落新婦超微粉與普通粉的有效成分溶出度及鎮(zhèn)痛作用比較研究

周 葉 葛衛(wèi)紅 戴純輝

1 浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片有限公司 浙江 杭州 310053 2 浙江省桐廬縣邵畹生精神衛(wèi)生診所 浙江 桐廬 311500

落新婦，又名紅升麻、陰陽(yáng)虎、金毛三七等，為虎耳草科植物落新婦Astilbechinensis(Maxim.)Franch.et.Sav.或大落新婦Astilbe grandisStapf ex Wils.的干燥根莖。落新婦為浙江省地方習(xí)用藥材，少數(shù)民族特色藥材，現(xiàn)收載于《浙江省中藥炮制規(guī)范》2015版，其性味辛、苦，溫，具有活血散瘀、解毒止痛之功效，主要用于治療跌打損傷、風(fēng)濕痹痛、積聚疼痛等[1]。現(xiàn)代藥理作用研究表明，落新婦具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抑菌、抗腫瘤以及抗內(nèi)毒素的作用。對(duì)落新婦成分分析結(jié)果顯示，巖白菜素為其主要成分，也是有效成分，落新婦中巖白菜素的含量可達(dá)3%以上[2-7]。

落新婦作為傳統(tǒng)中藥飲片廣泛在中醫(yī)臨床中使用，收到很好的臨床療效。目前臨床使用的傳統(tǒng)飲片主要為落新婦片、落新婦常規(guī)粉等。該項(xiàng)目制備了落新婦超微粉，并與普通粉進(jìn)行了有效成分溶出度和鎮(zhèn)痛比較研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器：BP211D電子分析天平（萬(wàn)分之一、十萬(wàn)分之一）：sartorius；KQ3200DB型不銹鋼新型電熱恒溫水浴鍋（嘉興市中新醫(yī)療儀器有限公司）；液相色譜儀：prostar 230（三元泵）、prostar330（二極管陣列檢測(cè)器）、prostar410（自動(dòng)進(jìn)樣器）；KromasilC18柱(5μm，4.6mm×150mm)。

1.2 材料：①試藥：落新婦，采自浙江建德，經(jīng)鑒定為虎耳草科植物落新婦Astilbe chinensis(Maxim.)Franch.et.Sav.的干燥根莖；巖白菜素（批號(hào)：BCTG-0740）：由中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心；甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。②動(dòng)物：健康昆明種小鼠，體重18～22g，由浙江省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 落新婦普通粉及超微粉的制備：將洗凈的落新婦根和根狀莖切制成厚片3mm的片子，得到落新婦飲片；將落新婦飲片采用連續(xù)投料粉碎機(jī)對(duì)落新婦飲片進(jìn)行粉碎5min，以24目進(jìn)行篩選，將能通過(guò)篩孔的篩下組份一部分用普通球磨粉碎機(jī)粉碎成細(xì)粉，即為普通粉，一部分采用氣流粉碎，研磨氣壓為0.8Mpa，分級(jí)輪轉(zhuǎn)速為5500rpm，粉碎時(shí)間為3h，粉碎成粒徑≤75μm的粉末，得到超微粉。

2.2 有效成分巖白菜素的溶出度比較：分述如下。

2.2.1 色譜條件：色譜柱：KromasilC18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(20：80)；流速1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)275nm；柱溫：30℃。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取巖白菜素對(duì)照品10.2mg，置10ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備：取落新婦超微粉和普通粉(10g原藥材制備而成的)加水200ml超聲提取30分鐘，取出，放冷，精密吸取4ml轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得[8]。

2.2.4 樣品檢測(cè)：吸取上述供試品和對(duì)照品溶液各10μl分別進(jìn)樣，測(cè)得峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表1。由試驗(yàn)結(jié)果可知，落新婦超微粉中的有效成分巖白菜素溶出度比普通粉顯著提高。

2.3 落新婦超微粉與普通粉鎮(zhèn)痛效果比較：分述如下。

2.3.1 藥物制備：將落新婦超微粉和普通粉加0.5%的CMC-Na水溶液制成不同濃度的溶液。

表1 普通粉和超微粉溶出度比較

2.3.2 熱板法：將恒溫水浴箱加熱到(55±0.5)℃，燒杯底部接觸水面，加熱后作為熱刺激，用秒表記錄小鼠自投入熱板至出現(xiàn)舔后足的時(shí)間(s)作為該鼠的痛閾值。在給藥前測(cè)定每只小鼠的痛閾值，剔除喜跳躍者，以＞10s而＜30s的小鼠為合格。將篩選合格的小鼠(全部為雌性)禁食12h后(不禁水)，隨機(jī)分為6組，生理鹽水(NS)空白對(duì)照組給予生理鹽水0.5ml/20g；落新婦組0.5ml/20g。給藥后45min左右測(cè)定痛閾值，按公式計(jì)算其痛閾值提高百分率。結(jié)果表明，落新婦超微粉和普通粉均能明顯提高小鼠的痛閾值（P＜0.01），其中超微粉兩個(gè)劑量組（2g·kg-1、1g·kg-1）鎮(zhèn)痛作用明顯優(yōu)于普通粉組（P＜0.01）。詳見(jiàn)表2。

表2 對(duì)小鼠熱板法痛閾值的影響(±s)

表2 對(duì)小鼠熱板法痛閾值的影響(±s)

注：與給藥前比較，★P＜0.01；與空白組比較，△P＜0.01；與普通粉組比較，□P＜0.01。

組別空白組超微粉組1超微粉組2超微粉組3超微粉組4普通粉組動(dòng)物數(shù)（只）1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0劑量（g·k g-1）0.2 5 0.5 0 1.0 0 2.0 0 2.0 0痛閾值給藥前2 1.5 8±0.9 9 2 3.0 1±1.5 5 2 0.5 8±1.2 3 2 2.0 3±0.8 7 2 1.4 5±2.0 0 2 1.2 1±1.7 6給藥后2 1.7 7±3.4 5 2 6.2 6±1.2 3★△2 5.1 2±2.6 6★△2 9.9 5±2.2 5★△□3 2.3 7±2.9 8★△□2 6.3 3±1.5 9★△痛閾值提高百分率（%）0.8 8 1 4.4 7 2 2.0 6 3 5.9 5 5 0.9 0 2 4.1 4

2.3.3 扭體法：取雄性小鼠40只，禁食12h后(不禁水)，隨機(jī)分為6組，分組及劑量同熱板法。給藥后60min左右，各小鼠腹腔注射0.6%醋酸0.1ml/10g(醋酸臨用前配制)，觀(guān)察并記錄注射醋酸溶液后15min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)(腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢、臀部扭轉(zhuǎn))。

結(jié)果表明，不同劑量的落新婦超微粉和普通粉，均能明顯減少醋酸所致的小鼠扭體次數(shù)（P＜0.01），超微粉三個(gè)劑量組（2g·kg-1、1g·kg-1、0.5g·kg-1）的作用明顯強(qiáng)于普通粉組（P＜0.01），超微粉0.25g·kg-1劑量組的作用與普通粉組相當(dāng)。見(jiàn)表3。

表3 對(duì)小鼠扭體次數(shù)的影響(±s)

表3 對(duì)小鼠扭體次數(shù)的影響(±s)

注：與空白組比較，★P＜0.01；與普通粉比較，△P＜0.01。

組別空白組超微粉組1超微粉組2超微粉組3超微粉組4普通粉組動(dòng)物數(shù)（只）1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0劑量（g·k g-1）0.2 5 0.5 0 1.0 0 2.0 0 2.0 0扭體次數(shù)5 5.6 0±6.6 4 2 8.8 9±5.5 7 2 4.0 2±4.7 4 1 9.2 5±6.3 5 1 5.8 0±7.3 5 2 9.1 2±4.8 9鎮(zhèn)痛率（%）4 8.0 4★5 6.8 0★△6 5.3 8★△7 1.5 8★△4 7.6 2★

3 結(jié)論

藥物粉體顆粒大小與藥材有效成分的釋放、溶出及吸收密切相關(guān)。藥材超微粉碎后，其體內(nèi)有效成分的溶出過(guò)程將發(fā)生新的變化[9]，有利于藥物的釋放和吸收，可減少給藥劑量和節(jié)省原料。因此，近年來(lái)超微粉粉碎技術(shù)發(fā)展十分迅速，得到醫(yī)藥行業(yè)的普遍關(guān)注和應(yīng)用。超微粉是原粉經(jīng)過(guò)超微粉碎技術(shù)而得，粉碎后的藥物粒徑為1～75μm，藥物破壁率高、溶出速率和生物利用度也較高[10]、胃腸道停留時(shí)間延長(zhǎng)、吸收快而且更充分。臨床應(yīng)用劑量可降低至原粉劑量的1/2、1/4、1/8，甚至1/16、1/32，可降低臨床用藥劑量、減少毒副作用、提高療效和患者依從性[11]。

該研究采用超微粉碎技術(shù)，使落新婦粉末的粒徑小于75μm，相對(duì)于普通粉，超微粉的溶出度明顯提高。落新婦超微粉四個(gè)劑量組和普通粉都明顯減少了熱板上小鼠舔足次數(shù)和醋酸扭體反應(yīng)，超微粉三個(gè)劑量組（2g·kg-1、1g·kg-1、0.5g·kg-1）鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于普通粉。