同的體重指數(BMI)分成3組：體重正常組(A組)：BMI≤24 kg/m2，90例；超重組(B組)：24 kg/m2

二、研究方法

收集3組婦女的血清標本，進行血清性激素水平檢測，并采用間接免疫珠試驗(iIBT)檢測血清ASA水平。免疫珠為抗IgG和IgA型(Irvine Scientific，美國)。ASA檢測程序按WHO精液分析手冊方法進行。洗滌后精子懸液進行1∶5稀釋，37℃孵育60 min，用含0.3%牛血清白蛋白的DMEM培養液(GIBICO，美國)洗滌孵育后精子2次，調節精子懸液為20×106/ml(指活動精子)。取5 μl精子懸液置于玻片上，加入5 μl免疫珠，混勻。采用相差顯微鏡400倍鏡檢查，觀察200個活動精子，以黏附免疫珠的活動精子數>50%為陽性；以活動精子數20%～49%為弱陽性，<20%為陰性。每次實驗均設陽性及陰性對照。

三、統計學分析

結 果

一、3組患者一般資料的比較

3組患者的平均年齡、不孕年限比較，C組有略高于其他兩組的趨勢，但差異無統計學意義(P>0.05)；3組患者的BMI比較，組間差異有統計學意義(P<0.05)(表1)。

表1 三組患者一般資料比較(-±s)

注：與A組比較，*P<0.05；與B組比較，#P<0.05

二、3組患者血清ASA水平比較

A組90例患者中檢出1例ASA-IgG陽性者，陽性率為1.1%；B組和C組沒有檢出ASA-IgG陽性者。A、B和C組分別檢出2例、1例和1例ASA-IgG弱陽性者，弱陽性率分別為2.2%、1.6%和2.6%。3組的弱陽性率比較，差異無統計學意義(P>0.05)(表2)。3組均沒有檢出ASA-IgA陽性者。

表2 三組患者血清ASA水平比較 [n(%)]

討 論

人體內的脂肪細胞分泌逾百種ACK[7]，其中大部分ACK具有激素和免疫刺激作用，可以干擾女性正常生殖內分泌功能，改變機體的免疫功能[8]，導致肥胖婦女處于不同程度的亞炎癥狀態。精子對女性而言是一種同種異體抗原，ASA是女性免疫不孕的原因之一[9-12]，當女性生殖道的防御機制受到破壞或機體免疫系統失衡時，免疫系統可針對精子抗原發生特異性免疫應答，產生ASA。闡明肥胖婦女是否更易對精子抗原致敏，有助于進一步分析肥胖不孕婦女的不孕原因及開展針對性治療。

根據WHO精液檢查與處理手冊的標準，只有當50%或更多的活動精子黏附有免疫珠時，ASA介導的免疫不育的診斷方可成立。本研究中超重及肥胖組婦女血清ASA-IgG陽性率為0，且這兩組ASA-IgG弱陽性率也較低(分別為1.6%和2.6%)，提示ASA可能不是介導肥胖婦女不孕發生的主要因素，肥胖婦女不孕癥的發生可能與肥胖引起的免疫功能紊亂關系不大。正常情況下女性對精子抗原的多重防御機制及生殖道粘膜上皮的完整性，能夠避免進入生殖道的精子誘發免疫反應。當炎癥、損傷等理化因素使生殖道局部黏膜的通透性增加，精子抗原暴露于免疫系統，而且免疫防御機制受到破壞或失平衡時，精子抗原則可以刺激機體免疫系統誘發局部或全身免疫反應，產生ASA[13-15]。肥胖可改變細胞免疫的功能狀態[5]，引起內分泌和代謝紊亂，但如果沒有引起女性生殖道損傷或粘膜損傷，可能并不增加女性對精子抗原的體液免疫反應。另一方面，本研究中的3組婦女，其平均年齡和不孕年限比較，差異并無統計學意義(P>0.05)；體重正常組檢出了1例ASA-IgG陽性患者，2例ASA-IgG弱陽性患者；且3組間的ASA-IgG弱陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)，提示不論婦女肥胖與否，均存在被精子致敏的可能性[13]。因此，雖然本研究結果并未提示ASA產生與肥胖婦女不孕癥相關，但因為樣本量較少，結果可能存在一定偏倚，且體內低水平的ASA是否對女性生殖存在潛在干擾，尚需后期擴大樣本量后深入探討。

子宮頸是精子在女性生殖道中遷移的第一道選擇性生理屏障，也是女性生殖道中局部精子免疫的主要活性部位。若子宮頸的局部免疫防御機制受到破壞或失平衡時，可以對外部抗原包括精子抗原失去中和及調理作用[16]。臨床上一些不孕婦女的宮頸黏液中檢出ASA，ASA可以抑制精子穿過宮頸黏液[17-18]。本研究中沒有對3組不孕婦女獲取宮頸黏液檢測ASA，是出于以下考慮：(1)宮頸局部ASA檢測需收集患者排卵期宮頸黏液標本，肥胖不孕婦女多數存在排卵障礙，短期內難以收集合適的標本用于檢測；(2)雖然精子抗原刺激女性生殖道粘膜產生局部ASA與循環性ASA產生并不一致，但不孕女性外周血循環中ASA陽性率及滴度多高于宮頸粘液中的檢測值，且更易于操作[19]。此外，本研究中超重及肥胖組婦女外周血ASA的檢測結果均為陰性，故未再行3組不孕婦女宮頸黏液ASA水平的檢測，所存在的不足亦有待于今后進一步完善實驗設計加以探討。

綜上所述，本研究結果提示ASA不是介導肥胖不孕婦女生育力下降的主要因素，但個別正常體重和超重、肥胖的不孕婦女外周血標本中可檢測出低水平的ASA。體內低水平的ASA是否對女性生殖存在潛在干擾，以及脂肪細胞的分泌和免疫功能狀態與肥胖不孕婦女生育力的相互關系均有待于后期進一步研究探討。