食品微生物檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定方法的效果觀察

馬國(guó)善

（遼寧省遼陽縣衛(wèi)生計(jì)生監(jiān)督局，遼寧 遼陽 111200）

近年來，食品安全問題層出不窮，國(guó)家相關(guān)部門開始加大對(duì)食品安全的監(jiān)管力度，食品微生物檢驗(yàn)是保證食品安全工作的重要內(nèi)容之一[1]。以往對(duì)于食品中細(xì)菌總數(shù)的檢驗(yàn)常使用測(cè)試紙片法和計(jì)數(shù)瓊脂傾注皿培養(yǎng)計(jì)數(shù)法，但在實(shí)際應(yīng)用中，易出現(xiàn)細(xì)菌菌落混淆的情況，不利于檢測(cè)菌落總數(shù)，其檢測(cè)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)一定的偏差。本次研究分別采用平板菌落計(jì)數(shù)法、菌落總數(shù)測(cè)定法、TTC培養(yǎng)基法對(duì)110份樣品進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道分析如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：2016年1月至2017年1月，選取疾控中心接收的食品樣品110份進(jìn)行研究，110份食品樣品均來自于疾控中心接收到的食品樣品，分別采用平板菌落計(jì)數(shù)法、菌落總數(shù)測(cè)定法、TTC培養(yǎng)基法3種方法進(jìn)行檢測(cè)。平板菌落計(jì)數(shù)法采用北京陸橋計(jì)數(shù)有限責(zé)任公司的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行檢驗(yàn)；菌落總數(shù)測(cè)定采用美國(guó)3M公司生產(chǎn)的細(xì)菌總數(shù)測(cè)試片進(jìn)行檢驗(yàn)；TTC培養(yǎng)基法由北京陸橋計(jì)數(shù)有限責(zé)任公司提供，TTC瓊脂按照體積比100∶1的比例在瓊脂中加入0.5%的氯化三苯四氮唑，濃度為0.005%。

1.2 方法

1.2.1 平板菌落計(jì)數(shù)法：采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法GB4789.2-2010 進(jìn)行檢測(cè)，無菌狀態(tài)下取25 g食品樣品放入裝有225 mL生理鹽水的錐形瓶中，輕輕搖晃使其混勻，采用無菌吸管抽取1∶10樣品勻液1 mL慢慢注入到裝有9 mL生理鹽水的試管內(nèi)，輕輕搖晃使其混勻，并按照上述方法取1∶1000和1∶10000的樣品勻液。采用吸管吸取適宜稀釋度的樣品勻液分別注入到2個(gè)無菌平皿中，同時(shí)取1 mL空白稀釋液作為空白對(duì)照，然后將溫度為46℃的計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基15 mL注入到平皿中，輕輕搖晃使其混勻，待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，放入到恒溫（36±1） ℃中進(jìn)行（48±2）h的培養(yǎng)。

1.2.2 菌落綜述測(cè)定方法：將測(cè)試片放于水平臺(tái)面上，去除附著的薄膜，采用與平板菌落計(jì)數(shù)法相同的方法制作不同稀釋度的樣品液放置于測(cè)試片中央位置，食品樣品各取1 mL，然后將蓋膜蓋好，待培養(yǎng)基凝固后，壓緊紙片，使樣品均勻分布在測(cè)試片上，每個(gè)稀釋度樣品均進(jìn)行2片接種，放置于恒溫（36±1） ℃中進(jìn)行（48±2）h的培養(yǎng)。

1.2.3 TTC培養(yǎng)基法：將1 mL濃度為0.5%的TTC溶液放入到100 mL瓊脂培養(yǎng)基中，制備TTC瓊脂培養(yǎng)基濃度為0.005%，接種與培養(yǎng)方法與菌落總數(shù)測(cè)定方法相同。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：數(shù)據(jù)資料用SPSS19.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用（%）表示，用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

平板菌落計(jì)數(shù)法、菌落總數(shù)測(cè)定法、TTC培養(yǎng)基法3種檢驗(yàn)方法測(cè)定出的不合格率分別為9.09%、8.18%、10.00%，3種結(jié)果對(duì)比無明顯差異（P＞0.05）。見表1。

表1 對(duì)比3種不同檢測(cè)方法的不合格率

3 討 論

食品安全一直是我國(guó)民生關(guān)注的重點(diǎn)，近來年，食品安全問題頻繁出現(xiàn)，嚴(yán)重威脅了人們的飲食健康。食品在加工、運(yùn)輸、儲(chǔ)存中會(huì)接觸到各種微生物，導(dǎo)致食品變質(zhì)，是威脅人們健康的重要因素之一。相關(guān)部門指出，將采用平板計(jì)數(shù)瓊脂代替營(yíng)養(yǎng)瓊脂，同時(shí)對(duì)可能存在受損生物細(xì)胞存在的食品進(jìn)行抽樣檢測(cè)，以此來保證食品安全[2]。

目前對(duì)食品中微生物菌落總數(shù)檢測(cè)中，常使用平板菌落計(jì)數(shù)法、菌落總數(shù)測(cè)定法、TTC培養(yǎng)基法3種檢驗(yàn)方法，3種方法在本次研究中，其結(jié)果沒有太大差異，從應(yīng)用價(jià)值上來說，3種檢驗(yàn)方法都可推廣使用。本次研究中，平板菌落計(jì)數(shù)法、菌落總數(shù)測(cè)定法、TTC培養(yǎng)基法3種檢驗(yàn)方法測(cè)定出的不合格率分別為9.09%、8.18%、10.00%，數(shù)據(jù)對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在實(shí)際操作中，TTC培養(yǎng)基法菌落、平板菌落計(jì)數(shù)法、菌落總數(shù)測(cè)定方法都具有較高的檢出率。由于部分細(xì)菌體積小，生長(zhǎng)在瓊脂內(nèi)部，很難用肉眼觀察到，所以在計(jì)數(shù)中，往往不準(zhǔn)確。大多數(shù)菌類都含有脫氫酶，TTC可以檢測(cè)脫氫酶脫下的氫，出現(xiàn)顏色由白變紅的現(xiàn)象，起到對(duì)細(xì)菌染色的目的，以便檢驗(yàn)人員進(jìn)行仔細(xì)觀察并計(jì)數(shù)[3]。另外，為了進(jìn)一步提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，可從以下幾個(gè)方面入手：①提高檢驗(yàn)人員操作水平，規(guī)范檢驗(yàn)操作，保證檢驗(yàn)工作的有效性。②嚴(yán)格控制檢驗(yàn)室內(nèi)環(huán)境，注重培養(yǎng)皿溫度與濕度，定期對(duì)檢驗(yàn)儀器進(jìn)行校對(duì)，保證檢驗(yàn)工作的準(zhǔn)確性。③嚴(yán)格把控檢驗(yàn)樣品劑量與質(zhì)量，將配置好的樣品勻液妥善保存，放置于通風(fēng)、干燥的環(huán)境中，對(duì)于需要冷藏的樣品，控制其溫度。④對(duì)于所有檢驗(yàn)樣品，注明其使用的有效時(shí)間，超出使用期限的樣品不得參與檢驗(yàn)。

綜上所述，平板菌落計(jì)數(shù)法、菌落總數(shù)測(cè)定法、TTC培養(yǎng)基法3種檢驗(yàn)方法均具有較高的準(zhǔn)確性和可行性，可根據(jù)環(huán)境要求選擇合適的檢驗(yàn)方法。