白頭翁散超微粉和普通粉中各藥材的薄層對比鑒別

李艷玲，匡秀華，劉永錄，趙建平，張國祖

(河南牧業經濟學院，河南鄭州450011)

白頭翁散是《中華人民共和國獸藥典》2015年版二部中收載的經典方劑，由白頭翁、黃連、黃柏和秦皮組成。白頭翁可以清熱解毒，涼血治痢，為君藥；黃連，黃柏，秦皮清熱解毒而燥濕，秦皮兼有收澀止痢之功。黃連、黃柏助君藥清熱解毒、燥濕止痢，共為臣藥；秦皮清熱燥濕、收澀止痢，為佐藥。諸藥合用，共奏清熱解毒、涼血止痢之功。其功效為清熱解毒，涼血止痢。主治：熱毒赤痢，濕熱痢疾，赤多白少和發熱口渴等[1]。在獸醫臨床上應用非常廣泛。可用于禽大腸桿菌病、沙門菌病、霍亂、鴨傳染性漿膜炎等，治療仔豬黃白痢、流行性腹瀉，以及病毒性、細菌性腹瀉的后期修復，可以配合西藥一起使用。另外在馬、牛、羊、兔等動物疾病上也多有應用。

超微粉碎技術是指利用機械或流體動力的方法，將物料顆粒粉碎至微米級甚至納米級微粉的過程。中藥超微粉碎技術在20世紀90年代中后期興起，它在遵循中醫藥理論的前提下，結合中藥物料的特點，采用現代粉體技術，將中藥材、中藥提取物及中藥制劑微粉化，既保留了傳統飲片的優點，又具一些特殊的理化性質，如良好的分散性、溶解性、吸附性等。因此它將為中藥的現代化生產、應用、開發注入新的活力，將為中藥走向國際帶來新的動力。

白頭翁散經超微粉碎后，可以大大提高藥材的吸收利用率，有效減少臨床用量，節約藥材資源。但目前白頭翁散超微粉還沒有可行的質量標準，并且經超微粉碎后和原來的散劑相比有沒有質的變化，這些都還是未知數。中藥經超微粉碎后，由于細胞破壁，本來一些不易溶出的成分由于沒有了障礙也可能會溶出，為中藥的安全性帶來隱患。因此，我們在鑒別白頭翁散超微粉中各藥材的同時，和白頭翁散普通粉的薄層色譜進行了對比研究，以期為將來中藥超微粉的進一步發展提供更多的借鑒。同時，用薄層色譜法定性鑒別白頭翁散超微粉中的白頭翁、黃連、秦皮，為將來其質量標準的制定奠定基礎。

1 藥材與試劑

藥材：白頭翁、黃連、黃柏、秦皮，購自河南中醫學院第一附屬醫院，經鑒定是白頭翁是毛茛科植物白頭翁(Pulsatilla chinensis (Bge.)Regel)的干燥根；黃連是毛茛科植物黃連(Coptis chinensis Franch)的干燥根莖；黃柏是蕓香科植物黃皮樹(Phellodendron chinense Schneid)的干燥樹皮；秦皮是木犀科植物苦櫪白蠟樹(Fraxinus rhynchophylla Hance)的干燥干皮。標準品：白頭翁對照藥材(批號：121415-200702，中國藥品生物制品檢定所)；秦皮對照藥材(批號：121415-200702，中國藥品生物制品檢定所)；黃連(三角葉黃連)對照藥材(批號：120913-201008，中國藥品生物制品檢定所)；鹽酸小檗堿(含量：86.8%，批號：110713-200208，中國藥品生物制品檢定所)；試劑：甲醇(色譜純,鄭州派尼化學試劑廠)，鹽酸(煙臺市雙雙化工有限公司)，三氯甲烷(天津市風船化學試劑有限公司)。

2 方法與結果

2.1 白頭翁的薄層鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備 取80目白頭翁散和400目白頭翁散超微粉各1.4 g，加甲醇10 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.1.2 對照藥材溶液的制備 白頭翁對照藥材1 g，加甲醇10 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。

2.1.3 陰性對照品的制備 按白頭翁散超微粉的處方制備不含白頭翁的白頭翁散超微粉，并稱取1 g，按制備供試品溶液的方法制備陰性對照品。

2.1.4 薄層色譜法鑒別 吸取上述4種溶液制備各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-醋酸-水(4∶1∶2)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，看是否顯相同顏色的斑點[2]。見圖1。

圖1 白頭翁鑒別薄層圖譜

1: 80目白頭翁散； 2: 白頭翁對照藥材； 3: 400目白頭翁
散超微粉； 4: 白頭翁陰性樣品; 5: 空白溶劑

薄層鑒別結果顯示，在和白頭翁對照藥材相對應的位置，80目和400目白頭翁散均出現了清晰的斑點，并且白頭翁陰性樣品在該位置無斑點，所以該方法可以用來定性鑒別白頭翁散中的白頭翁。400目和80目的白頭翁散相對比，沒有出現新的斑點。

2.2 黃連的薄層鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備 稱取80目白頭翁散和400目白頭翁散超微粉各1.3 g，分別加甲醇15 mL，水浴加熱回流10 min，過濾，收集濾液。

2.2.2 黃連對照藥材溶液的制備 稱取黃連對照藥材0.215 g，加甲醇10 mL，水浴加熱回流10 min，過濾，收集濾液。

2.2.3 小檗堿溶液的制備 取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液。

2.2.4 黃連陰性對照溶液的對照品制備 按白頭翁散超微粉的處方制備不含黃連的白頭翁散超微粉，并稱取1 g，按制備供試品溶液的方法制備陰性對照品。

2.2.5 薄層色譜鑒別 吸取上述4種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液(12∶6∶3∶3∶1)為展開劑，置氨蒸汽預飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的黃色熒光斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的一個黃色熒光斑點。見中插彩版圖2。

薄層鑒別結果顯示，在和黃連對照藥材相對應的位置，80目和400目白頭翁散超微粉均出現了清晰的斑點，并且黃連陰性樣品在該位置均無斑點。400目和80目的白頭翁散相對比，沒有出現新的斑點。

2.3 秦皮的薄層鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備 稱取80目白頭翁散和400目白頭翁散超微粉各3 g，分別加乙醇10 mL，加熱回流10 min，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.3.2 秦皮對照藥材溶液的制備 稱取秦皮對照藥材0.5 g，加乙醇10 mL，水浴加熱回流10 min，過濾，收集濾液。

2.3.3 秦皮陰性對照溶液的制備 按白頭翁散超微粉的處方制備不含秦皮的白頭翁散超微粉，并稱取3 g，按制備供試品溶液的方法制備陰性對照品。

2.3.4 薄層色譜鑒別 吸取上述4種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-三氯甲烷-甲苯-甲酸(8∶1∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。見中插彩版圖3

薄層鑒別結果顯示，在和秦皮對照藥材相對應的位置，80目和400目白頭翁散超微粉均出現了清晰的斑點，并且秦皮陰性樣品在該位置無斑點，所以該方法可以用來定性鑒別白頭翁散中的秦皮。400目和80目的白頭翁散相對比，沒有出現新的斑點。

3.討論

中藥材活性成分主要存在于細胞核和細胞質內，活性有效成分只有通過細胞壁釋放出來后才能被利用。經超微粉碎后的中藥，其中藥材的傳統性狀特征已不復存在，細胞破壁后其顯微特征已被完全破壞，性狀鑒別、顯微鑒別等方法已不能作為鑒定中藥超微粉的主要手段,必須尋找更加有效的方法來建立中藥超微粉體的質量標準。在對白頭翁散超微粉中白頭翁、黃連、秦皮進行定性鑒別的同時，我們比較了80目的普通白頭翁散和400目的白頭翁散在溶出成分上有無差異，所有圖譜均顯示，400目的白頭翁散超微粉和80目相比，并沒有出現不同的斑點，說明白頭翁散超微粉雖然破壁了，但超微粉碎只是減小了粉末粒徑，增加了原有成分的溶出率及溶出量，并沒有改變藥材原有的成分，所以原則上不會產生毒副作用[3]。

在白頭翁的鑒別時，通過查閱大量文獻，對稱樣量、點樣量的進行比較優化，并嘗試了文獻中不同展開劑，篩選出最為合理的展開顯色條件，結果發現，展開劑為正丁醇-醋酸-水(4∶1∶2)時，斑點較為清晰，且與雜質斑點的分離度較好。

鑒別黃連的薄層色譜中，在小檗堿的位置白頭翁散超微粉樣品中仍有斑點，是因為白頭翁散中還有黃柏，而黃柏中主要的化學成分也是鹽酸小檗堿。所以該方法只能用來定性鑒別白頭翁散中的黃連。

本文分別對白頭翁散超微粉中的3種藥材進行薄層鑒別研究，方法簡單快速，可以有效控制白頭翁散超微粉的質量。

中藥超微粉碎技術是對傳統粉碎技術的更新和發展，它既豐富了傳統中藥炮制技術，又為中藥制劑的現代化生產、開發增加了新的形式，已成為中藥現代化的關鍵技術之一 。然而由于該技術歷史短，發展快，在基本定義、科學分級、質量標準、評價體系等方面研究尚不夠完善，限制了該技術及其制劑的發展和推廣。在今后的中藥現代化研究中，應加快研究步伐，開展多學科交叉，多種現代技術融合，盡快制定出中藥超微粉碎分級質量標準和中藥超微粉制劑的評價體系，使中藥超微粉體技術在中藥領域中的應用日益廣泛。