基于HPLC指紋圖譜的蒲地藍消炎口服液質量控制研究

劉小莉，蔣金來

（重慶市醫藥學校，重慶 401228）

蒲地藍消炎口服液由蒲公英、苦地丁、板藍根和黃芩四味道地藥材經現代工藝提取有效成分精制而成，具有清熱解毒、抗炎消腫的功效，集抗炎、抗菌、抗病毒、解熱和促免疫五大藥理作用于一體，常用于治療癤腫、腮腺炎、扁桃體炎等各類炎癥。方中有效成分眾多，其中含量較高的活性成分為黃芩苷[1]，也是主要質控指標成分。本文采用指紋圖譜結合多種化學計量學數據處理方法[2]，對蒲地藍消炎口服液進行質量評價與控制[3-6]。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters 2695高效液相色譜儀（Waters e2695分離單元，Waters 2489 UV，Waters 2998 PDA）；色譜柱 Waters Xbridge C18（4.6 mm×250.0 mm，5 μm）；XS-205型電子分析天平（梅特勒—托利多公司）。

1.2 材料

黃芩苷對照品（批號：110715-201016，中國藥品生物制品檢定所，純度：94.0%）；乙腈（色譜純，HPLC merck，批號：17289-30409）；磷酸（分析純，國藥集團化學試劑公司）；水（杭州娃哈哈公司）；蒲地藍消炎口服液。

2 方法與結果

2.1 供試品的制備

精密量取本品1 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密量取5 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，備用。

2.2 標準品溶液的制備

精密稱取12.49 mg黃芩苷，至20 ml棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，得儲備液。再取1 ml儲備液，置10 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得黃芩苷對照品溶液，濃度為58.40 mg/L標準品溶液。

2.3 HPLC指紋圖譜方法學考察

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Waters Xbridge C18（4.6 mm×250.0 mm，5 μm）；流動相：A相為乙腈，B相為0.2%磷酸水溶液；梯度洗脫程序：0～14 min，A相 10%～20%；14～40 min，A相 20%；40～60 min，A相 20%～30%；60～70 min，A 相 30%～40%；70～85 min，A相 40%～70%；85～86 min，A 相 70%～10%；86～100 min，A 相 10%[7-8]；流速：1.0 ml/min；進樣量：10 μl；柱溫：30℃；檢測波長270 nm，參比波長360 nm。

2.3.2 精密度試驗 取黃芩苷對照品溶液，連續進樣6次，各色譜峰相對保留時間和相對峰面積的RSD＜3.0%，表明儀器精密度良好。

重復性試驗：精密量取同一樣品6份，分別按供試品溶液制備方法制備供試品并測定，計算其共有峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD，＜3.0%表明該方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一份供試品溶液，分別在 0、2、4、6、8、10、12、24 h進樣，測得各共有峰的相對保留時間和面積RSD均＜3.0%，表明供試品溶液24 h內性質穩定。

2.4 指紋圖譜的建立[9-10]

2.4.1 指紋圖譜的制備 分別精密稱取對照品溶液與口服液供試品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀測定，記錄100 min色譜圖，即得。

2.4.2 內參比峰的確定 測定12批口服液供試品溶液，比較其色譜圖，以3號峰黃芩苷峰為參比峰（S），計算8個共有指紋峰的相對保留時間及相對峰面積比值。典型色譜圖見圖1～3。

由圖1～3可以看出，不同批次的口服液化學成分色譜圖無明顯差異，故對其進行相似度分析和聚類分析。

2.5 結果

2.5.1 不同批次口服液樣品的指紋圖譜 使用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（2004A版）對每個批次樣品的指紋圖譜進行分析[11-13]，得到對照圖譜，如圖 1～3。

圖1 對照品指紋圖譜

圖2 體征指紋圖譜

圖3 1～12號供試液指紋圖譜

分別計算每個批次口服液樣品與對照圖譜的相似度（見表1），相似度值均＞0.990，說明不同批次口服液樣品相似度較高且相近。

表1 不同批次口服液樣品的相似度比較

2.5.2 指紋圖譜的聚類分析 本研究采用平均距離關聯法作為聚類模式識別方法，取12批蒲地藍消炎口服液樣品的色譜峰面積RA值，計算樣品之間的歐氏距離，進行聚類分析，結果見圖4。從圖4可以看出聚類趨勢，閾值最底層12批樣品被分為5類，相似度最高，能夠較好地各自聚在一起。隨著閾值的增大，歐氏距離系數在5～10時，除第三批樣品為孤立樣品外，其他所有樣品聚為一類。聚類趨勢與相似度計算結果一致，兩種方法的結果得到了相互驗證。

圖4 不同批次口服液聚類分析圖

3 討論

本文以12批蒲地藍消炎口服液建立共有模式，相似度＞0.99，采用指紋圖譜聚類分析方法，所有樣品聚為一類，聚類趨勢與相似度計算結果一致，符合指紋圖譜要求，可以作為評價蒲地藍消炎口服液質量的方法。

中藥指紋圖譜技術是中藥質量控制的成熟方法，在中成藥生產、檢驗和研究過程中起到重要作用。中藥復方成分多、靶點多，單一或幾個成分不能體現整體復方的特點。本文采用指紋圖譜結合主成分分析法對口服液質量進行評價，從整體上判斷和控制口服液質量，在控制工藝穩定性、確保不同批次產品質量穩定方面具有現實意義。