芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的抗抑郁作用與NO/cGMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的相關(guān)性

吳麗 王麗麗 李偉 侯燕 王景霞 張建軍

摘要目的：比較赤芍、白芍及其有效成分芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷對(duì)小鼠的抗抑郁作用及其與NO/cGMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的相關(guān)性。方法：選取小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停o予赤芍水提物、白芍水提物，記錄小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間。采用相同實(shí)驗(yàn)方法給予小鼠芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷，并檢測(cè)小鼠大腦皮質(zhì)及海馬組織中NO/cGMP通路相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果：與模型組比較，2 g/kg赤芍和2 g/kg、1 g/kg白芍組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。與2 g/kg赤芍同劑量組比較，白芍的小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。與模型組比較，20 mg/kg芍藥苷組、20 mg/kg芍藥內(nèi)酯苷組的小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間及NO、cGMP含量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；且與10 mg/kg芍藥苷同劑量組比較，芍藥內(nèi)酯苷組的小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間及NO含量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。與模型組比較，20 mg/kg芍藥苷組及20 mg/kg芍藥內(nèi)酯苷組的小鼠nNOS、GluR1mRNA表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。結(jié)論：白芍具有抗抑郁作用，芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷是白芍抗抑郁作用的物質(zhì)基礎(chǔ)；與白芍比較，赤芍的抗抑郁作用較弱，與其主要含有抗抑郁作用較弱的芍藥苷，而不含抗抑郁作用較強(qiáng)的芍藥內(nèi)酯苷有關(guān)。

關(guān)鍵詞赤芍；白芍；芍藥苷；芍藥內(nèi)酯苷；懸尾實(shí)驗(yàn)；抗抑郁；NO；cGMP

Correlation Study on Antidepressant Effect of Paeoniflorin and Albiflorin and NO/cGMP Signal Transduction Pathway

Wu Li1， Wang Lili2， Li Wei1， Hou Yan1， Wang Jingxia1， Zhang Jianjun1

（1 College of Traditional Chinese Medicine， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China； 2 Department of Pharmacy， Beijing Jingmei Group General Hospital， Beijing 102300， China）

AbstractObjective：To investigate the correlation between antidepressant effects of paeoniflorin and albiflorin on mice and NO/cGMP signal transduction pathway. Methods：Radix Paeoniae Rubra and Radix Paeoniae Alba was intragastric administered to the mice to establish the mice model of antidepressant with tail suspension test （TST）， and the time of immobility was recorded. The same methods were used to study paeoniflorin and albiflorin. And the NO/cGMP pathway related indicators of cerebral cortex and hippocampus were detected. Results：Compared with model group， 2 g/kg Radix Paeoniae Rubra and 2 g/kg， 1 g/kg Radix Paeoniae Alba can reduce the immobility time of tail suspension （P<005， P<0001， P<005）. Compared with the same dose of Radix Paeoniae Rubra， the TST immobility time of 2 g/kg Radix Paeoniae Alba were obviously lower （P<005）. Compared with model group， 20 mg/kg paeoniflorin， 20 mg/kg albiflorin can reduce the immobility time of tail suspension and the content of NO， cGMP （P<005， P<0001）； Compared with the same dose of paeoniflorin， the immobility time of tail suspension and the content of NO of 10 mg/kg albiflorin were obviously lower （P<005）. Compared with model group， 20 mg/kg paeoniflorin and 20 mg/kg albiflorin can reduce the mRNA expression of nNOS， GluR1 （P<005， P<001， P<005）. Conclusion：Radix Paeoniae Alba has antidepressant effect， and paeoniflorin and albiflorin are the material basis of the antidepressant effect of Radix Paeoniae Alba； however， in the administration range of this experiment， the antidepressant effect of Radix Paeoniae Rubra is not obvious compared with that of Radix Paeoniae Alba， which may be related with it mainly containing paeoniflorin which antidepressant effect is weaker， but not containing albiflorin which antidepressant effect is stronger.

Key WordsRadix Paeoniae Rubra； Radix Paeoniae Alba； Paeoniflorin； Albiflorin； Tail suspension test； Antidepressant； NO； cGMP

中圖分類(lèi)號(hào)：R284文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.07.038

芍藥首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品藥；直至梁朝陶弘景《本草經(jīng)集注》將其區(qū)分為赤芍、白芍2種。研究表明，兩者及兩者主要成分白芍總苷、赤芍總苷均具有抗抑郁作用[12]。抑郁癥屬中醫(yī)“郁證”“虛勞”范疇，其發(fā)病多始于肝，及于心神，并與腦相關(guān)[34]。赤芍、白芍均歸肝經(jīng)，治療肝郁脅痛等病癥[5]，廣泛用于郁癥等疾病的防治之中[1]。赤芍、白芍主要化學(xué)成分均為單萜類(lèi)化合物，芍藥苷為兩者共有成分，而芍藥內(nèi)酯苷為白芍的特征性成分[6]；且兩者均具有抗抑郁作用[78]。我們采用小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停o予赤芍水提物、白芍水提物、芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷，記錄小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間，并檢測(cè)大腦皮質(zhì)及海馬組織中NO/cGMP通路相關(guān)指標(biāo)，研究赤芍、白芍以及芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的抗抑郁作用及作用機(jī)制。

1材料與方法

11材料

111動(dòng)物SPF級(jí)昆明種小鼠，雄性，體重18～22 g，由維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，合格證編號(hào)：SCXK（京）20150001。

112藥物1）受試藥物：赤芍水提物、白芍水提物、芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷。赤芍飲片購(gòu)自?xún)?nèi)蒙古，白芍飲片購(gòu)自安徽亳州。經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)中心鑒定合格，并由北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室制備。赤芍水提物按常規(guī)方法制備，計(jì)算出膏率為375%，經(jīng)高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）測(cè)定，含芍藥苷為826%，芍藥內(nèi)酯苷為0。白芍水提物按常規(guī)方法制備，計(jì)算出膏率為275%；經(jīng)HPLC測(cè)定，含芍藥苷為772%，芍藥內(nèi)酯苷為43%。2）芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷：按專(zhuān)利技術(shù)方法自制，純度均高于96%。3）陽(yáng)性藥：鹽酸氟西汀膠囊，南京新百藥業(yè)有限公司，批號(hào)1503031。

113試劑與儀器一氧化氮測(cè)試盒，環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷放免試劑盒，購(gòu)自北京華英生物技術(shù)研究所。Trizol試劑（RNA提取劑），購(gòu)自Invitrogen公司。MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶，購(gòu)自Promega公司。SYBER Green I實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，購(gòu)自Roche公司。所測(cè)指標(biāo)相應(yīng)引物，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。鐵架臺(tái)，剪刀，膠布，JZ型100 g張力換能器（高碑店市新航機(jī)電設(shè)備有限公司）；Medlab生物信號(hào)采集系統(tǒng)（南京易美科技有限公司）；Medlab生物軟件。日本日立7160全自動(dòng)生化儀，r911全自動(dòng)放免計(jì)數(shù)儀，LightCycler 20實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Roche診斷公司）。

12方法

121分組與模型制備取正常小鼠70只，按體重隨機(jī)均分成7組，即空白組，模型組，鹽酸氟西汀組，2 g/kg、1 g/kg赤芍水提物組，2 g/kg、1 g/kg白芍水提物組，適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d（室溫20～22 ℃，相對(duì)濕度65%～70%，12 h為晝夜周期環(huán)境，自由飲食進(jìn)水）。

122給藥方法

各給藥組均灌胃給予相應(yīng)藥物，按每10 g體重灌胃02 mL給藥，1次/d。空白組和模型組給予等劑量蒸餾水，鹽酸氟西汀組給予鹽酸氟西汀溶液35 mg/kg。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組同上。給藥方法為腹腔注射給藥，注射劑量01 mL/10 g，其中芍藥苷組的劑量分別為20 mg/kg、10 mg/kg，芍藥內(nèi)酯苷組的劑量分別為20 mg/kg、10 mg/kg。

123檢測(cè)指標(biāo)與方法以上各組均連續(xù)給藥3 d，末次給藥后1 h，除空白組外，將其余小鼠尾端（距離尾尖約2 cm處）用膠布固定在100 g張力換能器的連線上，使其呈倒懸狀態(tài)，其頭部距離實(shí)驗(yàn)臺(tái)約15 cm，每次測(cè)試2只小鼠，且相互之間用紙板隔開(kāi)。換能器連接至Medlab生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，適應(yīng)2 min后，記錄4 min之內(nèi)不動(dòng)狀態(tài)，并將其換算成小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間（s）。芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)的影響的小鼠在記錄小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間后，脫頸椎處死，剝離大腦，取大腦皮質(zhì)和海馬，置于凍存管中，保存于-80 ℃冰箱中，備用。

采用格里斯法，按照NO試劑盒說(shuō)明測(cè)定小鼠大腦皮質(zhì)中NO含量；采用放射免疫法，按cGMP試劑盒說(shuō)明測(cè)定各組小鼠大腦皮質(zhì)中cGMP含量。

取各組小鼠海馬組織100 mg，在研磨器中研磨裂解，并離心。海馬組織總RNA的提取按照Trizol試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，并經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)樣本RNA含量和純度。根據(jù)總RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。釆用SYBR Green I熒光染料技術(shù)，以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)條件為94 ℃ 10 min、94 ℃ 10 s、X ℃（基因相應(yīng)退火溫度）10 s、72 ℃ 10 s，45個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)擴(kuò)增產(chǎn)物是否符合原設(shè)計(jì)片段長(zhǎng)度。采用Light Cycler系統(tǒng)進(jìn)行PCR反應(yīng)及數(shù)據(jù)采集。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（RTqPCR）測(cè)定小鼠海馬組織nNOS、sGCα2、GluR1mRNA基因表達(dá)水平。引物設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

13統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 200統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，方差齊性，采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。以P<005為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

21赤芍、白芍對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響與模型組比較，氟西汀組的小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；2 g/kg赤芍水提物組和2 g/kg白芍水提物組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；1 g/kg白芍水提物組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。與2 g/kg赤芍同劑量組比較，白芍水提物組的小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。見(jiàn)表2。

22芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間及NO/cGMP的影響與模型組比較，氟西汀組、20 mg/kg芍藥苷組及20 mg/kg、10 mg/kg芍藥內(nèi)酯苷組的小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；且與10 mg/kg芍藥苷同劑量組比較，芍藥內(nèi)酯苷組的小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。與模型組比較，空白組、氟西汀組、20 mg/kg芍藥苷組及20 mg/kg、10 mg/kg芍藥內(nèi)酯苷組的小鼠NO含量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；且與10 mg/kg芍藥苷同劑量組比較，芍藥內(nèi)酯苷組的NO含量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。與模型組比較，空白組、氟西汀組、20 mg/kg芍藥苷組及20 mg/kg芍藥內(nèi)酯苷組的小鼠cGMP含量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。見(jiàn)表3。

23芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷對(duì)小鼠nNOS、sGCα2、GluR1mRNA表達(dá)的影響與模型組比較，空白組nNOS、GluR1mRNA表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；氟西汀組、20 mg/kg芍藥苷組及20 mg/kg、10 mg/kg芍藥內(nèi)酯苷組的小鼠nNOSmRNA表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；氟西汀組、20 mg/kg芍藥苷組及20 mg/kg芍藥內(nèi)酯苷組的小鼠GluR1mRNA表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。見(jiàn)表4。

3討論

抑郁癥是一種以顯著持久的情緒低落、悲觀自責(zé)為主要特征的常見(jiàn)精神障礙，嚴(yán)重者可出現(xiàn)自殺念頭和行為，且具有高發(fā)病、高復(fù)發(fā)、高醫(yī)療成本的特點(diǎn)。目前臨床上抗抑郁藥的療效雖值得肯定，但普遍存在藥效弱、起效慢、作用時(shí)間短、不良反應(yīng)明顯等弊病；而就抑郁癥狀的復(fù)雜多變、患者的依從性及藥物的不良反應(yīng)而言，中醫(yī)藥對(duì)于抑郁癥的治療顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，且逐漸成為研究的熱點(diǎn)[910]。

中醫(yī)雖無(wú)抑郁癥這一病名，根據(jù)其發(fā)病特點(diǎn)多將其歸屬于郁證、虛勞等范疇。結(jié)合藥理實(shí)驗(yàn)研究與臨床應(yīng)用，白芍和赤芍均可用于治療抑郁癥[1]。

白芍歸肝、脾經(jīng)，具有養(yǎng)血柔肝、斂陰止汗之功效，與柴胡配伍疏肝解郁、調(diào)暢情志組成四逆散、逍遙丸等臨床常用抗抑郁方劑。赤芍歸肝經(jīng)，清熱涼血、化瘀止痛，有研究表明其與淫羊藿、石菖蒲組成藥對(duì)具有良好的抗抑郁作用[1112]。

本實(shí)驗(yàn)采用行為絕望模型中的小鼠懸尾模型進(jìn)行研究，懸尾小鼠為克服不正常體位首先產(chǎn)生以逃避為導(dǎo)向的掙扎運(yùn)動(dòng)，在經(jīng)過(guò)努力仍不能擺脫后而出現(xiàn)間歇性不動(dòng)，出現(xiàn)“行為絕望”，產(chǎn)生與人類(lèi)抑郁癥相似的生理生化狀態(tài)[13]。氟西汀是臨床常用治療抑郁癥等精神疾患的藥物，前期研究表明，35 mg/kg鹽酸氟西汀在小鼠懸尾模型中抗抑郁作用明顯[7]。1 g/kg的赤芍與白芍給藥劑量相當(dāng)于成人每日臨床用量的6 g，并根據(jù)兩者芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的含量，結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的劑量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，白芍具有抗抑郁作用，芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷是白芍抗抑郁作用的物質(zhì)基礎(chǔ)；但是，在本實(shí)驗(yàn)給藥范圍內(nèi)，與白芍比較，赤芍的抗抑郁作用較弱，與其主要含有抗抑郁作用較弱的芍藥苷，而不含抗抑郁作用較強(qiáng)的芍藥內(nèi)酯苷有關(guān)。

NO/cGMP通路為近年來(lái)備受關(guān)注的抑郁癥發(fā)病機(jī)制之一[1415]，NO為新發(fā)現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)重要的神經(jīng)遞質(zhì)，一方面可直接作用于神經(jīng)元參與信息傳遞，另一方面可通過(guò)催化生成cGMP，作為第二信使發(fā)揮生物效應(yīng)，參與多種生物功能的調(diào)控。過(guò)量的NO則可引起神經(jīng)毒性，通過(guò)增加cGMP的合成而在抑郁狀態(tài)中發(fā)揮重要作用[16]。應(yīng)激狀態(tài)下，谷氨酸（Glu）與其受體（GluR）結(jié)合，引起細(xì)胞膜的去極化和Ca2+的內(nèi)流，從而激活一氧化氮合酶（NOS）催化NO的生成，NO激活可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶（sGC），從而使cGMP的合成增加[17]。本實(shí)驗(yàn)研究表明，芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的可通過(guò)降低懸尾小鼠大腦皮質(zhì)中NO、cGMP水平，降低神經(jīng)毒性，減少神經(jīng)元的萎縮及壞死，從而達(dá)到抗抑郁作用；進(jìn)一步研究表明，芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷可通過(guò)降低nNOS、GluR1mRNA的表達(dá)而下調(diào)NO/cGMP通路。

本研究對(duì)比研究了赤芍、白芍及其有效成分芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷對(duì)小鼠懸尾模型的抗抑郁作用，發(fā)現(xiàn)赤芍、白芍及芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷均具有抗抑郁作用，且治療作用的強(qiáng)弱與劑量呈一定的量效關(guān)系，芍藥內(nèi)酯苷對(duì)該模型的抗抑郁作用優(yōu)于芍藥苷。故推測(cè)芍藥苷是赤芍與白芍抗抑郁作用的共同有效成分，而芍藥內(nèi)酯苷是白芍抗抑郁作用優(yōu)于赤芍的物質(zhì)基礎(chǔ)之一，可作為白芍在抗抑郁作用上區(qū)別于赤芍的特征性有效成分；芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷抗抑郁作用的機(jī)制可能與其下調(diào)NO/cGMP通路有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1]金樹(shù)梅，蘇文華，崔廣智.芍藥苷在藥物誘發(fā)抑郁模型中的抗抑郁作用觀察[J].山東醫(yī)藥，2013，53（19）：2829.

[2]馬海娟，李芳，宋春紅，等.白芍提取物對(duì)大鼠海馬原代培養(yǎng)神經(jīng)元5羥色胺3受體介導(dǎo)離子通道的影響[J].中草藥，2017，48（6）：11671171.

[3]韓遠(yuǎn)山，藺曉源，邵樂(lè)，等.復(fù)方柴金解郁片抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，37（1）：1821.

[4]杜建新.郁證的中醫(yī)證治經(jīng)驗(yàn)[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2016，22（1）：1213.

[5]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：105，158159.

[6]張建軍，李偉，王麗麗，等.赤芍和白芍品種、功效及臨床應(yīng)用述評(píng)[J].中國(guó)中藥雜志，2013，38（20）：35953601.

[7]王景霞，張建軍，李偉，等.芍藥苷抗抑郁作用與NO/cGMP通路相關(guān)性研究[J].中藥與臨床，2012，3（1）：2728，37.

[8]張建軍，王景霞，李偉，等.芍藥內(nèi)酯苷抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥與臨床，2011，2（6）：3537.

[9]李鴻娜，顏紅.中醫(yī)藥對(duì)抑郁動(dòng)物模型海馬結(jié)構(gòu)影響的研究進(jìn)展[J].世界中醫(yī)藥，2015，10（11）：18021805.

[10]張瀟，田俊生，劉歡，等.抗抑郁中藥新藥研發(fā)進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志，2017，42（1）：2933.

[11]吳芳.赤芍總苷/淫羊藿總黃酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性抑郁及腦5HT和β腎上腺素受體的影響[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，32（7）：744746，764.

[12]陳文偉.石菖蒲、赤芍醇提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)性抑郁及血管活性腸肽和P物質(zhì)的影響[J].華西醫(yī)學(xué)，2006，21（2）：321322.

[13]Steru L，Chermat R，Thierry B，et al.The tail suspension test：a new method for screening antidepressants in mice[J].Psychopharmacology（Berl），1985，85（3）：367370.

[14]李苒，高杉，李琳，等.抑郁癥發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J].天津中醫(yī)藥，2013，30（2）：121125.

[15]Saeedi Saravi SS，Arefidoust A，Saeedi Saravi SS，et al.Mammalian target of rapamycin（mTOR）/nitric oxide system possibly modulate antidepressantlike effect of 17αethinyl estradiol in ovariectomized mice[J].Biomed Pharmacother，2017，89：591604.

[16]王景霞，劉妍，張建軍.一氧化氮與抑郁癥[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，2011，39（1）：104107.

[17]Ostadhadi S，Imran Khan M，NorouziJavidan A，et al.Antidepressant effect of pramipexole in mice forced swimming test：A cross talk betweendopamine receptor and NMDA/nitric oxide/cGMP pathway[J].Biomed Pharmacother，2016，81：295304.

（2017-08-15收稿責(zé)任編輯：芮莉莉）