中藥六味地黃湯與單味顆粒劑混合液成分比較研究

胡耶芳 林玲易 春霞顏 劍黎劍

摘要目的：比較中藥六味地黃湯與單味顆粒混合液有效成分的含量。方法：采用高效液相色譜法，以乙腈磷酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速為10 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)238 nm。定量分析2種溶液中的已知有效活性成分馬錢(qián)苷、丹皮酚、沒(méi)食子酸、芍藥苷的含量變化。結(jié)果：3批六味地黃傳統(tǒng)湯劑種馬錢(qián)苷、丹皮酚、沒(méi)食子酸、芍藥苷的含量明顯高于同批的單味顆粒劑混合液中成分的含量，分別為3批單味顆粒的145、136、143倍。結(jié)論：中藥六味地黃湯單味顆粒劑混合液低于六味地黃湯有效成分含量，存在明顯差異，本研究為臨床中藥湯劑、單味顆粒劑合理應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞中藥；六味地黃湯；單味顆粒劑；混合液；高效液相色譜法；馬錢(qián)苷；丹皮酚；沒(méi)食子酸；芍藥苷

Comparison Study on the Components of Liuwei Dihuang Decoction and Single Ingredient Mixture

Hu Yefang， Lin Ling， Yi Chunxia， Yan Jian， Li Jian

（Pharmacy Department， Guilin Hospital of Traditional Chinese Medicine， Guilin 541002， China）

AbstractObjective：To compare the content of the effective components in the mixture of Liuwei Dihuang Decoction and single ingredient mixture. Methods：The gradient elution was carried out by using high performance liquid chromatography with acetonitrile phosphoric acid aqueous solution as mobile phase. The flow rate was 10 mL/min and the detection wave length was 238 nm. Quantitative analysis of changes in the content of two kinds of solution of known active ingredients loganin， paeonol， gallic acid， and paeoniflorin. Results：The 3 batch of Liuwei Dihuang Decoction， loganin， paeonol， gallic acid， and paeoniflorin content was significantly higher than that of the single component content of the same batch of granules in a mixed solution， respectively， for the 3 batch of single granule 145， 136， 143 times. Conclusion The traditional Chinese medicine Liuwei Dihuang Decoction mixture of single ingredient is lower than the effective ingredient content of Liuwei Dihuang Decoction， with significant differences. This study provides a scientific basis for the clinical application of traditional Chinese medicine decoction and single granule.

Key WordsLiuwei Dihuang Decoction； Single ingredient granules； Mixed liquor； HPLC； Loganin； Paeonol； Gallic acid； Paeoniflorin

中圖分類(lèi)號(hào)：R2895文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.07.048

湯劑是中醫(yī)治療疾病的主要?jiǎng)┬椭唬云潆S證加減、組方靈活、吸收快的優(yōu)點(diǎn)，從古到今深受廣大患者的歡迎[12]。但因調(diào)配、煎煮、攜帶的不方便使其發(fā)展受到一定的影響。單味中藥顆粒劑的出現(xiàn)是對(duì)中藥飲片改革的一種嘗試，但中藥顆粒劑是否符合中醫(yī)辨治的需要，其與湯劑在化學(xué)組分及臨床療效方面是否一致，目前尚未得到肯定[3]。中藥六味地黃湯出自宋代名醫(yī)錢(qián)乙《小兒藥證直訣》是治療肝腎陰虛的經(jīng)典方，由熟地黃、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉、牡丹皮六味藥組成，臨床常用于滋陰補(bǔ)腎，用于治療頭暈耳鳴，腰膝酸軟，遺精盜汗等癥[45]。中醫(yī)認(rèn)為腎精滋養(yǎng)髓海，腎精虧容易導(dǎo)致腦髓失養(yǎng)神智失常，肺腎金水相生，一為氣之主，一為氣之根，故六味地黃湯可以用于肝腎不足的神經(jīng)精神疾病。本課題采用高效液相色譜法（HPLC）分析方法擬對(duì)傳統(tǒng)方劑六味地黃湯、單味顆粒劑混合液的指標(biāo)性成分進(jìn)行分析，探討指標(biāo)性成分的含量變化。現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與試藥

11儀器

高效液相色譜儀（1260 Agilent）；十萬(wàn)分之一電子天平（AB265S，梅特勒托利多儀器有限公司）；萬(wàn)分之一電子天平（ALB224，梅特勒托利多儀器有限公司）。

12試劑

對(duì)照品馬錢(qián)苷（111640201502）、丹皮酚（110708201506）、沒(méi)食子酸（110831201405）、芍藥苷（110736201509）均購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)食品藥品檢定研究院。

乙腈為色譜純（美國(guó)Fisher公司）；磷酸（北京化工廠）；純化水（杭州哇哈哈有限公司）。

13分析樣品

熟地黃、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉、牡丹皮六種藥材均購(gòu)買(mǎi)于廣州致信藥業(yè)有限公司，并經(jīng)桂林市中醫(yī)院藥劑科老師鑒定為正品。

2方法與結(jié)果

21色譜條件

流動(dòng)相：乙腈（A）～01%磷酸水溶液（B）梯度洗脫（0～5 min，5%A；5～15 min，5%A→15%A；15～20 min，15%A；20～45 min，15%A→45%A；45～50 min，45%A；50～55 min，45%A→100%A；55～60 min，100%A）流速：10 mL/min；波長(zhǎng)：238 nm；柱溫35 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

22對(duì)照品溶液的制備

分別精密吸取對(duì)照品馬錢(qián)苷、丹皮酚、沒(méi)食子酸、芍藥苷適量至10 mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，制得馬錢(qián)苷、丹皮酚、沒(méi)食子酸、芍藥苷濃度分別為0205 mg/ mL、0045 2 mg/ mL、0142 8 mg/ mL、0131 2 mg/ mL的混合對(duì)照品溶液。

23供試品溶液的制備

湯劑制備：取熟地黃、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉、牡丹皮六種藥材按配方比例（24∶12∶12∶9∶9∶9）煎煮3次，8倍溶媒量，首次煎煮60 min，第2，3次煎煮30 min，合并水煎液，濃縮至250 mL，精密量取25 mL溶液，至50 mL容量瓶中，加入甲醇超聲溶解，微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得[6]。

24配方顆粒溶液制備本研究所需配方顆粒嚴(yán)格按照生產(chǎn)工藝進(jìn)行生產(chǎn)，經(jīng)水煎、提取、濃縮、干燥、制粒，成品備用，準(zhǔn)確稱(chēng)取相當(dāng)量的配方顆粒加入一定量水溶解，制得單味顆粒劑混合液，量取25 mL按照上述方法處理，即得單味顆粒劑混合液供試液[7]。

25專(zhuān)屬性試驗(yàn)取六味地黃藥材，按供試品溶液制備的方法制備不含熟地黃、山茱萸和牡丹皮的陰性對(duì)照品溶液，按以上色譜的條件得樣品、對(duì)照品以及陰性對(duì)照品比較，結(jié)果顯示，無(wú)其他成分干擾目標(biāo)成分的測(cè)定。

26線(xiàn)性關(guān)系考察

分別精密取混合對(duì)照品溶液2、4、8、10、15、20 μL，按21項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以馬錢(qián)苷、丹皮酚、沒(méi)食子酸、芍藥苷對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)分別為Y=1 7235X～125（r=0999 8，線(xiàn)性范圍為041～410 μg）、Y=1 6217X～125（r=0999 7，線(xiàn)性范圍為0090 4～0904 μg）、Y=1 5437X～125（r=0999 7，線(xiàn)性范圍為0285 6～2856 0 μg）、Y=1 4787X～125（r=0999 7，線(xiàn)性范圍為0264～264 μg）。

27中間精密度試驗(yàn)

精密吸取混合對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄4種對(duì)照品的峰面積，并計(jì)算RSD值，結(jié)果顯示馬錢(qián)苷、丹皮酚、沒(méi)食子酸、芍藥苷4種對(duì)照品RSD值分別為05%、032%、048%、056%，均小于10%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

28供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄馬錢(qián)苷、丹皮酚、沒(méi)食子酸、芍藥苷4種成分峰面積，并計(jì)算RSD值分別為072%、067%、023%、065%，結(jié)果顯示供試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定。

29重復(fù)性試驗(yàn)

精密吸取六味地黃湯樣品溶液6份，按222項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按21項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄并計(jì)算馬錢(qián)苷、丹皮酚、沒(méi)食子酸、芍藥苷4種成分含量及RSD值，結(jié)果顯示4種成分含量分別為0328、0056、0132 3、0248 mg/g，RSD值分別為058%、067%、028%、045%均小于10%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

210回收率試驗(yàn)

精密吸取六味地黃湯樣品溶液6份置100 mL容量瓶中，分別加入制備好的混合對(duì)照品溶液（馬錢(qián)苷、丹皮酚、沒(méi)食子酸、芍藥苷濃度分別為0205 mg/mL、00452 mg/mL、0142 8 mg/mL、0131 2 mg/mL）3 mL，按222項(xiàng)下方法制備供試品溶液，計(jì)算4種對(duì)照品回收率及RSD值。結(jié)果顯示，4種對(duì)照品加樣回收率分別為：122%、144%、021%、053%。結(jié)果表明，該方法可行。見(jiàn)表1。

211樣品測(cè)定結(jié)果

分別取3批傳統(tǒng)六味地黃湯樣品溶液及配方顆粒樣品溶液，按222項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按21項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定4種對(duì)照品馬錢(qián)苷、丹皮酚、沒(méi)食子酸、芍藥苷峰面積，并計(jì)算含量，結(jié)果3批六味地黃傳統(tǒng)湯劑種馬錢(qián)苷、丹皮酚、沒(méi)食子酸、芍藥苷的含量明顯高于同批的單味顆粒劑混合液中成分的含量，分別為3批單味顆粒的145、136、143倍。見(jiàn)表2。

3討論

六味地黃方劑味傳統(tǒng)滋補(bǔ)肝腎藥方，其方劑中主要由山茱萸、澤瀉、熟地黃、山藥、茯苓和牡丹皮等6味藥材組成[811]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，該方具有增強(qiáng)免疫力、抗氧化、降血脂、抑制腫瘤擴(kuò)散等功效[1216]。臨床上多用于治療慢性前列腺炎、腎病、高血壓、女性更年期綜合征等疾病[1722]。隨著中藥劑型的不斷改變，新劑型、新技術(shù)的不斷改進(jìn)，六味地黃制劑已呈現(xiàn)多樣化，但傳統(tǒng)湯劑有很多不足，如攜帶不便、貯存不便、飲用不便，配方顆粒的出現(xiàn)，避免了上述的不足，但配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑的指標(biāo)性成分的含量還存在差異性。

本研究制備六味地黃湯劑與單味顆粒劑混合液所需藥材均為相同批次中藥飲片制備而成，且單味顆粒需要量均由湯劑混合液藥材折算而成，綜合以上兩點(diǎn)，該試驗(yàn)結(jié)果更具客觀性、真實(shí)性、可比性。本研究建立了同時(shí)測(cè)定馬錢(qián)苷、丹皮酚、沒(méi)食子酸、芍藥苷4種有效成分的含量測(cè)定方法，經(jīng)方法學(xué)考察顯示該方法穩(wěn)定、可行。

本研究采用HPLC測(cè)定六味地黃湯劑與單味顆粒劑混合液中4種有效成分馬錢(qián)苷、丹皮酚、沒(méi)食子酸、芍藥苷的含量，結(jié)果顯示六味地黃傳統(tǒng)湯劑中4種有效成分的含量明顯高于同批的單味顆粒劑混合液中成分的含量，且分別為3批單味顆粒的145、136、143倍。分析其原因，2種樣品中的物質(zhì)基礎(chǔ)成分存在一定的差異性，2種樣品在制備過(guò)程中，因其制備工藝不同，以及樣品單煎、共煎的差異性；單味顆粒在制備過(guò)程中，增加了噴霧干燥這一過(guò)程，可能導(dǎo)致有效成分的含量存在較大的差異。本研究為臨床配方顆粒的應(yīng)用提供了依據(jù)。但該研究只是針對(duì)馬錢(qián)苷、丹皮酚、沒(méi)食子酸、芍藥苷4種有效成分的含量的差異性進(jìn)行了測(cè)定，六味地黃湯中成分復(fù)雜，其他成分是否存在差異性有待進(jìn)一步研究，另外，該4種有效成分的差異性能否導(dǎo)致藥效變化還有待進(jìn)一步研究。為此六味地黃湯劑與單味顆粒劑混合液的等效性還需要進(jìn)行更多、更深入的研究。

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（2017-07-26收稿責(zé)任編輯：楊覺(jué)雄）