熒光素鈉水溶液濃度熒光光度法研究

夏春苗

摘要：本文探討了熒光素鈉水溶液濃度的熒光光度法分析，根據(jù)不同濃度的熒光素鈉水溶液熒光強(qiáng)度的差別繪制濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，用以未知濃度樣品的分析，該方法操作簡(jiǎn)單，測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞：熒光素鈉水溶液；熒光強(qiáng)度；含量曲線

前言

熒光素鈉是一種紅棕色的熒光染料，英文名為Fluorescein sodium，中文別名水合熒光胺二鈉鹽，CAS號(hào)我518-47-8，分子式為C20H12Na2O5，易溶于水及乙醇，帶有強(qiáng)的黃綠色熒光。

分子結(jié)構(gòu)：由于具有易溶于水的黃綠色熒光，所以常被配成注射液用于醫(yī)學(xué)診斷性眼底和虹膜血管的血管造影檢查和引導(dǎo)腫瘤切除，也可做成示蹤劑用于地質(zhì)鉆井液研究等。熒光素鈉水溶液使用過(guò)程中，如何快速準(zhǔn)確地檢測(cè)其濃度就是一個(gè)迫切需要解決的問(wèn)題。由于熒光分光光度法具有相對(duì)較高的靈敏性和檢測(cè)下限，故本文探討了熒光光度法分析熒光素鈉水溶液濃度的方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

檢測(cè)未知的熒光素鈉水溶液濃度

實(shí)驗(yàn)原理

熒光素鈉水溶液在紫外光激發(fā)下發(fā)射出黃綠色熒光，熒光強(qiáng)度隨水溶液的濃度變化而變化，故可以通過(guò)熒光光度計(jì)檢測(cè)未知樣品的熒光強(qiáng)度，根據(jù)熒光強(qiáng)度推算未知樣品中熒光素鈉的濃度。

1.3主要儀器與試劑

主要儀器：Hitachi F-7000 熒光光度計(jì)，萬(wàn)分之一分析天平，

250ml容量瓶10個(gè)，藥匙，移液管等

主要試劑：純凈水，熒光素鈉標(biāo)準(zhǔn)品，未知樣品

1.4 實(shí)驗(yàn)步驟

1.配制樣品

稱取熒光素鈉標(biāo)準(zhǔn)品0.20g準(zhǔn)確至0.001g，放入100ml容量瓶中，用純凈水定容至刻度。搖勻溶解，得試樣A。

用移液管吸取試樣A 1ml，于100ml容量瓶，用純凈水稀釋至刻度，搖勻，得試樣B。

分別用移液管吸取試樣B 1ml、2ml、4ml、8ml、12ml、16ml和20ml至100ml容量瓶中，用純凈水釋至刻度，搖勻，得試樣，濃度分別為20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml、400μg/ml。

2.熒光發(fā)射光譜

用熒光光度計(jì)分別測(cè)試樣C1、C2、C3、C4、C5、C6和C7的發(fā)射光譜，測(cè)試條件：激發(fā)波長(zhǎng)：490nm，檢測(cè)范圍380-720nm，掃描速度：240nm/min，發(fā)射光譜譜如圖1所示：

由圖1可以看出，熒光素鈉在480-600nm有明顯熒光，其中最大發(fā)射波長(zhǎng)是513nm。

3.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

試樣C1、C2、C3、C4、C5、C6和C7的濃度和最大發(fā)射波長(zhǎng)513nm處的熒光強(qiáng)度如表1所示：

用熒光強(qiáng)度對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如下：

由上圖可知，熒光素鈉水溶液在20-400μg/ml的濃度下與熒光強(qiáng)度成很好的線性關(guān)系，線性回歸方程為：y=10.066x-109.52，R2=0.9988，其中 x為樣品濃度（μg/ml），y為樣品的熒光強(qiáng)度。

4.未知樣品測(cè)定

將未知樣品稀釋至一定濃度后按上述方法測(cè)試其熒光強(qiáng)度（熒光強(qiáng)度范圍：150-4000），按上述的線性回歸方程y=10.066x-109.52即可計(jì)算出未知樣品中熒光素鈉的濃度。

5.結(jié)語(yǔ)

本文利用熒光素鈉水溶液在紫外光激發(fā)下發(fā)射出黃綠色熒光的特性，采用熒光光度計(jì)，繪制樣品濃度與熒光強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線y=10.066x-109.52，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可快速準(zhǔn)確地計(jì)算出未知樣品的濃度。由于不同的熒光光度計(jì)等分析儀器測(cè)試的熒光強(qiáng)度略有偏差，在使用熒光光度法分析熒光素鈉水溶液濃度時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)需重新標(biāo)定。

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