KDM3A在乳腺癌中的表達及臨床意義

孫東源　張銘陽　王嵐

[摘要]目的 研究組蛋白去甲基化酶KDM3A在乳腺癌及正常乳腺組織中的表達差異以及其與臨床病理特征的關系。方法 用于免疫組化的乳腺癌組織及正常乳腺組織均來源于沈陽醫學院附屬中心醫院，收集2013～2015年的乳腺癌石蠟標本，患者均為女性。采用免疫組化SP法檢測100例乳腺癌、30例正常乳腺組織中KDM3A的表達情況。分析KDM3A的表達與患者年齡、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、腫瘤分期、瘤體大小以及淋巴結轉移等臨床病理特征的關系。結果 KDM3A在乳腺癌組織中的陽性率為89.0%（89/100），在正常乳腺組織中的陽性率為66.7%（20/30），KDM3A在乳腺癌中的表達高于正常乳腺組織，差異有統計學意義（P<0.05）；KDM3A的表達與瘤體的大小以及ER表達有相關性。結論 乳腺癌組織中KDM3A呈高表達，且與腫瘤瘤體的大小以及ER表達有相關性，提示KDM3A可能在ER陽性乳腺癌中發揮促進乳腺癌生長及增殖作用。

[關鍵詞]乳腺癌；去甲基化酶；KDM3A；免疫組化

[中圖分類號] R730.23 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）6（c）-0004-03

[Abstract]Objective To study the difference of the expression of histone demethylation enzyme KDM3A in breast cancer tissue and normal breast tissue and its relationship with clinicopathological characteristics.Methods The breast cancer tissues and normal breast tissues used in immunohistochemistry were derived from the Central Hospital Affiliated to Shenyang Medical College.The paraffin specimens of breast cancer were collected from 2013 to 2015，all of which were women.The expression of KDM3A in 100 cases of breast cancers and 30 cases of normal breast tissues was detected by using immunohistochemical SP method.The relationship between the expression of KDM3A and the clinicopathological features of patients′age，estrogen receptor （ER），progesterone receptor （PR），tumor stage，tumor size and lymph node metastasis were analyzed.Results The positive rate of KDM3A in breast cancer tissues was 89.0% （89/100），and the positive rate of KDM3A in normal breast tissue was 66.7% （20/30）.The expression of KDM3A in breast cancer was higher than that of normal breast tissue，with statistically significant difference （P<0.05）.The expression of KDM3A was related to the size of the tumor and the expression of ER.Conclusion The high expression of KDM3A in breast cancer tissue is related to the size of tumor and the expression of ER，suggesting that KDM3A may play a role in promoting the growth and proliferation of breast cancer in ER-positive breast cancers.

[Key words]Breast cancer；Demethylation enzyme；KDM3A；Immunohistochemistry

乳腺癌是嚴重危害女性健康的常見腫瘤，發病率逐年上升，是引起女性死亡的重要原因[1-2]。我國乳腺癌每年新增病例占世界新發病例的12.2%，每年乳腺癌死亡病例占總死亡的9.6%[3-4]。其發病過程呈現一個多因素、多基因參與的復雜過程。在乳腺癌確診病例中約有2/3為雌激素受體（ER）陽性的乳腺癌，因此深入研究ER信號通路的影響因素，有助于全面揭示ER陽性乳腺癌的發病機制，為ER陽性乳腺癌的治療提供新的靶點。

近年來的研究顯示，乳腺癌的發生、發展與表觀遺傳的變化密切相關。KDM3A作為JMJD家族中的一員[5]，是目前研究比較深入的去甲基化酶。KDM3A通過其去甲基化酶的功能，特異性催化H3K9me1/2的去甲基化，從而解除組蛋白抑制效應而調節基因表達，實現促進乳腺癌發生、發展的作用[6]。目前KDM3A表達與乳腺癌臨床病理特征之間的關系尚未見報道。本研究利用免疫組化的方法檢測了KDM3A在乳腺癌組織及正常乳腺組織中的表達，分析KDM3A與臨床病理特征的關系，探索其在乳腺癌發病過程中的作用。

1資料與方法

1.1臨床資料和試劑

乳腺癌及正常乳腺組織標本來源于沈陽醫學院附屬中心醫院，KDM3A鼠抗人單克隆抗體購自美國Abcam公司，SP免疫組化試劑盒和DAB顯色液均購自北京中杉金橋生物技術公司。

1.2檢測方法

免疫組化染色采用SP法，置65℃恒溫烤箱烘烤4 h后，石蠟切片經脫蠟，抗原修復，血清封閉，加鼠抗人KDM3A（滴度1︰500）置4℃孵育過夜，室溫復溫后反復磷酸鹽緩沖液（PBS）清洗；加生物素標記的二抗，室溫10 min，PBS沖洗，用辣根過氧化物酶標記的鏈霉素親和素復合物孵育，PBS沖洗，DAB染色，蘇木精復染，脫水，透明，封片。實驗中應用已知陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3結果判定

KDM3A染色以細胞核出現黃色或棕色顆粒為陽性。無陽性細胞為0分，陽性細胞1%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分。細胞無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。高倍鏡下隨機選3個高倍視野，每個視野計數200個細胞，每例切片至少評價1000個細胞。然后根據兩者的乘積判斷陽性等級，0分為陰性，1～4分為弱陽性，5～8分為中度陽性，9～12分為強陽性。

1.4統計學方法

采用SPSS 22.0統計學軟件對數據進行分析，計數資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 KDM3A在正常乳腺組織及乳腺癌組織中的表達

KDM3A蛋白在乳腺癌組織中的陽性率為89.0%（89/100），在正常乳腺組織中的陽性率為66.7%（20/30），兩者陽性表達率比較差異有統計學意義（P<0.05）（表1）。

2.2 KDM3A蛋白表達與乳腺癌臨床病理特征的關系

KDM3A在乳腺癌組織中呈高表達（圖1），這一結果提示KDM3A可能與臨床病理特征有相關性。本實驗進一步分析了KDM3A蛋白表達與臨床病理特征之間的關系，結果顯示，KDM3A表達和瘤體的大小、ER表達具有相關性（P<0.05），和患者年齡、組織學分級、臨床分期、淋巴結轉移、HER2、Ki67及脈管及軟組織侵犯無明顯關聯，差異無統計學意義（P>0.05）（表2）。

3討論

KDM3A擁有廣泛的生物學功能，參與多種生物學過程，包括核受體激活、精子生成、能量代謝、低氧調節和癌癥發生等[7-9]。迄今為止，文獻報道顯示，KDM3A在多種腫瘤中呈高表達，通過多種途徑促進腫瘤的進程。有文獻報道，在前列腺癌中KDM3A的表達高于鄰近組織，且差異顯著[10]。近期研究顯示，KDM3A通過調控雄激素受體的轉錄活性，參與前列腺癌的進程[11]。在肺腺癌細胞中，KDM3A調控Foxp 3的轉錄水平，增加抑制性細胞因子的分泌，促進肺腺癌細胞的免疫逃逸[12]。KDM3A經由其下游靶基因MCAM促進尤因肉瘤的侵襲和轉移[13]。KDM3A與其共激活因子HIF1α共同增強糖酵解途徑，促進膀胱癌的進程[14]。對大腸癌的研究顯示，癌癥組織中KDM3A的表達量明顯增高，使用RNA干擾技術下調KDM3A表達可顯著降低大腸癌細胞系的增殖能力和侵襲力[15]。腎癌組織KDM3A的表達量顯著高于癌旁組織[16]。KDM3A調節卵巢癌的干性和耐藥性[17]，促進非小細胞肺癌的腫瘤發生[18]。此外，KDM3A除作為雄激素受體的共激活蛋白外，研究顯示KDM3A還參與了雌激素受體調控的基因表達激活過程，作為雌激素受體的調節因子，促進雌激素受體下游靶基因的表達[6，9]。

本研究結果顯示，KDM3A在乳腺癌中的陽性率為89.0%，在正常乳腺組織中的陽性率為66.7%，KDM3A在乳腺癌組織中呈高表達，差異有統計學意義，提示KDM3A可能在乳腺癌的發生、發展中發揮重要作用。臨床病理特征的分析顯示，KDM3A的高表達與瘤體的大小和ER表達具有相關性。KDM3A可能通過調節ER信號通路，發揮促進乳腺癌生長的作用。KDM3A的高表達可能預示著快速的腫瘤生長，是一個預后不良的指標，因此KDM3A有望成為乳腺癌治療的新靶點。

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（收稿日期：2018-04-12 本文編輯：祁海文）