響應面法優化蛹蟲草多肽提取工藝研究

賈洪偉 李丹 王冰梅 徐廣宇 張德花 苑廣信

【摘要】目的：對蛹蟲草多肽提取工藝進行了優化研究；方法：以蛹蟲草子實體提取多肽為對象，通過Box-Behnken設計星點響應面實驗進行優化實驗；結果：優化蛹蟲草多肽提取工藝為提取最佳時間為5.39小時，加酶量1.65%，底物濃度9.3%，蛹蟲草多肽提取的OD值為0.85g/L；結論：經實驗得證，通過星點響應面實驗方法進行蛹蟲草多肽提取工藝條件優化，結果合理有效，優化效果良好。

【關鍵詞】蛹蟲草；響應面；工藝優化

響應面面優化實驗則能夠對多因素多水平篩選最優條件，獲得理想的結果，是目前優化工藝中常用的優化方法[3]。本文通過設計星點Box-Behnken響應面實驗，以蛹蟲草為對象，對多肽提取方法條件進行了優化研究。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

蟲草子實體（沈陽妮子北冬蟲夏草種植基地）。

1.2 試劑

胃蛋白酶（活力：30003500u·mg-1）、胰蛋白酶（活力：250u·mg-1），均購自北京鼎國昌盛生物技術有限公司，石油醚（30～60℃），茚三酮。

1.3 北冬蟲夏草多肽的提取工藝

脫脂：將北冬蟲夏草子實體粉碎，取定量粉末，按1：3（w：v）比例加入石油醚，在55℃恒溫下振蕩3h，過濾，將濾渣烘干獲得脫脂粉。

酶解過程：取3g北冬蟲夏草脫脂粉，按底物濃度不同加入一定量蒸餾水，常溫靜置30min。用NaOH溶液或HC1溶液調節至酶的最佳pH水平，按加酶量不同加入定量蛋白酶，將樣品置恒溫振蕩器中進行水解。水解結束后，樣品煮沸10min，使酶失活，冷卻，4500r·min-1離心10min，取上清液備用。

1.4 實驗儀器

THZ-C恒溫振蕩器（太倉市實驗設備廠），UV-2550型紫外可見分光光度計（島津國際貿易有限公司）54308低溫高速離心機（美國eppendorf公司），AL204電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。……