青陽參總苷對社會挫敗應激模型大鼠的抗抑郁作用研究

張萌 高博 李勇輝 楊慶雄

【摘 要】 目的：評價青陽參總苷（QYS）的抗抑郁活性。方法：60只大鼠分為對照組、模型組、QYS低中高劑量組，氟西汀作為陽性對照組。首先進行10d社會挫敗應激，第5天開始灌胃給藥，然后測試糖水偏愛、曠場、驚跳反射和前脈沖抑制等行為。結果：與模型組相比，QYS和氟西汀能顯著抑制應激8 d的糖水偏愛下降，曠場試驗大鼠自主活動性和不動時間沒有顯著變化，而QYS高劑量組和陽性對照組能增加大鼠僵直時間；大鼠驚跳反射和前脈沖抑制沒有顯著變化，而QYS高劑量組能顯著降低大鼠105dB驚跳反射幅值；與模型組間的差異有統計學意義（P<0.05）。結論：QYS對社會挫敗應激大鼠抑郁行為具有調節作用。

【關鍵詞】 青陽參總苷；社會挫敗應激；抗抑郁

【中圖分類號】R285.5 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2018）15-0017-04

Abstract：Objective To evaluate the antidepressant activity of Qingyangshen glycosides （QYS）. Methods 60 rats were divided into control group， model group and QYS treatment group， and fluoxetine wasused as positive control group. Firstly， rats were stressed 10 days by a social defeat stress program， and drugs were administered intragastrically on the 5th day of the stress. Thebehavioral effectswere tested using syruppreference， open field， startle reflexand prepulse inhibitiontests. Results QYS and fluoxetine could significantly inhibit the decrease of syrup preference value induced by stress， and no significant change was observed in the autonomic activity and immobility of rats. However， the freezing time was increased in high dose of QYS and positive control groups in the open field tests.Nodifference was observed between startle reflex and prepulseinhibition in rats after stress， but the startle reflex amplitude of rats on 105 dB was significantly inhibited in the high dose of QYS group， being comparing with the stress group. And the difference was statistically significant between the model group（P<0.05）.Conclusion QYS showed an antidepressanteffect onsocial defeat stress rats.

Keywords：Qingyangshen Glycosides； Social Defeat Stress； Antidepressant

隨著當今社會壓力上升，焦慮癥、抑郁癥等慢性應激相關的精神障礙受到研究者的特別關注。抑郁癥是一種慢性的反復發作的精神疾病，臨床核心癥狀表現為快感缺失，患者甚至產生自殺傾向，社會危害性很大。由于抑郁癥的病理機制較為復雜，所以不同作用機制的藥物對抑郁癥的治療效果也不一樣[1-3]，故從不同作用機制出發，開發抗抑郁藥物，具有重要意義。

青陽參（Cynanchum otophyllum）為蘿藦科鵝絨藤屬植物，是西南地區的重要的民族藥之一，具有抗癲癇[4-5]、抗抑郁[6]等藥理活性作用，研究發現青陽參的抗抑郁活性成分為C21甾體苷類[7-8]。青陽參總苷對強迫游泳和懸尾等絕望篩選模型[6]和慢性不可預知溫和應激模型動物[9]的抑郁具有顯著的調節作用。基于抑郁癥病理機制的多樣性，不同的篩選模型代表了不同病理機制下的抑郁癥表現。所以，本研究采用較強應激的社會挫敗應激模型，考察青陽參總苷的抗抑郁作用。

1 材料

1.1 動物 雄性SD大鼠60只，雄性Long-Evans大鼠30只，均為清潔級，體重（250±10）g。動物購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物合格證：SCXK（京）2016-0011。光周期8：00-20：00，溫度20～24℃，濕度40%～70%，自由飲水進食。

1.2 藥品 氟西汀（批號：J20160029，禮來蘇州制藥有限公司），分析純蔗糖（批號：20160106，北京化工廠），青陽參總苷（自制）。

2 方法

2.1 動物分組 清潔級SD大鼠60只，根據應激前糖水偏愛基線值對動物進行平均分組，分為6組，每組10只。分別為：對照組、模型組、青陽參總苷低、中、高（5、15、45mg/kg）劑量組和陽性對照組（氟西汀，1.8mg/kg）。

2.2 藥物制備 QYS提取方法[8]，取青陽參塊根10kg，粉碎，80%乙醇提取3次，合并提取液，濃縮回收溶劑。濃縮液用水稀釋，石油醚萃取3次，水層再用氯仿萃取3次，合并氯仿部分。回收氯仿，得淺黃色青陽參總苷粉末230g，得率為2.3%。

2.3 社會挫敗應激模型的建立[11] 將SD大鼠放入到Long-Evans大鼠的飼養盒中，Long-Evans大鼠作為居住者會主動攻擊SD大鼠，每次打斗1h，前30min讓其任意打斗，后30min在飼養盒中間放置一個鐵絲網制成的隔板，使兩只動物無法直接接觸，但存在視覺、嗅覺、觸覺的接觸，1h后SD大鼠回籠。此后隔天按照上述方法進行應激，共應激10d。

2.4 給藥方法 QYS和氟西汀粉末分別溶于蒸餾水，QYS低、中、高給藥劑量分別為5、15、45mg/kg，陽性對照組氟西汀劑量為1.8mg/kg，應激前1小時灌胃給藥。應激第5天開始每隔一天，QYS灌胃給藥1次，共給藥6次，同時陽性對照組大鼠每天灌胃給藥1次，對照組每天給蒸餾水。

2.5 糖水偏愛行為測試 按照文獻方法[10]，單籠大鼠進行1周糖水適應訓練，第1天適應雙瓶1%的蔗糖水，第2天后均換成一瓶清水和一瓶1%的蔗糖水，在第8天測試糖水偏愛基線值（糖水偏愛=糖水消耗量/（糖水消耗量+清水消耗量）×水消耗量×100%），測試前限制飲水24h。應激前糖水偏愛基線值作為應激0天數據，然后以同樣方法在應激第4、8、10天分別測試各組大鼠糖水偏愛值。

2.6 曠場行為測試 曠場測試箱規格：100cm×60cm×50cm。QYS給藥結束后用陌生情境曠場箱測試動物的新穎尋求行為，記錄10min內大鼠在曠場中僵直行為時間、不動時間和運動距離行為指標。

2.7 驚跳反射行為測試 測試前大鼠放入驚跳反射箱的透明束縛盒進行環境適應，第2天將大鼠全部放入箱內，箱內持續65dB白噪音直至實驗結束，適應 300s 后，給予90dB、100dB、110dB，50ms的白噪音刺激各 10 次，刺激順序隨機，刺激間隔10～50s。記錄小鼠在聲音刺激開始前200ms至聲音結束后 1000ms 的驚跳反射幅值，考察QYS能否抑制應激引發的驚跳反射增強現象。

2.8 前脈沖抑制行為測試 前脈沖抑制（PPI）指在驚嚇刺激之前給予輕微刺激（前脈沖）可以抑制動物對刺激反應的現象，而強應激后動物會出現PPI缺失行為。驚跳反射行為測試3h后，動物在驚跳反射箱進行前脈沖抑制測試，首先給予30dB前刺激，記錄在68dB、71dB 和77dB聲音刺激下的驚跳反射幅值[13]，其他程序參數與驚跳反射行為測試一致。考察QYS對應激后動物的PPI行為的影響。

2.9 統計學方法 采用SPSS 19.0進行數據處理，數據均以（x±s）表示，采用雙因素及單因素方差分析，P<0.05表示差異具有統計學意義。

3 結果

3.1 青陽參總苷對社會挫敗應激大鼠糖水偏愛的影響 由表1可知，隨應激時間的延長，社會挫敗應激誘發大鼠糖水偏愛值下降。在應激8d，與對照組相比，模型組糖水偏愛值顯著下降（P<0.001），QYS低、中、高劑量均能夠逆轉糖水偏愛值下降（P<0.01，P<0.001，P<0.001），并呈現一定的劑量依賴關系，氟西汀同樣能反轉應激后大鼠糖水偏愛下降（P<0.001）。應激第10天，與模型組相比，對照組和QYS給藥組糖水偏愛值均沒有統計學差異（P>0.05）。

3.2 青陽參總苷對社會挫敗應激大鼠曠場行為的影響 由表2可知，曠場行為結果發現，僵直時間、不動時間及活動距離3個指標，對照組與模型組無統計學差異（P>0.05），而QYS高劑量組大鼠僵直時間增加（P<0.01），陽性對照組大鼠僵直時間也出現增加（P<0.01）。

3.3 青陽參總苷對社會挫敗應激大鼠驚跳反射的影響 由表3可知，模型組與對照組相比，對3個不同強度聲音刺激誘發的驚跳反射無統計學差異（P>0.05），但QYS高劑量組對105dB中等刺激誘發驚跳反射有一定的抑制作用（P<0.05），青陽參總苷給藥組對95dB、115dB聲音刺激誘發驚跳反射沒有影響。

3.4 青陽參總苷對社會挫敗應激大鼠前脈沖抑制的影響 由表2可知，68 dB、71 dB、77dB 刺激下的PPI，各實驗處理組間沒有顯著變化，模型組與空白對照組相比無統計學差異（P>0.05）。

4 討論

抑郁樣行為反應包括快感缺失、自發活動減少、行為絕望或習得性無助等[14-15]。社會挫敗模型中，利用有較強的領地或食物爭奪意識的Long-Evans大鼠，誘導動物之間發生激烈爭斗，反復應激導致 SD大鼠屈服出現抑郁樣行為，與人在社會中經常受到挫敗而導致的抑郁行為的誘因類似。社會挫敗包括軀體和心理上雙重應激，易誘發抑郁樣行為。該應激范式能更好地模擬抑郁個體的情緒特征，可避免反復應激導致動物的適應性，抑郁樣行為可持久保持，因此該模型對抗抑郁藥物研究具有重要作用[11， 16] 研究中發現，社會挫敗應激8 d可導致大鼠糖水偏愛值下降，而與模型組相比QYS組和陽性對照組能顯著恢復應激后的糖水偏愛，說明QYS著抑制社會挫敗應激導致的快感缺失癥狀，而10 d糖水偏愛值反彈，可能是由于應激時間短、次數少不足以維持穩定的抑郁樣行為。曠場結果中，模型組大鼠的自主活動性沒有顯著變化。與模型組相比，QYS高劑量組和陽性對照組增加大鼠曠場中的僵直時間，這與高劑量QYS給藥半小時后動物易現鎮定行為符合，可能與大劑量QYS對動物活動的抑制作用有關。除此之外，考慮到該社會挫敗應激屬于較強烈應激，因此對應激后的驚跳反射增強及PPI缺失行為進行考察。驚跳反射和PPI測試發現，對照組與模型組沒有顯著差異，這也說明該社會挫敗應激未達到急性應激的強度，不足以誘發應激后驚跳反射增強和PPI缺失行為。但與模型組相比，QYS高劑量組能顯著抑制大鼠105dB驚跳反射幅值，說明青陽參總苷對較弱刺激誘發的驚跳反射行為具有一定抑制作用，提示青陽參可能對驚跳反射有一定抑制作用。實驗結果表明，QYS具有逆轉快感缺失、抑制驚跳反射增強作用，具有一定抗抑郁活性。