定量檢測(cè)EB病毒VCA-IgA抗體及EB病毒DNA對(duì)鼻咽癌篩查和診斷的價(jià)值

李曉，楊永泉，廖海平，孫朝暉，李林海

中國(guó)人民解放軍 廣州總醫(yī)院，廣東 廣州 510010

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是上皮細(xì)胞來(lái)源的惡性腫瘤，在我國(guó)廣東、廣西、福建等地區(qū)高發(fā)[1-2]。鼻咽癌是臨床常見(jiàn)的頭頸部腫瘤之一，起病隱匿，早期無(wú)典型臨床癥狀，容易出現(xiàn)漏診和誤診[3]，很多患者確診時(shí)已為晚期。因侵襲性和轉(zhuǎn)移率很高，預(yù)后較差，因此對(duì)鼻咽癌高發(fā)地區(qū)人群進(jìn)行篩查和早期診斷是鼻咽癌防治的關(guān)鍵。研究表明Epstein-Barr病毒（Epstein-Barr virus，EBV）感染與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4-5]，通過(guò)檢測(cè)血液中EBV衣殼抗原IgA（VCA-IgA）和EBV-DNA，可早期診斷鼻咽癌，提高鼻咽癌患者的存活率。傳統(tǒng)的檢測(cè)IgA抗體的間接免疫熒光法和酶聯(lián)免疫法較為繁瑣，易出現(xiàn)假陽(yáng)性，不利于質(zhì)量控制。在此，我們收集了鼻咽癌患者、非鼻咽癌病人和健康體檢人群的血液，采用化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)VCA-IgA抗體，PCR熒光探針?lè)z測(cè)EBV-DNA濃度，評(píng)價(jià)這2項(xiàng)指標(biāo)對(duì)鼻咽癌的血清學(xué)診斷價(jià)值，并為鼻咽癌的早期篩查提供數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2017年6月至2018年6月來(lái)廣州總醫(yī)院就診的病人和體檢人群的全血標(biāo)本，分為3組，即鼻咽癌組（NPC）（經(jīng)病理診斷確診的鼻咽癌患者48例，男41例、女7例，年齡30～76歲，平均49.6歲）、非鼻咽癌組（Non-NPC）（因鼻咽部癥狀就診我院的非鼻咽癌患者41例，男27例、女14例，年齡8～83歲，平均 48.7歲）、健康對(duì)照組（healthy control，HC）（來(lái)我院接受健康體檢的人群共6735例，男 4185例、女 2550例，年齡 20～97歲，平均47.2歲）。

1.2 EBV抗體檢測(cè)

抽取患者和體檢人群無(wú)抗凝靜脈血3 mL，4000 r/min離心10 min，分離血清。采用化學(xué)發(fā)光免疫夾心法檢測(cè)EBV-VCA-IgA抗體濃度，試劑盒購(gòu)于深圳新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司，檢測(cè)儀器為該公司配套的Maglumi 4000 Plus全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作，VCA-IgA抗體濃度≥4 AU/mL判定為陽(yáng)性。

1.3 EBV-DNA定量檢測(cè)

抽取患者和體檢人群EDTA抗凝的靜脈血3 mL，4000 r/min離心10 min，分離血漿。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)血漿中EBV-DNA的濃度，試劑盒購(gòu)于湖南圣湘生物科技有限公司，檢測(cè)儀器為美國(guó)羅氏LightCycler 480高通量實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，EBV-DNA拷貝數(shù)≥4.00×102拷貝/mL判定為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料用百分比表示，各組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料2組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究人群基本臨床資料

本研究納入的鼻咽癌患者、非鼻咽癌患者和健康對(duì)照人群在年齡組成上基本一致，廣州地區(qū)鼻咽癌發(fā)病率以青壯年為高，平均年齡49.6歲，且以男性為主，占總發(fā)病人數(shù)的85.4% （41/48），詳見(jiàn)表1。

2.2 3組人群VCA-IgA抗體和EBV-DNA定量檢測(cè)結(jié)果

以臨床病理確診鼻咽癌為“金標(biāo)準(zhǔn)”，共有48例患者確診為鼻咽癌患者，其中44例VCA-IgA抗體陽(yáng)性，25例EBV-DNA陽(yáng)性。表2可見(jiàn)，3組人群VCA-IgA抗體和EBV-DNA濃度明顯不同，鼻咽癌組的濃度顯著高于其他2組（13.96 AU/mL，4.85×102拷貝/mL），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；VCA-IgA抗體濃度在非鼻咽癌組也有升高，但數(shù)值低于鼻咽癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（9.41 vs.13.96，P＜0.001）；而EBV-DNA濃度中位數(shù)在非鼻咽癌組和健康對(duì)照組人群均為正常值。VCA-IgA抗體和EBV-DNA在3組中的陽(yáng)性率結(jié)果比較顯示均以鼻咽癌組最高（91.6% ，52.1% ），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。

表1 研究人群年齡和性別分布

2.3 VCA-IgA抗體和EBV-DNA定量檢測(cè)對(duì)鼻咽癌的診斷價(jià)值

根據(jù)3組人群的VCA-IgA抗體和EBV-DNA定量檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算診斷鼻咽癌的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值和約登指數(shù)。表3可見(jiàn)，應(yīng)用VCA-IgA抗體指標(biāo)檢測(cè)鼻咽癌患者時(shí)，其敏感度、陰性預(yù)測(cè)值和約登指數(shù)高于EBV-DNA指標(biāo)，而VCA-IgA抗體的特異性、準(zhǔn)確度和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值低于EBV-DNA指標(biāo)。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值越高，說(shuō)明EBV-DNA陽(yáng)性者患鼻咽癌的風(fēng)險(xiǎn)較高，在陰性預(yù)測(cè)值中，VCA-IgA抗體和EBVDNA均大于99% ，說(shuō)明當(dāng)這2項(xiàng)指標(biāo)為陰性時(shí)，患鼻咽癌的風(fēng)險(xiǎn)較低。

2.4 VCA-IgA抗體和EBV-DNA定量ROC曲線分析

以鼻咽癌組、非鼻咽癌組和健康對(duì)照組為分析人群做ROC曲線如圖1。曲線下面積（AUC）為0.5～1.0。當(dāng)AUC＞0.5時(shí)，AUC越接近于1，說(shuō)明診斷效果越好；AUC＜0.5說(shuō)明診斷方法完全無(wú)效，無(wú)診斷價(jià)值。VCA-IgA抗體的AUC為95.19% ，EBV-DNA的AUC為76.02% ，說(shuō)明VCA-IgA抗體和EBV-DNA均可用于診斷鼻咽癌，且VCA-IgA抗體的診斷效能優(yōu)于EBV-DNA。

3 討論

鼻咽癌的發(fā)病主要與遺傳、環(huán)境和病毒感染等因素有關(guān)，而EBV與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系，病毒早期感染和長(zhǎng)期反復(fù)感染會(huì)導(dǎo)致鼻咽部上皮細(xì)胞病變，進(jìn)一步惡化為鼻咽癌[6]。EBV VCA-IgA抗體水平增加可出現(xiàn)于鼻咽癌確診前10～61個(gè)月，通過(guò)檢測(cè)VCA-IgA有助于早期發(fā)現(xiàn)和診斷鼻咽癌[5]，對(duì)提高患者生存率和遠(yuǎn)期預(yù)后具有重要意義，而對(duì)高發(fā)地區(qū)人群的篩查是提高鼻咽癌治愈率和獲得良好預(yù)后的關(guān)鍵。

鼻咽癌是我國(guó)較常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，病例約占全世界的80%[7-8]，南方高于北方，好發(fā)于青年和中年，男性多于女性。本研究結(jié)果顯示，廣州地區(qū)青壯年的鼻咽癌發(fā)病率高，平均年齡49.6歲，以男性為主，占85.4% ，發(fā)病年齡和發(fā)病率均高于陳云等的報(bào)道[9]。

圖1 VCA-IgA抗體和EBV-DNA定量ROC曲線

表2 3組人群VCA-IgA抗體和EBV-DNA檢測(cè)結(jié)果

表3 VCA-IgA抗體和EBV-DNA定量檢測(cè)對(duì)鼻咽癌的診斷評(píng)價(jià)分析（% ）

本研究對(duì)EBV-VCA-IgA和EBV-DNA的定量檢測(cè)結(jié)果顯示VCA-IgA在非鼻咽癌組與健康對(duì)照組中的陽(yáng)性率分別為29.2% 和6.5% ，表明非鼻咽癌患者和健康體檢者血清中的VCA-IgA有一定比例的陽(yáng)性率，但遠(yuǎn)低于鼻咽癌組91.6% 的陽(yáng)性率；而VCA-IgA抗體濃度在非鼻咽癌組也有升高，但數(shù)值低于鼻咽癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這表明EBV抗體參與了鼻咽癌的病變過(guò)程，VCAIgA抗體濃度較高者為患鼻咽癌高風(fēng)險(xiǎn)人群。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，VCA-IgA抗體檢測(cè)鼻咽癌的敏感度和特異性均較高（91.67% ，87.62% ），而EBVDNA指標(biāo)雖有很高的特異性（93.69% ），但敏感度太低（52.08% ）。在陰性預(yù)測(cè)值中，VCA-IgA抗體和EBV-DNA均大于99% ，說(shuō)明當(dāng)這2項(xiàng)指標(biāo)均為陰性時(shí)，患鼻咽癌的風(fēng)險(xiǎn)較低。而陽(yáng)性預(yù)測(cè)值結(jié)果顯示EBV-DNA高于VCA-IgA抗體，說(shuō)明EBVDNA陽(yáng)性者患鼻咽癌的風(fēng)險(xiǎn)較高，故EBV-DNA陽(yáng)性者應(yīng)定期復(fù)查EBV抗體和EBV-DNA定量檢測(cè)，必要時(shí)進(jìn)行鼻腔鏡檢查，以便早期發(fā)現(xiàn)鼻咽癌。ROC曲線分析結(jié)果顯示，VCA-IgA抗體曲線下面積為95.19% ，與以往報(bào)道一致[10]，VCA-IgA抗體作為鼻咽癌診斷的血清指標(biāo)其診斷效能高于EB-DNA，這可能與VCA-IgA抗體檢測(cè)的方法和檢測(cè)試劑盒有關(guān)。以往研究[11-12]一般采用ELISA法或免疫酶法，試劑批間差異大，操作繁瑣，結(jié)果判斷受主觀因素影響；而本研究采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)VCA-IgA抗體，提高了檢測(cè)的敏感度和特異性，且具有操作過(guò)程自動(dòng)化、高通量、數(shù)據(jù)更精準(zhǔn)、檢測(cè)結(jié)果客觀、重復(fù)性良好等優(yōu)點(diǎn)，非常適用于鼻咽癌高發(fā)地區(qū)和高危人群的篩查，對(duì)于排除鼻咽癌具有重要的臨床價(jià)值。

綜上所述，通過(guò)對(duì)鼻咽癌患者和健康體檢人群VCA-IgA抗體和EBV-DNA的檢測(cè)，有利于鼻咽癌的有效篩查，為鼻咽癌的早期診斷提供可靠的依據(jù)，是較好的臨床診斷輔助指標(biāo)，值得臨床廣泛應(yīng)用。