保健食品中合成色素的反相高效液相色譜檢測(cè)法

◎ 班素俠

（沛縣檢驗(yàn)檢測(cè)中心，江蘇 徐州 221600）

保健食品亦稱功能性食品，以補(bǔ)充人體營(yíng)養(yǎng)素為目的。保健食品是一個(gè)特定的食品種類(lèi)，可調(diào)節(jié)人體功能，適于特定人群食用，劑型有膠囊殼、膠囊、片劑，它的食用色素著色好且價(jià)格實(shí)惠，為了使保健食品呈現(xiàn)更為舒服的視覺(jué)效果以及更具吸引力，保健食品經(jīng)常會(huì)采用著色劑。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：檢測(cè)儀、漏斗、天平和色譜柱。檢測(cè)儀使用LC-20，AD配備有二極管的高分離度液相色譜儀，G3垂融漏斗規(guī)格為XS 205，G3砂芯濾板漏斗LC-20AD，C18色譜柱規(guī)格為4.6 mm×250 mm，5 μm以及電子天平和0.45 μm水相過(guò)濾膜。

試劑：UP水（Ultrapure water），源美制造；磷酸二氫銨、甲酸、氨水，均為分析純；甲醇、乙醇，均為色譜純[1]。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)品

亮藍(lán)純度大于99.7%，檸檬黃純度大于91.0%，日落黃純度規(guī)格GBW(E)10003 a，0.5 mg/mL；赤蘚紅純度大于91.7%，誘惑紅純度大于80.0%。

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)液的制備

按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格制備標(biāo)準(zhǔn)液，濃度為1.0 mg/mL，首先取適量需要配制的標(biāo)準(zhǔn)品加入25 mL容量瓶中，并使用水定容，逐漸將溶液調(diào)制為標(biāo)準(zhǔn)濃度。另外需要注意的是，日落黃其標(biāo)準(zhǔn)的儲(chǔ)備溶液與正常溶液濃度不同，濃度為0.5 mg/mL[2]。

1.2.2 混合液的制作配備

混合液需要多種標(biāo)準(zhǔn)液混合在一起，可將既定需要混合的標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行混合，混合時(shí)首先需要用水將其稀釋?zhuān)M(jìn)而制備成不同含量的混合液，分別為2 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL，配好后保存待用。

1.3 色譜條件

色素條件主要觀察色譜柱，其規(guī)格4.6 mm×250 mm，5 μm，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為10 μL。流速l mL/min。具體梯度條件見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相梯度條件表

1.4 樣品處理

稱取一定量的片劑研磨，直到研缽中的片劑磨成均勻細(xì)碎的粉狀后稱樣。除片劑外還有膠囊和膠囊殼，膠囊殼的制作是將膠囊內(nèi)的粉粒狀物全部取出，用棉簽擦拭膠囊殼直至其完全干凈無(wú)粉粒殘留進(jìn)行稱樣[3]。將這些試樣取出一定量倒進(jìn)100 mL小燒杯中，然后注入30 mL的水并將水溫加至溫?zé)嶂翗悠啡芙猓?0 ℃為準(zhǔn)，取1 g聚酰胺粉與水慢慢調(diào)制成粥狀，進(jìn)而倒入方才溶解試樣的溶液中進(jìn)行攪拌。進(jìn)一步將其洗滌，首先用G3垂熔漏斗過(guò)濾過(guò)的60 ℃水洗滌3次，進(jìn)而將甲醇60%與甲酸40%混合好的溶液再洗滌3次，將其洗滌成中性溶液，接著用混合乙醇70%以及氨水20%以及水10%的混合液對(duì)溶液進(jìn)行解吸，一共分4次進(jìn)行，每次需要5 mL，在解吸后用乙酸進(jìn)行溶液中和，進(jìn)而蒸發(fā)定容，最后將溶液處理為5 mL，最后用0.45 μm濾膜對(duì)溶液進(jìn)行過(guò)濾，做液相色譜檢測(cè)。

1.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

每間隔2 h對(duì)標(biāo)準(zhǔn)混合液以液相色譜檢測(cè)法的色譜條件進(jìn)行取樣分析，及時(shí)記錄這6種著色劑組分的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的線性關(guān)系及相關(guān)系數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各種分濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系，以3倍噪聲比確定最低檢出限。線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限見(jiàn)表2。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程、線性范圍及相關(guān)系數(shù)表

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相種類(lèi)與梯度洗脫程序的選用

著色劑中為水溶性則容易在水中溶解，這些溶液其中的理化性質(zhì)都存在一定程度的相似性，尤其水溶性著色劑中的乙酸銨，其水溶性相比其他溶液更為優(yōu)質(zhì)，經(jīng)常會(huì)被當(dāng)作緩沖溶液來(lái)用，但其本身也帶有腐蝕性，且腐蝕對(duì)儀器，有清洗難度。因此為得到更好的分離比，需要根據(jù)GB/T 5009.35-2003，對(duì)流動(dòng)相以及梯度洗脫程序進(jìn)行選用，本次選擇的流動(dòng)相為0.05 mol/L磷酸二氫銨溶液與甲醇，對(duì)其進(jìn)行洗脫，這6種合成色素在分離程度上都呈現(xiàn)較好分離結(jié)果，如圖1、2、3，并且基線平穩(wěn)，靈敏度上也有較高的效果。

圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（50μg/mL）

圖2 某膠囊殼樣品色譜圖

圖3 某片劑樣品色譜圖

2.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

每間隔2 h對(duì)標(biāo)準(zhǔn)混合液以液相色譜檢測(cè)法的色譜條件進(jìn)行取樣分析，及時(shí)記錄這6種著色劑的峰面積并計(jì)算RSD，見(jiàn)表3。

表3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表（峰面積）

2.3 樣品試驗(yàn)結(jié)果及重復(fù)性試驗(yàn)

按照第一部分的樣品處理相關(guān)程序?qū)ζ瑒┮约澳z囊殼、膠囊進(jìn)行處理后進(jìn)行色譜分析，結(jié)果見(jiàn)表4。依照GB 2760-2014所規(guī)定的著色劑標(biāo)準(zhǔn)，可得出測(cè)試的樣品中也就是這6種合成著色劑都符合規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)一超出，見(jiàn)表5。

表4 部分實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果表（單位：g/kg）

表5 片劑樣品重復(fù)性實(shí)驗(yàn)表（單位：g/kg）

3 結(jié)論

本文按照RP-HPLC的方法探討反相高效液相色譜檢測(cè)法，測(cè)試時(shí)采用合成著色劑為樣例，并根據(jù)保健食品本身的特點(diǎn)以及樣劑的劑型的不同進(jìn)行針對(duì)性地檢測(cè)。本次研究所采取的方法易操作且實(shí)驗(yàn)速度上把握良好，混合色素的分離較為順利且結(jié)果上分離度也呈現(xiàn)較好狀態(tài)，樣品穩(wěn)定性上也呈現(xiàn)良好結(jié)果，在回收率上也呈現(xiàn)較為理想的狀態(tài)。因此本次方法適合保健食品不同著色劑各種劑型的分離檢測(cè)。