一例雞傳染性支氣管炎的診斷與防治

王麗輝

（重慶市畜牧科學院，重慶 402460）

雞傳染性支氣管炎病是由冠狀病毒科冠狀病毒屬雞傳染性支氣管病毒（IBV）感染引起的，主要通過呼吸道感染[1-2]。其潛伏期短、發病快，多發于雛雞，雛雞感染會繼發引起其他病菌感染，以呼吸道癥狀和生產性能下降為主要特征，臨床上多表現為呼吸困難、假母雞、腎炎及產蛋量和蛋品質下降[3-5]。

雛雞感染癥狀多以呼吸道癥狀為主，產蛋雞感染此病，以產蛋率下降、蛋殼和蛋品質下降為主，給養殖戶帶來的損失更大[6-7]。

試驗針對重慶某雞場的部分發病雞，經臨床診斷和對病死雞的剖檢初步診斷為雞傳染性支氣管炎病，并對病死雞的氣管和腎臟的病料進行RTPCR診斷，確診為雞傳染性支氣管炎。我國此前就有雞傳染性支氣管炎病的報道，其在不同地區均有發生，并且雞傳染性支氣管炎病毒的血清型眾多，流行毒株也有地域差異[8-10]。

1 發病情況

重慶某養殖場140日齡的海蘭褐殼蛋雞4 000只，由于氣溫驟降，引起雞群應激反應，雞群中少數雞表現精神不振、采食和飲水下降、張口呼吸、甩鼻、羽毛粗亂、產蛋量下降癥狀，病雞出現消瘦、拉稀，部分癥狀嚴重的雞只死亡。

2 病理剖檢

對死亡雞只進行剖檢，發現鼻內有黏液，氣管環出血或氣管內有黏液性分泌物，卵泡充血、出血，腎臟腫大、表面有尿酸鹽沉積，呈現花斑腎，見圖1。

圖1 花斑腎

3 實驗室診斷

依據臨床發病情況和病理剖檢可初步進行診斷，進一步診斷應進行實驗室RT-PCR診斷。

3.1 病料處理

無菌采集3份病死雞的氣管和腎臟，剪碎，按1∶5的比例加入無菌生理鹽水進行研磨，研磨后的病料反復凍融3次后，3 000 r·min-1離心15 min，取上清液。

3.2 引物的設計與合成

依據《GB/T 23197-2008雞傳染性支氣管炎診斷技術》，在寶生物工程（大連）有限公司合成雞傳染性支氣管炎病毒PCR引物：反轉錄引物5'-AGCAAAAGCAGG-3'，所用引物序列見表1。

表1 雞傳染性支氣管炎基因片段RT-PCR擴增引物

3.3 RNA提取及反轉錄

分別取3份上清液250 μL，按照TRIZol LS Regent操作方法提取病毒RNA，將提取的RNA進行反轉錄，反轉錄總體積為20 μL，20 μL反應體系為：RNA模板7 μL，10 pmol·L-1反轉錄隨機引物1 μL，2.5 mmol·L-1dNTP 4 μL，65 ℃水浴5 min、冰浴 2 min 后，加入 5×Buffer 4 μL，0.1 mol·L-1DTT 2 μL，RNA酶抑制劑1 μL，37 ℃ 2 min，加入M-MLV反轉錄酶1 μL，37℃水浴50 min，70℃水浴15 min，將反轉錄后的cDNA置于-20℃保存。

3.4 RT-PCR擴增

PCR混合引物為4PS：包括兩對引物（Ms/Mx和3's/3'x）分別針對傳染性支氣管炎病毒（IBV）基因組的M基因及基因組3'末端的非編碼區，這兩個基因區間保守性強。該混合物引物中，Mx/Ms引物濃度為4 pmol·μL-1，3's/3'x的引物濃度為5 pmol·μL-1。

PCR反應體系為：無RNase水18.5 μL，10×PCR Buffer 2.5 μL，12.5 mmol· L-1dNTPs 2 μL，4PS PCR混合引物1.5 μL，2.5U Taq酶0.5 μL，混勻后，加入反轉錄后的cDNA模板2 μL，混勻。同時，設立以傳染性支氣管炎病毒M41株的cDNA為模板的陽性IBV病毒對照和以DEPC水為模板的陰性對照。

PCR反應程序為：94℃ 3min，94℃ 40 s，53℃30 s，72℃30 s，30個循環；72℃7 min。

3.5 電泳檢測

待PCR反應結束后，每個PCR樣品取5 μL于含0.5 μg·mL-1EB的2.0%瓊脂糖凝膠孔中電泳，同時加入5 μL的1 000 bp的Mark作為參照，在120 V恒壓電泳中20 min，取凝膠置紫外成像儀觀察。電泳檢測結果見圖2。由圖2可知，病料1和2可見清晰的目的條帶，為雞傳染性支氣管炎病毒陽性，病料3為陰性。

圖2 PCR電泳結果

4 治療和預防

4.1 治療

對發病雞只進行隔離治療，使用抗生素類藥物進行緊急治療，鏈霉素和復方新諾明按使用說明書2～3倍劑量接種治療。未發病的雞群，進行新支二聯苗的4倍劑量接種。

4.2 預防

4.2.1 疫苗接種

可根據雞場附近的流行毒株選用適用的疫苗，進行科學的免疫[11-12]。雛雞的基礎免疫采用活疫苗免疫，加強免疫采用活疫苗和滅活疫苗聯合免疫。雞傳染性支氣管炎病的免疫程序建議如下：蛋雞7 d時NDV H120二聯苗2倍量點眼免疫，21 d時NDV H52二聯苗3倍量點眼免疫，56 d時NDV H52二聯苗3倍量點眼免疫，98 d時NDV H52二聯苗4倍量點眼免疫，133 d時NDV H52二聯苗4倍量點眼免疫，以后每隔45 d做1次NDV H52二聯苗4～5倍量點眼免疫；肉雞為1～7日齡分別進行新支的二聯苗2倍量點眼免疫。此外，調查同一地區的幾年雞傳染性支氣管炎的流行趨勢，對選擇疫苗及防控疫病的發生具有重大的經濟意義[13-15]。

4.2.2 科學的飼養管理

雞傳染性支氣管炎病不分季節、不分日齡、不分品種均可發生[16-18]。要進行全進全出的飼養制度，減少持續感染的幾率；在進雛前，對育雛舍進行徹底消毒，做好育雛舍的保溫工作，溫度、濕度要恒定，避免冷、熱應激；提高飼養條件，保證良好的通風，控制飼養密度，適應飼養周期；不同的飼養周期選用合理的飼料配方，增加礦物元素和維生素，提高雞群的免疫力；對進出場區的人員、車輛、物品進行消毒后，才能準入，嚴禁人員串舍，從而降低病毒傳播幾率[19-24]。

5 結論

該雞場在產蛋前未接種過新支二聯苗進行來加強免疫，產蛋后由于溫度變化，導致雞群應激，引起呼吸道癥狀，進而伴隨其他呼吸道疾病的繼發感染，使疫情變得復雜。可依據臨床表現和剖檢進行初步診斷，進一步需用RT-PCR進行診斷，該飼養場在發現病情確診后，緊急進行新支的預防接種，在短時間內緩解了病情[25]。因此，只有對傳染性支氣管炎病的防治進行科學的疫苗接種和飼養管理，才能有效提高養殖的經濟效益。