蒼術黃柏藥配伍規律對藥效物質的影響

朱培霞 易成文 周翠

摘要目的：探討蒼術黃柏藥的配伍規律對藥效物質的影響，闡釋中藥合理配伍的科學內涵。方法：采用高效液相色譜法（HPLC）指紋圖譜分析進行線性關系分析以及加樣回收率試驗考察HPLC的嚴謹性。HPLC指紋圖譜：取小檗堿和黃柏堿對照品溶液和蒼術黃柏1∶1、1∶2、1∶3、0∶1、2∶1、3∶1、1∶0等不同配伍供試品溶液進行HPLC指紋圖譜分析。結果：以蒼術黃柏供試品溶液獲取的HPLC色譜圖中小檗堿和黃柏堿的保留時間與對照品外標法一致。1024～1024 μg范圍內線性關系良好。加樣回收率試驗結果中平均回收率為9980%，RSD為20%，顯示加樣回收率試驗良好，HPLC嚴謹性高。蒼術黃柏不同配伍規律中非共有峰面積以3∶1配伍比例為最高為1062%，其次是1∶1配伍比例為806%。結論：蒼術黃柏配伍不同配伍規律中3∶1配伍比例對小檗堿的影響最小，臨床組方中發揮的黃柏作用藥效就較好；從而說明中藥配伍和藥物劑量對于充分發揮藥物療效至關重要。

關鍵詞高效液相色譜法，蒼術，黃柏，配伍規律，藥效物質

Study on Effects of Compatibility Regularity of Rhizoma Atractylodis and Cortex Phellodendri on Pharmacodynamic Substance

Zhu Peixia1， Yi Chengwen2， Zhou Cui1

（1 Department of Pharmacy， Xinyang Hospital of Traditional Chinese Medicine， Henan 464000， China； 2 Department of Pharmacy， Xinyang Central Hospital， Henan 464000， China）

AbstractObjective：To explain the scientific connotation of the rational compatibility of Chinese herbal medicine based on the HPLC analysis， and discuss the effects of compatibility regularity of Rhizoma Atractylodis and Cortex Phellodendri herbs on pharmacodynamic substance. Methods：The linear relationship was analyzed by HPLC and the sample recovery test was used to investigate the preciseness of HPLC. HPLC fingerprint： berberine and phellpdendrine comparison liquor， and Atractylodes rhizome and Cortex Phellodendri were used to make the test solution by the proportion of 1∶1， 1∶2， 1∶3， 0∶1， 2∶1， 3∶1， 1∶0， which were analyzed by HPLC fingerprint. Results：1） The retention time of berberine and phellpdendrine in Atractylodes rhizome and Cortex Phellodendri test solution was consistent with external standard method of control products by HPLC chromatogram. 2） The linear relationship was good in the range of 1024 to 1024 μg. 3） The average recovery rate of sample recovery teste was 9980%， and RSD was 2%， which showed that the sample recovery rate was good， and HPLC had a high conscientiousness. 4） In the different compatibility rules of Rhizoma Atractylodis and Cortex Phellodendri， the non common peak area was the highest with the ratio of 3∶1 compatibility to 1062%， followed by 1∶1， the proportion of compatibility was 806%. Conclusion：The effect of 3∶1 compatibility proportion of Atractylodes rhizome and Cortex Phellodendri has the minimum effect on berberine， and Cortex Phellodendri has a good pharmaceutical effect， indicating the compatibility and drug dose play an important role in giving full play to the effects of the drugs.

Key WordsHPLC； Rhizoma Atractylodis； Cortex Phellodendri； Compatible regularity； Pharmacodynamic substance

中圖分類號：R282文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.07.051

復方配伍是根據中醫辨證論治理論的一種中醫藥用藥特色，而藥對配伍是臨床上常用的相對固定的2味藥或3味藥的配伍形式。藥對配伍組成多具有一定規律，研究藥對配伍有助于揭示中醫學流傳下來的方劑配伍的科學內涵，幫助臨床醫師和藥師從具有引導價值和點面結合的科學意義[13]。蒼術為菊科蒼術屬多年生草本植物蒼術的干燥根莖，具有燥濕、化濁、止痛等功效，其主要有效成分為揮發油、蒼術醇化合物。黃柏為菊科植物黃柏的干燥樹皮，具有清熱、解毒、燥濕功效，黃柏又名黃檗，其藥用部分為是蕓香科黃檗屬落葉喬木的樹皮內層入藥，其中主要含小檗堿和黃柏堿化合物等。臨床常用蒼術黃柏配伍，經典的方劑有二妙散，為治療濕熱下注之基礎方，方中以蒼術黃柏配伍共奏清熱燥濕，標本兼顧之效[4]。本實驗以蒼術黃柏配伍不同比例配伍，采用高效液相色譜法（HPLC）以黃柏堿和小檗堿作為對照品，探討蒼術黃柏配伍變化規律對藥效物質的影響，為該方在臨床上的合理應用及進一步開發奠定基礎。

1材料

Agilent 1100型高效液相色譜儀；250 mm×46 mm，5 μm的色譜柱（Waters C18柱）；購于中國藥品生物制品鑒定所鹽酸小檗堿對照品（批號：110713200911）；購于北京世紀奧科生物技術有限公司黃柏堿對照品（批號：must11062401）。

2方法

21色譜條件精密量取10 μL的樣品進樣量或對照品溶液，采用250 mm×46 mm，5 μm的色譜柱（Waters C18柱），在乙腈和01%磷酸的流動相中，流速為1 mL/min，柱溫為30 ℃，根據高效液相色譜法（HPLC）（Agilent 1100型高效液相色譜儀）指紋圖譜的梯度洗脫程序進行試驗。見表1。

22供試品溶液制備蒼術為菊科蒼術屬多年生草本植物的干燥根莖，黃柏為菊科植物黃柏的干燥樹皮，蒼術黃柏采用1∶1、1∶2、1∶3、0∶1、2∶1、3∶1、1∶0等不同配伍規律，采用回流法煎煮，于敞口藥盆中稱取黃柏始終未3 g，根據不同配伍規律，配伍蒼術黃柏加200 mL水，浸泡30 min，煮沸后文火45 min，取100 mL藥液，在60 ℃下減壓濃縮，定容至50 mL，折合柴胡黃芩藥物水煎液濃度未02 g/ mL。取5 mL柴胡黃芩濃縮液用100%甲醇定容10 mL，混合均勻，取2 mL離心取上清液在045 μm超微膜濾過即可制備蒼術黃柏配伍供試品溶液。

23對照品溶液制備精密稱取購于中國藥品生物制品鑒定所鹽酸小檗堿對照品（批號：110713200911）、購于北京世紀奧科生物技術有限公司黃柏堿對照品（批號：must11062401）置于容量瓶中，甲醇溶解，制成0422 mg/mL小檗堿對照品溶液和0411 mg/mL黃柏堿對照品溶液。

24高效液相色譜法（HPLC）指紋圖譜分析

241HPLC方法學嚴謹性考察1）線性范圍試驗[5]：根據11制備的小檗堿對照品溶液，精密取0 μL、2 μL、6 μL、8 μL、16 μL、20 μL，分別編號1～6并連續進樣，以峰面積為Y軸，5 μL進樣濃度為X軸，繪制標準曲線，并根據對照品的回歸方程計算各有效成分在各自濃度范圍內的線性關系。2）加樣回收率試驗：取6份同一配伍比例1∶1蒼術黃柏供試品溶液，根據11制備的供試品溶液，編號AF并分別加入2 mL對照品溶液，計算供試品在HPLC中的加樣回收率。

244指紋圖譜取蒼術黃柏配伍供試品溶液、對照品溶液和缺蒼術的陰性對照溶液，分別精密吸取5 μL根據色譜條件依次測定并記錄色譜圖。

25數據處理根據國家藥典委員會提出的中藥指紋圖譜相似度評價系統2004A進行相似度分析，采用MATLAB軟件進行數據處理和統計。

3結果

31對照品溶液HPLC色譜圖采用對照品溶液獲得HPLC色譜圖得小檗堿和黃柏堿的保留時間分別為396 min和191 min，并且與其他組分分離良好。見圖1。以蒼術黃柏供試品溶液獲取的HPLC色譜圖中小檗堿和黃柏堿的保留時間與對照品外標法一致。見圖2。

32線性關系考察結果在線性關系考察中以蒼術甲苷進樣量的自然對數為橫坐標（lgX），峰面積的自然對數為縱坐標（lnY）進行回歸，得回歸方程lnY=1508 2lgX+13918（r=0999 7），因此在1024～1024 μg范圍內線性關系良好。

33加樣回收率試驗結果加樣回收率試驗結果中平均回收率為9980%，RSD為20%，顯示加樣回收率試驗良好，HPLC嚴謹性高。見表2。

34蒼術黃柏不同規律配伍前后指紋圖譜蒼術黃柏采用1∶1、1∶2、1∶3、0∶1、2∶1、3∶1、1∶0等不同配伍規律，以1∶1蒼術黃柏配伍樣品供試品溶液為參照圖譜，生成圖3共有峰模式。

35蒼術黃柏不同規律配伍非共有峰面積蒼術黃柏不同配伍規律中非共有峰面積以3∶1配伍比例為最高為1062%，其次是1∶1配伍比例為806%。

4討論

41流動相的選擇本研究前期工作中通過對乙腈甲醇、四氫呋喃水、乙腈磷酸的HPLC嚴謹性進行考察，篩選出了乙腈磷酸系統流動相的分離效果較好，但在以乙腈磷酸不同的比例條件下等度洗脫的摸索中，發現乙腈磷酸水的條件下小檗堿和黃柏堿的分離度相對較好，根據查閱大量文獻[68]發現采用梯度洗脫后，發現以乙腈水梯度洗脫，在55 min內將小檗堿和黃柏堿完全分離，基線噪聲較低；為了進一步降低基線噪聲，獲得最好的共有峰形，本團隊進一步對磷酸水的濃度進行了考察，分別用01%、02%、03%的磷酸水溶液進行比較，發現乙腈01%磷酸水溶液為流動相的分離效果最好，能夠分離出最低基線噪聲且峰形最好[912]。

42HPLC嚴謹性考察意義線性考查在某一個濃度或峰高（面積）情況下進行樣品分析是否是準確的，而準確的概念就是要成線性，換句話說，在這個范圍內，待測樣品面積要與濃度成正比，即符合紫外檢測器的朗伯比爾定律因為只有這樣，在這個范圍內濃度與面積成正比，分析結果才是準確的[1315]。而加樣回收率包括絕對回收率和相對回收率，本研究涉及的是相對回收率。相對回收率嚴格來說有2種，一種是回收試驗法，一種是加樣回收試驗法[16]。而本研究的目的主要是為了考察HPLC的嚴謹性，因此選用加樣回收試驗法，也就是是在已知濃度樣品中加入藥物，來和標準曲線比，標準曲線也是在基質中加藥物。

43蒼術黃柏配伍規律對藥效物質的影響本實驗結果發現，配伍前后指紋圖譜在保留時間方面變化不大，RSD均小于3%；在此測定條件下，峰的個數無明顯差異，說明黃柏配伍蒼術之后可能沒有新成分產生；相似性評價在黃柏、蒼術不同配伍比例水煎液HPLC指紋圖譜的重疊圖中，以小檗堿為參照峰，可以確定10個共有峰。由蒼術和黃柏二藥配伍后品共有峰面積的變化可以看出，配伍之后化學成分的含量存在變化，其平均RSD值為1787%。并且可以看出其生物堿的含量隨蒼術質量的增加而減少，黃柏、蒼術3∶1的配伍比例中，小檗堿的含量最大。其他峰形也隨配伍劑量的改變也有所變化，提示該配伍比例對小檗堿的影響最小，臨床組方中發揮的黃柏作用藥效就較好；從而說明中藥配伍和藥物劑量對于充分發揮藥物療效至關重要。

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（2017-06-07收稿責任編輯：楊覺雄）