蒲地藍消炎口服液黃芩苷與菊苣酸含量測定方法的優化

蘇萬福 楊學芳 王琨

【摘 要】 目的：建立可以同時檢測蒲地藍消炎口服液中黃芩苷與菊苣酸含量的分析方法，降低分析時間、提高檢測效率。方法：采用Agilent Zorbax SB-Pheny1（75 mm×4.6 mm，3.5μm）色譜柱，流動相為水-乙腈-甲醇-磷酸（75∶15∶10∶0.2），柱溫為40℃，檢測波長為326nm，流速梯度洗脫。結果：黃芩苷與菊苣酸分離度良好，單次分析時間為23min，兩組分分別在90.58～1449.3μg、5.475～54.75μg范圍內線性關系良好（黃芩苷r=0.9999、菊苣酸r=0.9998）；黃芩苷與菊苣酸的平均回收率（n=6）分別為99.72%、99.38%。結論：該方法快速、準確，適用于蒲地藍消炎口服液中黃芩苷與菊苣酸的檢測。

【關鍵詞】 蒲地藍消炎口服液；黃芩苷；菊苣酸

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2018）07-0014-03

Abstract：Objective To establisha method for determinating the content of baicalin and cichoric acid simultaneously in Pudilan Xiaoyan oral liquid， thus reducing the detection time and improving the detection efficiency.Methods The analysis was carried out on Agilent Zorbax SB-Pheny1 （75mm×4.6mm， 3.5μm） with water-acetonitrile-methanol-phosphoric acid （75∶15∶10∶0.2） as the mobile phase at the column temperature of 40℃，and the detection wavelength was 326nm， The flow rate wasgradient elution.Results Good separation for baicalin and cichoric acid were achieved， and single analysis time was 23min. The linear calibration was found for baicalin within the range of 90.58μg to 1449.3μg（r=0.9999）and cichoric acid within the range of 5.475μg to 54.75μg （r=0.9998）.The average recovery of baicalin and cichoric acid were 99.72% and 99.38% （n=6）， respectively.Conclusion The developed method is rapid and accurate，and suitable for the content determination of baicalin and cichoric acid in Pudilan Xiaoyan oral liquid.

Keywords：Pudilan Xiaoyan Oral Liquid； Baicalin； Cichoric Acid

蒲地藍消炎口服液由蒲公英、苦地丁、板藍根、黃芩等四味中藥按相應比例配伍，經過現代提取工藝提取并配制而成的純中藥口服制劑，具有清熱解毒，消腫利咽的功效，主要用于癤腫、腮腺炎、咽炎、扁桃體炎的治療[1-2]。研究表明，蒲地藍消炎口服液對小兒手足口病[3-4]、上呼吸道感染[5-6]也具有良好的臨床治療效果，有“天然抗生素”的美稱。

黃芩苷為黃芩中的主要有效成分，具有抗菌、抗病毒、清除氧自由基、解熱、鎮靜、調節免疫等作用[7-8]；菊苣酸為方中君藥蒲公英中的一種酚酸類化合物，具有抗菌、抗病毒、提高免疫力、抗炎、抗氧化等作用[9-11]。2015年版《中國藥典》中分別采用兩種方法對產品中的黃芩苷、菊苣酸的含量進行了測定，該方法由于檢測耗時較長，不利于生產過程中對產品進行質量控制，研究欲建立一種同時測定黃芩苷和菊苣酸含量的測定方法，以縮短中間體檢測時間，提高檢測效率。

1 儀器與材料

1.1 儀器 20AT型液相色譜儀（日本島津）；XS205型電子分析天平（Mettler）。

1.2 材料 黃芩苷對照品（批號：110715-201016，含量以94%計）、菊苣酸對照品（批號：111752-200902，含量以99.9%計）均購于中國食品藥品檢定研究院；蒲地藍消炎口服液（濟川藥業集團有限公司）；乙腈、甲醇均為色譜純，磷酸為分析純，均購于國藥集團化學試劑有限公司。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品48.18mg，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為黃芩苷儲配液；精密量取黃芩苷儲配液8mL、4mL、2mL、1mL、0.5mL，分別置10mL量瓶中，用甲醇依次稀釋成不同濃度的黃芩苷系列溶液，備用。精密稱取菊苣酸對照品13.7mg，置100mL量瓶中，加乙腈-水（20∶80）至刻度，搖勻，作為菊苣酸儲配液；精密量取菊苣酸儲配液10mL、7.5mL、4mL、2mL、1mL，分別置25mL量瓶中，用乙腈-水（20∶80）依次稀釋成不同濃度的菊苣酸系列溶液，備用。

2.1.2 供試品溶液的制備 精密量取蒲地藍消炎口服液5mL，置50mL量瓶中，加乙腈-水（20∶80）稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 色譜條件 色譜柱：Agilent SB-Pheny1（75mm×4.6mm，3.5μm）；流動相：水-乙腈-甲醇-磷酸（75∶15∶10∶0.2）；柱溫：40℃；檢測波長：326nm；進樣量：10μL；流速為梯度洗脫見表1。

2.3 分離度試驗 精密量取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。菊苣酸、黃芩苷出峰時間及菊苣酸峰、黃芩苷峰與附近峰的分離度，典型色譜圖如圖1所示。菊苣酸出峰時間為4.468min，與附近峰分離度為2.23；黃芩苷出峰時間為8.241min，與附近峰分離度為1.94。

2.4 線性關系考察 分別精密吸取“2.1.1”項下黃芩苷、菊苣酸不同濃度的系列溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定，記錄色譜圖。以濃度對峰面積作圖，黃芩苷、菊苣酸回歸方程分別為：Y黃芩苷=17463X+22877（r=0.9999），Y菊苣酸=39724X+15518（r=0.9998），黃芩苷在90.58～1449.3μg范圍內，菊苣酸在5.475～54.75μg范圍內線性關系良好。

2.5 精密度試驗 取同一批樣品，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2”項色譜條件連續進樣6次，記錄峰面積，結果黃芩苷、菊苣酸峰面積的RSD分別為0.15%、0.14%，表明儀器精密度良好。

2.6 溶液穩定性試驗 取同一批樣品，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，分別于0、1.5、3、6、9、12、18、24h按“2.2”項色譜條件測定，記錄峰面積。結果黃芩苷、菊苣酸峰面積的RSD分別為0.94%、0.84%。表明供試品溶液在24h內較穩定。

2.7 重復性試驗 取同一批樣品，按“2.1.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，分別按“2.2”項色譜條件進行測定。結果黃芩苷、菊苣酸的平均含量分別為10.68mg·mL-1、0.269mg·mL-1，以含量結果計算RSD（n=6）分別為0.96%和1.1%，表明該方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗 精密量取已知含量的蒲地藍消炎口服液2.5mL，共6份，置50mL量瓶中，分別加入黃芩苷對照品約26.7mg、菊苣酸對照品儲備液（0.137mg/mL）5mL，按“2.1.2”項下的方法制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件進行分析，計算回收率。結果黃芩苷、菊苣酸的平均回收率分別為99.72%、99.38%，RSD（n=6）分別為0.92%、0.99%。

2.9 方法對比 分別按照2015版《中國藥典》蒲地藍消炎口服液中蒲公英（菊苣酸）、黃芩（黃芩苷）檢測方法、以及“2.1、2.2”項下分析方法對6批蒲地藍消炎口服液中蒲公英（菊苣酸）、黃芩（黃芩苷）含量進行檢測，結果見表2。

3 討論

分別采用紫外-可見分光光度計及二極管陣列檢測器在210～400nm分析對照品和供試品溶液，發現在326nm處菊苣酸有最大吸收，而黃芩苷的兩個最大吸收峰分別為278nm和315nm，由于黃芩苷在樣品中含量較高，而菊苣酸在樣品中含量偏低，參考相關文獻[12-13]，為提高菊苣酸的檢測靈敏度，選擇了326nm波長處同時測定兩種成分的含量。實驗結果表明，在326nm處測定黃芩苷與原方法選定的280nm測定結果基本一致。

2015版《中國藥典》對于蒲地藍消炎口服液除了維持原有黃芩（黃芩苷）含量檢測指標不變的基礎上，增加了蒲地藍消炎口服液中蒲公英（菊苣酸）含量測定，但菊苣酸藥典方法的單針進樣分析時間長達65min。在蒲地藍消炎口服液尤其是中間體（配制液）檢測過程中，不計對照品，單批次4針檢測時間為260min，耗時較長，在一定程度上增加了產品的產出周期，而文中研究方法不僅將檢測時間大大縮短，也實現了一種方法同時分析黃芩苷、菊苣酸含量的效果。運用本方法檢測蒲地藍消炎口服液中間體，不僅利于生產安排、消除生產瓶頸、降低分析成本、減少排污，同時也降低了配制液在等待檢測過程中的污染風險，提高了產品過程中的控制力度。

綜上，研究建立的HPLC法同時測定黃芩苷及菊苣酸的含量，方法可行，適用于蒲地藍消炎口服液生產過程中的質量控制。

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（收稿日期：2018-02-22 編輯：程鵬飛）