枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉在豬養殖中的應用

張偉強 陳 晨 周琳琳 潘 軍 胡江春 薛德林 ，*

1 廣州博善生物科技股份有限公司 廣州 116222

2 中國科學院沈陽應用生態研究所 沈陽 110016

枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）是能夠產生芽孢的兼性好氧微生物，在分類學上屬原核生物、真細菌[1]，主要分布在海洋、江河、湖泊、活性污泥和土壤中[2]。因枯草芽孢桿菌具有生物奪氧、抑制病菌、生物拮抗、調整菌群等功能，從而促進有益厭氧菌生長，故其在提高動物機體免疫力、增強消化系統酶活性、防病治病和促進生長中起到了重要作用[3]。枯草芽孢桿菌菌體繁殖速度快，容易培養，能分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶以及多種氨基酸，產品適用范圍廣泛。腐植酸鈉是以礦源腐植酸為原料經特殊工藝加工制成的一種具有多種功能的大分子有機弱酸鈉鹽，應用到畜禽養殖中，具有抗菌、抗病毒、收斂和消炎作用，能提高畜禽免疫力、促進畜禽生長、增加飼料轉化率，同時在醫藥、環保、工業等領域都有廣泛的應用[4～10]。

枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉是以枯草芽孢桿菌BS18為出發菌株，發酵后以腐植酸鈉為吸附載體，經低溫氣流干燥，精制而成。本文將枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉應用于保育豬、小豬、中豬和育肥豬的試驗研究中，以期為枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌劑在豬養殖上的推廣應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

枯草芽孢桿菌BS18菌株，從遼寧大連黃海海域（東經122°21′，北緯39°34′）的底泥中分離得到，具有生物活性高、抑菌效果好、抗逆性強、抗高溫、抗酸堿、抗擠壓等優點，并能作為模式菌株在生物芯片上進行有效的DNA擴增和蛋白質、氨基酸分離的優良菌株[2，6]。

1.2 培養基與培養條件

斜面培養基（菌種培養）：葡萄糖1.0%、蛋白胨1.0%、牛肉膏0.5%、氯化鈉0.1%、硫酸鎂0.05%、磷酸氫二鉀0.1%、瓊脂2.0%、余量為純凈水，pH 7.0～7.2；滅菌條件：0.08 MPa、118 ℃蒸氣滅菌（18 min）；培養條件：溫度30 ℃、時間48 h。

發酵培養基（增殖培養）：葡萄糖1.0%、蛋白胨0.5%、酵母粉0.5%、玉米面1.0%、豆粕1.0%、硫酸銨0.1%、氯化鈉0.1%、硫酸鎂0.05%、磷酸氫二鉀0.1%、余量為純凈水，pH 7.0～7.2；發酵罐裝液量為70%，接種量5%；滅菌條件：0.08 MPa、121 ℃蒸氣滅菌（20 min）；培養條件：罐壓0.05 MPa、通氣量100～120 vvm、轉速200 rpm、溫度30 ℃、時間48 h。

1.3 供試材料與性質

腐植酸鈉：顆粒度≤200目、pH值≥8、水溶性腐植酸含量（干基）≥70%、Fe含量≤0.45%、水分含量≤15%，外觀呈黑亮色，由新疆雙龍腐植酸有限公司提供。

1.4 枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉的生產

將發酵好的每毫升含活菌數≥200個億的種子液，按照100∶38的比例，與腐植酸鈉混合，放置到固體發酵器中，溫度38 ℃，發酵溫度控制在50 ℃以下，保溫發酵68 h，再通入無菌風降溫，經氣流干燥，降低含水量，使枯草芽孢桿菌BS18變成芽孢，含水量≤10%，粉碎到200目以下，測定芽孢數，每克含活菌數≥200個億為合格產品，得到枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉。

1.5 試驗時間和地點

1.5.1 試驗時間

保育豬：2015年5月6日—31日，試驗期為25天；小豬：2015年6月10日—7月15日，試驗期為35天；中豬：2015年8月1日—9月5日，試驗期為35天；育肥豬：2015年9月25日—10月30日，試驗期為35天。

1.5.2 試驗地點

大連嘉明農牧生物科技有限公司豬場。

1.6 試驗設計

試驗布置：試驗組1、試驗組2、對照組，每組3個重復，共設置9個養殖豬圈，養殖豬圈面積為長×寬＝6 m×6 m＝36 m2，隨機排列。

試驗組1：飼料中添加0.2%枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉[2]，拌料混勻；試驗組2：飼料中添加0.5%枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉，拌料混勻；對照組：飼料中不添加枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉。

1.7 飼養管理

試驗前對試驗欄進行全面清洗消毒，試驗豬選擇同批次轉群、均勻、健康的試驗豬；試驗正式開始前要對豬群進行預飼，預飼后再根據采食量和欄均量進行分組，在欄舍進行標注。試驗期間通風保暖，保持欄舍清潔，自由飲水、自由采食，每天早晚各填料一次。試驗期間記錄試驗過程中出現的病、殘、死、淘情況；當欄內發生有死淘豬現象時，當日應清槽統計欄總飼喂量，階段計算死淘豬所消耗的飼料量。

1.8 測定指標及方法

試驗開始、結束時對試驗豬群進行空腹稱重，記錄始重、末重，并且在試驗期間記錄每天投料量，統計腹瀉頭數；試驗結束后計算日增重、日采食量和腹瀉指數；觀察記錄試驗豬皮膚和毛色狀況。

（1）平均每頭日采食量：試驗期內總采食的飼料重量/試驗天數/試驗頭數。

（2）平均每頭日增重：試驗期內每頭增加的體重/試驗天數。

（3）料重比（飼料利用率）：試驗期間消耗的飼料量與增重之比。

（4）腹瀉指數：發現腹瀉病豬后為該豬作標記號，跟蹤記錄發病日期、持續時間、康復情況；嚴重發病要剔除試驗欄，并稱取病豬的體重，做好日期和體重的記錄。根據評分[11]結果（0分：糞便條狀或粒狀；1分：軟糞、能成形；2分：稠狀、不成形、糞水未分離；3分：液狀、不成形、糞水分離）計算每欄腹瀉指數，其計算公式為：每欄腹瀉指數=觀察記錄分數總和/（觀察總天數×欄總頭數）×100%。

（5）死淘豬飼料量的扣除計算：（死淘豬所在欄總飼喂量-死淘日清槽料量）/欄總頭數×死淘豬試驗天數。

（6）成活率：試驗結束總頭數/試驗開始時總頭數。

2 結果與分析

2.1 枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉對保育

豬生長性能的影響

將枯草芽孢桿菌腐植酸鈉型菌粉，在保育豬階段日糧中按照0.2%和0.5%進行添加，經過25天的喂養試驗，其對保育豬生長性能的影響結果如表1所示。

表1 枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉對保育豬階段生長性能的影響Tab.1 Effects of sodium humate-type Bacillus subtilis BS18 on weaned pigs growth performance

通過表1可知：試驗組1平均每頭日增重0.496 kg，試驗組2平均每頭日增重0.480 kg，對照組平均每頭日增重0.452 kg，試驗組1比對照組每頭平均日增重提高9.73%，試驗組2比對照組平均每頭日增重提高6.19%，兩個試驗組與對照組間差異顯著；試驗組1料重比為1.352，試驗組2料重比為1.386，對照組料重比為1.439，試驗組1比對照組料重比降低6.05%，試驗組2比對照組料重比降低3.68%，兩個試驗組與對照組間差異顯著；且試驗組試驗過程中保育豬腹瀉指數比對照組低，試驗組1成活率為100%，試驗組2成活率為98.33%（因病淘汰1頭），對照組成活率為96.67%（因病淘汰2頭）。綜上可知，添加0.2%和0.5%枯草芽孢菌BS18腐植酸鈉型菌粉對保育豬生長性能有幫助，添加0.2%試驗組數值上優于添加0.5%試驗組，但兩組間無明顯差異。

2.2 枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉對小豬生長性能的影響

將枯草芽孢桿菌腐植酸鈉型菌粉，在小豬階段日糧中按照0.2%和0.5%進行添加，經過35天的喂養試驗，其對小豬生長性能的影響結果如表2所示。

表2 枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉對小豬生長性能的影響Tab.2 Effects of sodium humate-type Bacillus subtilis BS18 on piglets growth performance

通過表2可知：試驗組1平均每頭日增重0.635 kg，試驗組2平均每頭日增重0.643 kg，對照組平均每頭日增重0.608 kg，試驗組1比對照組平均每頭日增重提高4.44%，試驗組2比對照組平均每頭日增重提高5.76%，兩個試驗組間差異不顯著，但是兩個試驗組與對照組間差異極顯著；試驗組1料重比為1.920，試驗組2料重比為1.880，對照組料重比為2.000，試驗組1比對照組料重比降低4.00%，試驗組2比對照組料重比降低6.00%；試驗組1與對照組間差異顯著，與試驗組2間差異不顯著；且試驗組試驗過程中小豬腹瀉指數比對照組低，試驗組1和試驗組2成活率為100%，對照組試驗過程中因病淘汰1頭，經計算成活率為98.33%。綜上可知，添加0.2%和0.5%枯草芽孢桿菌腐植酸鈉菌粉對小豬生長性能有幫助，添加0.5%試驗組數值上優于添加0.2%試驗組，但兩組間無明顯差異。

2.3 枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉對中豬生長性能的影響

將枯草芽孢桿菌腐植酸鈉型菌粉，在中豬階段日糧中按照0.2%和0.5%進行添加，經過35天的喂養試驗，其對中豬生長性能的影響結果如表3所示。

通過表3可知：試驗組1平均每頭日增重0.810 kg，試驗組2平均每頭日增重0.830 kg，對照組平均每頭日增重0.783 kg，試驗組1比對照組平均每頭日增重提高3.45%，試驗組2比對照組平均每頭日增重提高6.00%，兩個試驗組與對照組間差異顯著；試驗組1料重比為2.740，試驗組2料重比為2.660，對照組料重比為2.810，試驗組1比對照組料重比降低2.49%，試驗組2比對照組料重比降低5.34%，兩個試驗組與對照組間差異不顯著；試驗過程中沒有腹瀉發生，成活率100%。綜上可知，添加0.2%和0.5%枯草芽孢菌BS18腐植酸鈉型菌粉對中豬生長性能有幫助，添加0.5%試驗組數值 上優于添加0.2%試驗組，但兩組間無明顯差異。

表3 枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉對中豬生長性能的影響Tab.3 Effects of sodium humate-type Bacillus subtilis BS18 on middle pigs growth performance

2.4 枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉對育肥豬生長性能的影響

將枯草芽孢桿菌腐植酸鈉型菌粉，在育肥豬階段日糧中按照0.2%和0.5%進行添加，經過35天的喂養試驗，其對育肥豬生長性能的影響結果如表4所示。

通過表4可知：試驗組1平均每頭日增重1.010 kg，試驗組2平均每頭日增重1.026 kg，對照組平均每頭日增重0.950 kg，試驗組1比對照組平均每頭日增重提高6.32%，試驗組2比對照組平均每頭日增重提高8.00%，兩個試驗組與對照組間差異顯著；試驗組1料重比為3.164，試驗組2料重比為3.130，對照組料重比為3.306，試驗組1比對照組料重比降低4.49%，試驗組2比對照組料重比降低5.32%，但兩個試驗組與對照組間差異不顯著；試驗過程中沒有腹瀉發生，成活率均為100%。綜上可知，添加0.2%和0.5%枯草芽孢菌BS18腐植酸鈉型菌粉對育肥豬生長性能有幫助，添加0.5%試驗組數值上優于添加0.2%試驗組，但兩組間無明顯差異。

3 結論與討論

（1）枯草芽孢桿菌和腐植酸鈉作為生態型微生物制劑和營養型生物飼料添加劑，通過在豬養殖上的試驗結果表明：該菌粉生物性能安全可靠，能使保育豬平均每頭日增重提高6.19%～9.73%、料重比下降3.68%～6.05%、成活率提高1.66%～3.33%、腹瀉指數下降4.36～4.37；能使小豬平均每頭日增重提高4.44%～5.76%、料重比下降4.00%～6.00%、成活率提高1.67%、腹瀉指數下降3.34～3.87；能使中豬平均每頭日增重提高3.45%～6.00%、料重比下降2.49%～5.34%；能使育肥豬平均每頭日重提高6.32%～8.00%、料重比下降4.49%～5.32%；枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉在保育豬、小豬、中豬和育肥豬階段應用均有不同程度的提高生長性能的功效，而且飼喂該菌粉后豬糞便松軟、顏色淺黑色、臭味減輕，養殖環境明顯改善。

（2）枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉在保育豬階段的最佳添加量為0.2%；小豬、中豬和育肥豬階段的最佳添加量為0.5%。從豬生長發育的過程來看，保育豬生長發育還未完成，從吃 母乳的液體飼料到吃人工配制的固體日糧，胃腸粘膜損傷較嚴重，所以腹瀉較多。腐植酸鈉具有表面活性劑的作用，能吸附有毒有害物質，起到收斂、止血、止瀉作用，同時枯草芽孢桿菌屬于耗氧型有益菌，進入腸道后通過呼吸耗氧，與腐敗菌爭氧，造成腸道厭氧環境，改善腸道內微生物菌群比例，使厭氧型乳酸菌增加，從而減少腸道有害菌的生存環境。因此，腐植酸鈉與枯草芽孢桿菌的結合，起到了1+1≥2的效果。保育豬胃腸發育不完全，過多添加該菌粉，不能完全消化吸收，所以未能表現出更好的生長性能，因此添加0.2%菌粉效果優于添加0.5%。小豬、中豬和肥育豬的消化系統發育成熟，對菌粉的消化吸收利用更完全，所以表現出添加0.5%菌粉效果更佳。

綜上可知，枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉在保育豬、小豬、中豬和育肥豬階段均有提高生長性能的功效，尤其在保育豬階段應用效果更佳。枯草芽孢桿菌BS18腐植酸鈉型菌粉在豬養殖中具有廣闊的應用前景。