配方乳粉中低聚果糖的含量測定方法比較

◎ 鄧偉恒，黎 韻，吳國輝，王柳玲，吳俊發

（廣州檢驗檢測認證集團有限公司，廣東 廣州 511440）

低聚果糖作為一種功能性低聚糖，正廣泛使用于食品工業中，其具有促進鈣鐵鎂等的吸收的作用，也能改善腸道功能、增強免疫力。在嬰幼兒配方乳粉中，通常當作膳食纖維而添加到其中?，F行國家標準GB 5009.255-2016《食品安全國家標準 食品中果聚糖的測定》[1]中有具體的方法對食品中果聚糖進行測定。該方法將樣品中蔗糖經蔗糖酶水解成葡萄糖和果糖，再經硼氫化鈉還原成糖醇，多余硼氫化鈉用乙酸中和；再加入果聚糖酶將果聚糖水解成果糖和葡萄糖，利用離子色譜測定其果糖含量，經過換算可得樣品低聚糖的含量。該方法經過驗證，能準確測定配方乳粉中低聚果糖的含量，但同時也有前處理復雜、耗時較長等的缺點。針對這幾點，建立了液相色譜法測定配方乳粉中低聚果糖的含量。

1 實驗部分

本方法以GB/T 23528-2009《低聚果糖》[2]為基礎，通過前處理脫去配方乳粉中脂肪蛋白質等的物質，獲得澄清溶液至液相色譜儀通過示差檢測器進行測定。

1.1 儀器與試劑

2695/2414 WATERS高效液相色譜儀配備示差檢測器，Millipore Milli-Q去離子水發生器。

蔗果三糖（GF2）、蔗果四糖（GF3）和蔗果五糖（GF4）低聚果糖標準品，購自WOKO公司；乙腈（HPLC級），購自CNW公司；亞鐵氰化鉀、乙酸鋅和冰乙酸（分析純）；配方乳粉購自本地超市。

1.2 樣品處理

配制亞鐵氰化鉀溶液（亞鐵氰化鉀10.6 g用水溶解定容至100 mL容量瓶）、乙酸鋅溶液（乙酸鋅21.9 g和3 mL冰乙酸，用水溶解定容至100 mL容量瓶）。稱取5 g配方乳粉，60 ℃溫水溶解，加入5 mL亞鐵氰化鉀溶液和5 mL乙酸鋅溶液，定容至100 mL容量瓶，搖勻，過濾獲得澄清溶液。

1.3 標準曲線

稱取低聚果糖（GF2、GF3和GF4）標準品各0.25 g（精確至0.1 mg），加水溶解并定容至25 mL容量瓶中，保存在4 ℃冰箱中。使用時，用水稀釋配成需要濃度的標準曲線。

1.4 色譜條件

色譜柱：氨基柱（250 mm×4.6 mm i.d., 5.0 μm，安普）；流動相：乙腈+水=75+25（V/V），等度洗脫；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 μL；柱溫：30 ℃；采集時間：40 min。檢測器：示差折光檢測器。

1.5 實驗結果

以分析物的峰面積（y）和對應的質量濃度（x，mg/mL）進行線性回歸計算，得到線性方程和相關系數。在線性范圍0.15～10.0 mg/mL，有良好的線性關系。回歸系數均大于0.999。標準圖譜見圖1。3個標準峰依次為GF2、GF3、GF4。

圖1 低聚果糖標準圖譜圖

樣品圖譜見圖2。樣品在GF2和GF3相對應的出峰時間有響應，得到理想峰形的色譜峰，通過計算，結果與其產品質量明示指標相符。

圖2 樣品圖譜圖

1.6 數據比較

用液相色譜法與國家標準法同時測定8個添加低聚果糖的配方奶粉，結果見表1。

表1 不同方法測定結果比較表

2 結果與分析

根據實驗結果，可見液相色譜法在含量1 g/100 g以上時，檢測得出的數據結果與國家標準法和明示值均接近，相對偏差在10%以內。而測定含量在1 g/100 g以下的樣品時，往往偏差較大。這可能是由于含量過低時，GF2峰受其前面的乳糖峰影響較大，導致GF2的測定數據結果偏小。因為前處理方法沒有對乳糖的處理，而配方乳粉中普遍有很高含量的乳糖，因此會對結果產生較大的影響。經比較可知，液相色譜法和國家標準法均有其自己的優缺點，見表2。

表2 兩種方法優缺點表

3 結語

液相色譜法作為一個低聚果糖國家標準方法的改良，能測出具體GF2、GF3、GF4的數值，方法操作簡單、快速，定量準確，重現性好，適用于大部分配方乳粉的低聚果糖檢測。