潔凈區消毒劑的選擇和效力確認

周建華 謝琦 王琪

摘 要 目的：探討化學消毒劑的搭配和使用方法，以提高潔凈區消毒效果。方法：通過表面消毒實驗確認75%乙醇、異丙醇、0.1%新潔爾滅、1% 84消毒液、0.4%酸酚和5%殺孢子劑對各類微生物在玻璃、不銹鋼和彩鋼板上的消毒效力。結果：0.4%酸酚和5%殺孢子劑在三種表面材質上對各類微生物的殺滅效果最佳，0.1%新潔爾滅和1% 84消毒液次之，75%乙醇和異丙醇對芽胞桿菌和霉菌的殺滅效果較差，但腐蝕性最小。結論：在日常清潔中，可以選擇消毒效力最強的0.4%酸酚和5%殺孢子劑交替使用，A級區域內可以選擇75%乙醇和異丙醇交替使用。

關鍵詞 消毒劑 潔凈區 消毒效力

中圖分類號：TQ460.82 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2018）11-0103-04

Selection of disinfectants for clean area and their effectiveness confirmation

ZHOU Jianhua*， XIE Qi， WANG Qi

（SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 200240， China）

ABSTRACT Objective： To study the compatibility and usage of the chemical disinfectants to enhance the effect of disinfection of clean area. Methods： Disinfection efficacy of six disinfectants including ethanol， isopropanol， benzalkonium bromide solution， 84 disinfectant， phenylphenol and sporicide at different concentrations against the tested microorganisms was verified by surface disinfection experiment. Results： Phenylphenol at 0.4% and sporicide at 5% possessed the best effectiveness of disinfection on the surface of all three materials， 0.1% benzalkonium bromide solution and 1% 84 disinfectant were the second， while 75% ethanol and isopropanol did not show good effectiveness of disinfection against bacillus and fungus tested but less corrosivity than the others. Conclusion： Phenylphenol at 0.4% and sporicide at 5% should be alternatively used in daily disinfection while 75% ethanol and isopropanol can be alternatively used in level A clean area.

KEy WORDS disinfectant； clean area； disinfection effectiveness

在無菌藥品生產過程中，為了降低微生物污染的風險，最切實的工作就是針對潔凈區的清潔和消毒。在《藥品生產質量管理規范（2010年修訂）》中，強調了潔凈區清潔和消毒的重要性，并明確指出化學消毒的不可替代性，更規定了所使用的消毒劑種類必須多于一種[1]。

傳統的潔凈區消毒劑選擇一般均采用常見的消毒劑進行搭配使用[2-3]，例如84消毒液、新潔爾滅、洗必泰等，而有些消毒劑被證明無法很好地殺滅能夠形成芽胞的細菌[4]。隨著科技的發展，化學消毒劑的相關技術也在不斷進步[5]，因此，從降低風險的角度出發，必須要保證所選用的消毒劑能夠對各類細菌都起到較好的殺滅效果。

由于潔凈區環境、條件、設備材質的不同，為了更好地降低質量風險，保證消毒效果，不但需要積極嘗試使用新型的消毒劑，并且要對新老消毒劑的消毒效果進行科學的評價[6]，依據評價的結果作出最佳選擇。

消毒劑的消毒效力確認是用來評價消毒劑消毒效果的主要方式，有多種實驗方法，包括采用稀釋實驗法，標準懸浮實驗法，表面消毒實驗法[7]等，各方法均能適用于對消毒劑效力的確認，本研究將以表面消毒實驗法進行消毒劑效力的確認。

1 材料與方法

1.1 設備

ESCO生物安全柜（藝斯高（上海）貿易有限公司）；MIR-254恒溫培養箱（松下冷鏈（大連）有限公司）；XG1.D脈動真空滅菌器（山東新華醫療器械股份有限公司）；0.22 mm無菌過濾器（頗爾過濾器（北京）有限公司）。

1.2 培養基和試驗菌株

胰酪大豆胨瓊脂培養基（上海中科昆蟲生物技術開發有限公司）；沙氏葡萄糖瓊脂培養基、氯化鈉-蛋白胨（廣東環凱微生物科技有限公司）；硫乙醇酸鹽流體培養基、胰酪大豆胨液體培養基（美國默克公司）；D/E肉湯（美國BD公司）。

所有試驗菌株均購自中國食品藥品檢定研究院。將金黃色葡萄球菌（CMCC（B）26003）、銅綠假單胞菌（CMCC（B）10104）、枯草芽胞桿菌（CMCC（B）63501）接種至硫乙醇酸鹽流體培養基于30～35 ℃培養18～24 h；將白色假絲酵母（CMCC（F）98001）接種至沙氏葡萄糖液體培養基于20～25 ℃培養24～48 h；將黑曲霉（CMCC（F）98003）接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養基于20～25 ℃培養7 d，然后用無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（含0.05%吐溫80，pH 7.0）3～5 ml將孢子洗脫并制成菌懸液；上述菌種均用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至濃度為107～108 cfu/ml的菌液。

1.3 消毒劑和中和劑

本實驗所使用的消毒劑和中和劑[8]見表1。

1.4 中和劑驗證實驗

中和劑驗證實驗選用金黃色葡萄球菌作為試驗菌，實驗方法見表2。

1.5 消毒劑效力實驗

實驗按表3分為3組進行，其中實驗組進行3份平行試驗。

按消毒劑效力實驗方法進行操作，其中細菌使用胰酪大豆胨瓊脂培養基，真菌使用沙氏葡萄糖瓊脂培養基，細菌于30～35 ℃下培養3 d，真菌于20～25 ℃下培養5 d，觀察并計數。

消毒劑的表面消毒效力E=lg（陽性對照組菌落計數）-lg（實驗組菌落計數）。當E>3時，即代表該消毒劑在所測試物體表面上可以殺滅99.9%以上的試驗微生物。

1.6 表面材料的處理

表面材料為玻璃、不銹鋼和彩鋼板，均為1 cm×3 cm的長方形薄片。使用0.2 mol/L氫氧化鈉對材料進行浸泡12 h以上，浸泡后清洗并于121 ℃滅菌30 min。

2 結果

2.1 中和劑驗證

以金黃色葡萄球菌為試驗菌，根據表1對中和劑的中和效果進行驗證，結果表明，編號1、6、7、8均無菌生長；編號3、4、5均有菌生長，且菌落數相差在10%以內；編號3、4、5所生長的菌落數都多于編號2菌落數103以上（表4），表明所選擇的中和劑能夠起到預期的中和作用。

2.2 消毒劑效力

在3種表面材質上的實驗結果見表5。結果表明，75%乙醇和異丙醇作為一種常用消毒劑，對枯草芽胞桿菌、黑曲霉的消毒效果都不理想，對其他微生物的消毒效果也略微弱于其他消毒劑，但這兩種醇類消毒劑不具有腐蝕性，不易對不銹鋼和彩鋼板等金屬材質造成損傷，比較適用于對精密設備和儀器進行消毒。

5%殺孢子劑的消毒效果最好，其次為0.4%酸酚，他們對各類微生物在3種不同表面材質上都能起到很好的殺滅作用。

為了降低潔凈區內各類微生物污染的風險，同時考慮所應用的材質，根據消毒效力確認的結果，日常清潔消毒可以使用0.4%酸酚和5%殺孢子劑交替使用，在A級區內可以使用75%乙醇和異丙醇交替使用進行消毒。

3 討論

由于長時間使用同一種消毒劑會使微生物產生耐藥性，造成消毒效果下降[9]，因此，企業所使用的化學消毒劑不應一成不變。隨著國內外化學消毒劑技術的不斷進步，應當關注相關領域的發展，以便不斷提高潔凈區環境控制的管理水平。

對于消毒劑的優化選擇有時不僅僅局限于其消毒效力，還應該從消毒劑本身的質量控制角度出發[10]，在日常環境監測數據統計和分析的基礎上，選擇更適合當前環境的消毒劑，同時做好相應的確認和驗證，保證消毒劑的使用效果能夠達到預期，并且在應用后對使用情況進行監測和回顧分析，有效降低潔凈區微生物污染風險。

參考文獻

[1] 藥品生產質量管理規范（2010年修訂）（衛生部令第79號）[EB/OL]. （2011-01-17）[2018-01-02]. http：//www.sda.gov. cn/WS01/CL0053/58500.html.

[2] 張卓娜， 邱天， 羅嵩， 等. 化學消毒劑有效成分應用情況調查[J]. 中國消毒學雜志， 2017， 34（10）： 925-927.

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[4] 鄭吟秋， 王云川， 何媛， 等. 5 種化學消毒劑對高等級生物安全實驗室消毒效果研究[J]. 中國消毒學雜志， 2017， 34（10）： 905-908.

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[10] 李向梅， 張雪梅， 吳文琦. 制藥企業用化學消毒劑的選擇及使用方法研究[J]. 藥學研究， 2013， 32（5）： 307-308.