三七納豆紅曲復(fù)配對高脂血癥模型大鼠血脂的影響

◎ 楊曉惠，廖秋紅

（湯臣倍健股份有限公司，廣東 珠海 519040）

三七是我國傳統(tǒng)中藥材，具有抗炎、止血、改善腦血循環(huán)、抗腫瘤等藥理活性[1]。三七的主要活性成分是皂苷，目前可獲取的皂苷成分有70多種。其中人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1在改善血液循環(huán)、抗心律失常、抗衰老、抗腫瘤等方面均顯示出一定的藥理作用[2]。納豆是以大豆為原料，經(jīng)納豆芽孢桿菌發(fā)酵而成的一種傳統(tǒng)大豆發(fā)酵食品。納豆中含有納豆激酶、異黃酮、超氧化物歧化酶等多種活性成分，其中納豆激酶能夠有效清除人體血液內(nèi)的血栓[3-4]。研究表明，納豆具有調(diào)節(jié)血脂、調(diào)節(jié)血壓、溶血栓等多種生理功能，可用于預(yù)防和治療心腦血管疾病[5]。紅曲是以大米為原料經(jīng)紅曲霉發(fā)酵而成的一種紫紅色米曲，是傳統(tǒng)藥、食兩用中藥材。紅曲是首先發(fā)現(xiàn)并研究的具有降脂作用的中藥，其有效降脂成分主要為莫奈可林（Monacolin K），為他汀同系物[6-7]。Monacolin K是HMG-CoA還原酶的競爭性抑制劑，通過降低其活性，從而抑制TC的合成[8]。同時，紅曲還含有多種不飽和脂肪酸、氨基酸、異黃酮等，具有降血壓、降血糖等其他重要功能[9]。

心腦血管疾病是當今世界上威脅人類健康的疾病之一，而心腦血管藥物一般具有較大的副作用。所以，充分利用我國豐富的傳統(tǒng)食物和中藥資源，開發(fā)安全且有效的降血脂、預(yù)防心血管疾病的保健食品具有一定的現(xiàn)實意義。三七、納豆與紅曲均有降血脂、改善心血管健康的功效，但對三者研究的重點不同，三七的研究重點在改善血液循環(huán)，納豆的研究重點在于納豆激酶溶血栓，紅曲的研究重點在于降低膽固醇和甘油三酯。將三者合用研制降血脂的保健食品尚未見報道，為研究三者合用協(xié)同降血脂作用，本文對三七納豆紅曲復(fù)配物進行降血脂動物實驗研究，為評價其輔助血脂功能提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象

受試樣品：以三七提取物、紅曲粉、納豆粉為原料制成的三七納豆紅曲復(fù)配物，生產(chǎn)批號為201601，人體口服推薦日攝入量為每人1.16 g。其中，三七提取物折合為生藥材1.0 g/d，納豆按納豆激酶計1250 FU/d，紅曲按洛伐他汀計4 mg/d。

1.1.2 實驗動物

SPF級SD雄性大鼠45只，180～220 g，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2013-0002，實驗動物質(zhì)量合格證明號：No.44007200031497。

繁殖飼料：購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，配制標準及營養(yǎng)要求符合GB 14924.2-2001、GB 14924.3-2010標準。

1.1.3 陰性及陽性對照品

陰性對照品與受試物溶媒均為0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）溶液，自行制備。

陽性對照品：舒降之（商品名：辛伐他汀片，生產(chǎn)廠家：Merck Sharp & Dohme (Australia) Pty. Ltd，生產(chǎn)批號：L045609）。推薦的起始劑量為每天5～40 mg，對于因存在冠心病、糖尿病、周圍血管疾病、中風或其他腦血管疾病史而屬于CHD事件高危人群患者，推薦的起始劑量為每天10 mg或20 mg。對于只需中度降低LDL-C的患者，起始劑量為10 mg。

1.1.4 主要儀器和試劑

主要儀器：日立7100全自動生化分析儀，賽多利斯 GP2 100、BP2 100、BP3 100S、BL3 100、TE601-L、TE4 100-L、BS2 24S電子天平。

主要試劑：總膽固醇檢測試劑（生產(chǎn)廠家：浙江伊利康公司，批號：160301），甘油三酯檢測試劑（生產(chǎn)廠家：浙江伊利康公司，批號：151004），低密度脂蛋白膽固醇檢測試劑（生產(chǎn)廠家：購自浙江伊利康公司，批號：161002），高密度脂蛋白膽固醇檢測試劑（生產(chǎn)廠家：購自浙江伊利康公司，批號：161201）。

1.2 方法

1.2.1 實驗設(shè)計

（1）劑量設(shè)計。受試樣品的人體推薦日攝入量為1.16 g（按照成人60 kg體重均值計算），本試驗以人體日推薦量的15、30倍分別作為低、高劑量組，即0.29、0.58 g/kg·BW。辛伐他汀片參照說明書，臨床只需中度降低低密度脂蛋白膽固醇的患者起始劑量為10 mg，本試驗以其起始劑量的30倍作為給藥劑量，即5 mg/kg·BW，空白對照組和模型對照組均給予0.5% CMC-Na溶液。

（2）給藥途徑、頻率、期限。灌胃給藥，每天一次，連續(xù)給藥30 d，給藥容積10 mL/kg。空白對照組和模型對照組均給予等量的0.5% CMC-Na，陽性對照組給予辛伐他汀片。

（3）藥液配制。①受試樣品低劑量組（0.29 g/kg）：藥粉若干，加0.5%CMC-Na溶液配制藥液（濃度29 mg/mL）。②受試樣品高劑量組（0.58 g/kg）：藥粉若干，加0.5%CMC-Na溶液配制藥液（濃度58 mg/mL)。③陽性對照組（5 mg/kg）：辛伐他汀片若干，加0.5%CMC-Na溶液配制陽性對照組藥液（濃度0.5 mg/mL)。

1.2.2 實驗方法

選取檢疫合格的雄性SD大鼠45只按體重隨機分為模型組36只和空白對照組9只，空白對照組給予維持飼料，模型組給予模型飼料建立高脂血癥模型。每周稱量大鼠體重1次。

模型組給予模型飼料2周后，空白對照組和模型組大鼠不禁食采血（眶靜脈叢采血），采血后盡快分離血清，測定TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。模型組和空白對照組比較，TG升高，TC或LDL-C升高，組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），判定模型成立。根據(jù)TC水平將模型動物組隨機分為模型對照組、受試樣品低劑量組、受試樣品高劑量組和陽性對照組各9只。

5組給予相應(yīng)的藥物，空白對照組和模型對照組均給予等量的相應(yīng)溶劑，除空白對照組外，其他各組繼續(xù)給予高脂飼料，并定期稱量體重，給藥30 d后于實驗結(jié)束時不禁食采血，采血后盡快分離血清，測定TC、TG、LDL-C、HDL-C水平，比較給藥組與模型對照組血脂水平的差異。

1.2.3 實驗數(shù)據(jù)處理

采用方差分析，先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值＜0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，P＜0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計。

1.2.4 結(jié)果判斷

（1）各劑量組與模型對照組比較，任一劑量組TC或LDL-C降低，且任一劑量組TG降低，差異均有顯著性，同時各劑量組血清HDL-C不顯著低于模型對照組，可判定該受試樣品輔助降低血脂功能動物實驗結(jié)果陽性。

（2）各劑量組與模型對照組比較，任一劑量組TC或LDL-C降低，差異均有顯著性，同時各劑量組TG不顯著高于模型對照組，各劑量組血清HDL-C不顯著低于模型對照組，可判定該受試樣品輔助降低膽固醇功能動物實驗結(jié)果陽性。

（3）各劑量組與模型對照組比較，任一劑量組TG降低，差異均有顯著性，同時各劑量組TC及LDL-C不顯著高于模型對照組，血清HDL-C不顯著低于模型對照組，可判定該受試樣品輔助降低TG功能動物實驗結(jié)果陽性。

2 結(jié)果與分析

2.1 高脂血癥動物模型的建立

給藥前，與空白對照組相比，36只造模大鼠TC、TG、HDL-C均極顯著升高（P﹤0.05），提示高脂血癥模型造模成功，因此，選用于進行藥物測試。各組組間比較，各項指標（TC、TG、HDL-C、LDL-C）無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），見表1。

表1 給藥前每組血脂指標表（X±SD）

2.2 血脂4項統(tǒng)計分析結(jié)果

給予受試物30后，與空白對照組相比，模型對照組的TC、LDL-C、TG均有顯著升高（P＜0.05），根據(jù)模型判斷標準，表明繼續(xù)給予高脂飼料30 d后，高脂血癥模型繼續(xù)維持至30 d。

與模型對照組相比，陽性對照組TC、TG均顯著降低（P＜0.05），符合藥效評價標準“與模型對照組比較，TC或LDL-C降低，且TG降低，差異均有顯著性，同時HDL-C不顯著降低”，可判定陽性藥物具有輔助降低血脂功能。提示本試驗系統(tǒng)穩(wěn)定，試驗結(jié)果可靠。

與模型對照組相比，受試樣品低劑量組大鼠血脂（TC、TG、LDL-C、HDL-C）無明顯差異（P＞0.05）；受試樣品高劑量組大鼠血脂（TC、TG）降低，有顯著性差異（P＜0.05），同時HDL-C不顯著降低，見表2。

表2 給藥后每組血脂指標表（X±SD）

3 結(jié)論

動物高血脂模型是篩選降血脂藥物最常用的模型之一，用含有膽固醇、蔗糖、豬油、膽酸鈉的飼料喂養(yǎng)動物可形成脂代謝紊亂動物模型，再給予動物受試樣品，可檢測受試樣品對高脂血癥的影響，并可判定受試樣品對脂質(zhì)的吸收、脂蛋白的形成、脂質(zhì)的降解等的影響。

辛伐他汀為羥甲基戊二酰輔酶A（HMG-COA）還原酶抑制劑，抑制內(nèi)源性膽固醇的合成，為血脂調(diào)節(jié)劑。研究表明[10]，辛伐他汀有降低高脂血癥家兔血清、肝臟、主動脈中總膽固醇(TC)的含量，降低極低密度脂蛋白膽固醇（VLDL-C），低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平的作用，辛伐他汀可作為輔助降血脂功能評價的陽性對照藥。

受試樣品是以三七提取物、納豆粉、紅曲粉為原料制成的三七納豆紅曲復(fù)配物。本試驗采用SD大鼠建立高血脂模型，考察受試樣品的輔助降血脂功能，造模成功后，繼續(xù)給予高脂飼料，模型可維持至30天。根據(jù)《保健品輔助降血脂功能評價方法》[11]，判定三七納豆紅曲復(fù)配物輔助降血脂功能動物實驗結(jié)果陽性。表明三七納豆紅曲復(fù)配物具有輔助降血脂功能。