瀘山猴群狂犬病毒攜帶情況調查

賈青松 ，李鳳琴 ，胡磊 ，宋紹怡 ，楊鍵

（1.西昌市邛海瀘山風景名勝區管理局，四川 西昌 615000；2.西昌學院動物科學學院，四川 西昌 615000）

瀘山是邛海瀘山風景名勝區的重要組成部分，自上世紀90年代引入獼猴以來，景區內的猴群數量不斷增長。據文獻記載，獼猴可攜帶狂犬病毒[1]。為了解瀘山景區內獼猴群體攜帶狂犬病毒的情況，評估瀘山景區內獼猴群體傳染狂犬病毒的風險，我們開展了本次調查。

1 調查材料

標本來源：2016年12月，經報請四川省林業野生保護部門審批同意，由西昌市邛海瀘山管理局、西昌學院、西華師范大學組成的《瀘山獼猴種群生態研究及主要人畜共患病的檢測與預警》課題組利用瀘山猴群抓捕分流的機會，隨機采集了47只獼猴個體的血液標本，共抽取了47份獼猴上肢靜脈血樣（每份血樣5mL）。采樣比例為捕獲猴群的45.63%，是瀘山當時全體猴群的18.58%，具有充分的代表性。

2 調查方法

2.1 檢測方法 采用夾心酶聯免疫吸附法檢測血液中狂犬病的帶毒情況。

2.1.1 樣品、陰性和陽性對照按比例稀釋，樣品最終稀釋度為5倍。

2.1.2 分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包備板孔底部加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30min。

2.1.3 洗板5次，加入酶標試劑，37℃反應30min。

2.1.4 洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色10min。

2.1.5 加入中止液，15 min內在酶標儀中以波長450nm測OD值。

2.2 判定標準 以標準物濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線，根據樣品OD值從標準曲線查出相應的濃度。依據說明書，濃度≤50IU/L為陰性，濃度在50～182IU/L為可疑，濃度≥182IU/L為陽性。而樣本采用了5倍稀釋，故濃度≤10IU/L為陰性，濃度在10～36.4IU/L為可疑，濃度≥36.4IU/L為陽性。2.3 結果 全部47份樣本的檢測結果都小于10IU/L（表1），故判為陰性。

表1 瀘山景區獼猴血清狂犬病毒ELISA檢測結果

3 結論與分析

本文采用夾心酶聯免疫吸附法，使用猴子狂犬病毒（RV）酶聯免疫分析試劑盒檢測了47份瀘山獼猴的靜脈血樣，結果全部為陰性。表明瀘山獼猴群體作為狂犬病傳染源的可能性很小，這與20多年來瀘山猴子多次傷人但并沒有導致狂犬病發生，同時在日常觀測中也沒有發現獼猴感染狂犬病毒的情況是吻合的。

本次檢測結果為陰性的原因有以下幾種可能：第一，獼猴不是狂犬病毒的貯存宿主[2]；第二，瀘山是孤山，處于相對獨立的生態環境，缺乏動物通道，與周邊其他動物接觸少，故攜帶狂犬病毒的幾率低；第三，瀘山猴群是由二十年前引進的十幾只猴子繁殖起來的，繁衍年代較近，屬于封閉繁殖，沒有外來種群流入，故狂犬病感染幾率低；第四，邛瀘景區嚴格實行游客寵物管理，包括犬只在內的所有寵物不得進入景區，瀘山景區內住戶不得養狗，進一步阻斷了狂犬病的傳播途徑；第五，某些因素導致假陰性樣本存在的可能，如檢測方法的問題，酶聯免疫吸附法靈敏度高、特異性好，但操作各環節稍有不慎（如加樣不規范，孵育時間不夠，洗板次數過多，顯色劑過期等因素）就會對檢測結果產生影響，也可能是部分獼猴感染后抗原較少而無法檢出。

據文獻報道，我國95%的狂犬病病例由犬咬傷引起，3%由貓咬傷引起，2%由鼠、狐、狼、鼬獾等動物引起[3]。目前全國還沒有人類因獼猴咬傷而傳染狂犬病的報道，結合本次調查全部47份樣本都為陰性的結果，我們認為瀘山獼猴群體作為狂犬病傳染源的可能性極小。通過將瀘山獼猴狂犬病毒的檢測結論告知被獼猴咬傷的游客，可以消除游客的顧慮。下一步，景區當進一步加強瀘山猴群狂犬病及其他人獸共患病的疫情監測工作，開展野生動物人獸共患病防治知識的宣傳教育工作，加強文明旅游宣傳，讓游客與野生動物保持距離，不主動逗猴玩，不攜帶犬只進景區。