清熱祛濁膠囊的質量標準研究

楊美娜 王世信

【摘 要】目的：完善清熱祛濁膠囊的質量控制標準。方法：用薄層色譜法對處方中的黃連、大黃、枳實進行定性鑒別；用高效液相法對鹽酸小檗堿進行含量測定。結果：薄層色譜斑點清晰，陰性無干擾；含量測定線性良好，回收率試驗符合《中國藥典》2015版四部規定。結論：定性、定量測定方法準確度高、專屬性強、重現性好，可對制劑質量進行有效控制。

【關鍵詞】清熱祛濁膠囊；鹽酸小檗堿；高效液相；質量標準

清熱祛濁膠囊是由我院經典驗方發展而來的中藥復方制劑，在臨床上用于肥胖型2型糖尿病療效確切，但由于目前缺乏全面的質量控制方法。為了確保制劑安全有效，穩定可控，本試驗利用高效液相色譜法對該制劑進行含量測定以及質量標準的研究。

1 薄層色譜鑒別

1.1 黃連的薄層色譜鑒別

取清熱祛濁膠囊及陰性對照品內容物各4g，精密稱定，加甲醇40ml，80℃水浴回流提取15分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對照品，制成0.5mg/1ml的甲醇溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述五種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液（12：6：3：3：1）為展開劑，置氨蒸氣中飽和15分鐘，展開，展距15cm，取出，晾干，置紫外燈（365nm）下檢視。經過薄層色譜鑒別，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。重現性良好，陰性無干擾。

1.2大黃的薄層色譜鑒別

取清熱祛濁膠囊及陰性對照品內容物2g，加甲醇40ml，超聲提取20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液10ml、氯仿10ml加熱回流提取30分鐘，放冷，濾過，濾液用氯仿萃取2次（10、10ml），合并氯仿液，揮干，殘渣加氯仿1ml使溶解，作為供試品溶液及陰性對照品溶液。另取大黃酚、大黃素對照品，加氯仿制成每1ml各含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄VI B）試驗，吸取上述各供試品溶液及陰性對照品溶液各5μl、對照品溶液2μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，預飽和30分鐘，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上層溶液為展開劑[1]，展開，展距9cm，取出，晾干，氨熏后日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。重現性良好，陰性無干擾。

1.3枳實的薄層色譜鑒別

取清熱祛濁膠囊及陰性對照品內容物各4g，加石油醚（30～60℃）20ml，超聲處理15分鐘，靜置后棄去醚層，同法再提取一次，藥渣揮干，加甲醇30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液加0.3g活性炭水浴回流10分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇4ml使溶解，作為供試品溶液及陰性對照品溶液。另取橙皮苷對照品，加甲醇適量制成飽和溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄VI B）試驗，吸取上述供試品溶液及陰性對照品溶液各5μl、橙皮苷對照品溶液25μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，預飽和30分鐘，以乙酸乙酯-甲醇-水（100：17：13）為展開劑[2]，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，放置2小時后，置紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點。重現性良好，陰性無干擾。

2 高效液相法測定鹽酸小檗堿的含量

2.1 供試品溶液及對照品溶液的制備

按照1.1項下做成供試品溶液及對照品溶液。

2.2色譜條件

色譜柱：依利特Hypersil ODS2 C18（250mm×4.6mm，5um）

流動相：乙腈：0.05mol/L磷酸二氫鉀（磷酸調pH=3）=30：70

柱溫：25℃，流速：1ml/min，波長345nm

2.3線性關系考察

分別取對照品溶液1 mL，2 mL，3 mL，4 mL，5 mL，6 mL，置1OmL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻配制成濃度分別為30μg/mL、60μg/mL、90μg/mL、120μg/mL、150μg/mL、180μg/mL的溶液，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行分析，測定其峰面積，以對照品進樣量（μg）（x）為橫坐標，峰面積積分值（y）為縱坐標，求得回歸方程為：Y=71249X+84810，r=0.9995在2.5-50μg范圍內線性關系良好。

2.4精密度試驗

精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行分析，測定6次，記錄峰面積，計算相對標準偏差。結果顯示鹽酸小檗堿對照品峰面積平均值為1595571.443，RSD為0.16%。表明儀器精密度良好。

2.5穩定性試驗

精密吸取對照品溶液10μL和供試品溶液各10μL，于Oh、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行分析，記錄峰面積，計算相對標準偏差。結果顯示，鹽酸小檗堿對照品在24 h內峰面積穩定，RSD為0.16%。

2.6重現性實驗

精密稱取清熱祛濁膠囊內容物，按1.1項下操作制備六份樣品供試品溶液，分別進行測定。測得其濃度的RSD值為0.10%（n=6），結果表明，該方法的重現性良好。

2.7加樣回收試驗

精密稱取清熱祛濁膠囊內容物6份，精密加入一定量的鹽酸小檗堿標準品溶液，按1.1項下操作制成供試品溶液，在上述色譜條件下進行HPLC分析。采用加樣回收率試驗，取同一批樣品設高、中、低三個濃度，每個濃度平行3份，各濃度水平加入對照品的量與所取供試品含量之比分別為1：1.5、1：1、1：0.5。按“1.1”項下方法制備，測定峰面積，計算得平均回收率為99.58%，RSD為1.17%，表明該方法準確可靠。

清熱祛濁膠囊主要用于肥胖型2型糖尿病，“胖人多濕，濕則有瘀，瘀而化熱”。中醫用藥治病采用辨證論治，因此清熱去濁類的藥物被常用于糖尿病的治療。該藥中黃連作為君藥主清熱燥濕之功，且通過現代研究得到業界的廣泛認可[3]。

通過薄層色譜法對方中藥材定性，用高效液相色譜法對清熱祛濁膠囊中鹽酸小檗堿的含量的測定，制訂出本制劑的質量標準，方法穩定，精密度高，重現性好，可作為該制劑質量控制方法。

參考文獻

[1]張守堯，周本杰，汪艷.補陽還五丹的薄層色譜鑒別，時珍國醫國藥，2001，12（2），128

[2]賀江萍，楊天坤.薄層掃描法測定保和散中橙皮苷的含量，中成藥，1999，21（6），290

[3]李濤. 中藥治療2型糖尿病效果的臨床觀察[J].中國醫藥指南. 1671-8194（2013）02-0275-02

作者簡介

楊美娜，女，1984年生，主管中藥師，執業中藥師， 2008年畢業于河北醫科大學中醫學院（現河北中醫學院）。現工作于河北省滄州中西醫結合醫院中藥藥學部，從事中藥調劑和中藥鑒別工作。