美國偽狂犬病監測計劃（1.01版）—病例定義、數據來源及監測流程

文│美國農業部動物衛生檢驗局獸醫處

動物衛生流行病學中心國家監測小組

譯校│劉林青 張倩 張淼潔（中國動物疫病預防控制中心）

《美國偽狂犬病監測計劃（1.01版）》由美國農業部于2008年4月公開發布，該監測計劃的主要目標是在美國商品豬群中快速檢測出豬偽狂犬病（PRV）的感染與傳播、證明美國商品豬群中的PRV無疫以及監控PRV傳入風險，并對監測流程、數據分析以及監測系統評估等內容進行了詳細闡述。《美國偽狂犬病監測計劃（1.01版）》的概述部分見本刊2018年16期。其病例定義、數據來源和每種監測流程的采樣方法如下。

主要服務于目標1的監測流程：快速檢測

以下列舉的監測流程都包含了豬群概述、病例定義、數據來源以及采樣方法，主要的監測流程包括：疑似PRV病例的報告、調查、診斷；診斷實驗室內送檢病豬組織的抗原檢測；診斷實驗室內送檢病料的血清學檢測；高風險豬群的血清學檢測；與野生豬群接觸豬群的血清學檢測與自愿報告。

A 疑似PRV病例的報告、調查、診斷。這個監測流程是依賴于執業獸醫、生產者和直接觀察豬群的人群將疑似PRV的病例報告給AVIC、國家獸醫或者他們指派的人員。

（1）豬群概述。適合抽樣的豬群包括美國境內的所有豬群。

（2）病例定義與診斷。PRV的診斷必須與豬群歷史、臨床癥狀、樣品診斷相結合。以下臨床癥狀可能在PRV感染豬群中出現：哺乳仔豬的死亡率達100%，并且伴有中樞神經系統紊亂癥狀或者PRV引起的明顯病變；PRV引起的母豬呼吸系統與繁殖系統障礙；帶毒斷奶仔豬除呼吸系統病變外常伴有中樞神經系統紊亂或死亡率逐漸升高。

病例的診斷以AVIC與國家獸醫授權的區域流行病學家的建議為準。詳細的病例定義在PRV項目標準中列出。

（3）數據來源。所有關注美國境內各地區豬群情況的生產者、執業獸醫師、實驗室人員都有義務上報包括PRV在內的必須上報疫病的疑似病例，行政人員在調查上報病例的同時必須報告以下信息：分布地區，疫情上報時間，豬群的臨床癥狀（包括體溫），豬群史（包括疫苗接種情況），染疫動物數量與當地畜群數量，向相關實驗室送檢的組織或病料診斷檢測結果。

從這些病料中獲得的數據必須登記進入動物衛生監測管理項目（AHSM）的相關數據庫中，上報到AVCI或者州立獸醫部門的陰性與陽性病例也都必須記錄到數據庫。

（4）采樣方法。疑似病例應主動上報到AVCI與州立獸醫部門，他們主要負責病料的采集以及疫情的管理，在這種監測流程中每年至少需要30個樣品，附錄1提供了在此流程中病料采集的成本與相對價值。

B 診斷實驗室內送檢病豬組織的抗原檢測。

（1）豬群概述。2006年NAHMS的研究表明69.1%養豬地區需要獸醫服務，監測流程包括所有向診斷實驗室提交組織病料進行疫病診斷的養豬場，符合監測條件的組織、疫病癥狀將在下面做詳細敘述。

（2）病例定義。所有向NAHLN合作獸醫診斷室提供的病料必須符合以下標準方可進行PRV檢測：育肥豬或母豬表現明顯呼吸系統癥狀，病料至少包含扁桃體和（或）腦組織的病例，出現流產癥狀的母豬。

愛荷華州和明尼蘇達州獸醫診斷室有大量的送檢病料，必須滿足以上標準才會進行PRV的檢測。另外，這些組織要做免疫熒光抗體檢測或者在PRV參考實驗室進行后續的PCR檢測，至少需要具有以下條件中的一條特性：育肥豬或待產豬出現明顯的呼吸癥狀，流產與繁殖障礙，未確診的中樞系統紊亂，病理學家希望送檢的未知病例。

（3）數據來源。采集到合適病料的NALHN實驗室將通過NAHLN的電子通信系統收集和報告相關信息與抗原檢測結果，信息將傳遞到ASHM內的PRV數據庫，數據的收集將包括所有（陰性與陽性）的檢測樣品，樣品信息包括：地理信息（地理學位置），病料收集送檢與檢測的日期，實施檢測的原因，豬群出現的臨床癥狀，包括疫苗接種情況在內的豬群史，感染動物與地方所有畜群的數量，送檢的組織或樣品，診斷結果。

（4）采樣方法。表1列出了來自美國30個州和診斷實驗室的歷史數據（符合病例定義），在表內未出現的州也有可能提供病料。

表1 美國豬病診斷實驗室提交樣品的歷史數據

這種通過相關權重法構建的樣品檢測是一種快速的檢測方法，利用這個流程能夠分析美國全國境內大約8600份符合條件的病例。根據附錄1，我們預計僅僅這個流程就能為監測目標提供100%的快速檢測結果，雖然在一個全面的監測系統中僅靠一種監測流程并不是明智的選擇。

附錄1提供了這個樣品檢測流程的統計學、數學以及流行病學等方面的判斷標準，將會在一年后對這種新建立的監測流程所計劃的樣品數量在快速檢測中對國家標準做出的貢獻進行評估。

C 診斷實驗室內送檢病料的血清學診斷。

（1）豬群概述。該監測流程包括送檢血清的養豬地區，送到實驗室內進行包括PRV在內的疫病診斷與常規監測的血清樣品。

（2）病例定義。具有呼吸系統、繁殖系統或者有其他PRV感染時相似癥狀的送檢血清就能夠檢測。需要檢測豬群其他各種疫病抗體的血清樣品也可以用來檢測，我們將隨機挑選血清來進行PRV監測。

（3）數據來源。數據來自于PRV監測挑選的血清樣品的分析，接受豬血清學監測的NAHLM實驗室會從送檢樣品隨機挑選一部分進行PRV分析，然后通過NAHLM的電子傳輸系統公布樣品信息與檢測結果，相關信息則上傳到AHSM項目的疫病數據庫，上傳的數據包括所有的檢測樣品（陽性與陰性）。樣品信息包括：地理信息（位置），收集、送檢與檢測日期，診斷結果，樣品篩選的原因。

（4）采樣方法。從每一批的樣品中隨機挑選最多5份樣品進行PRV的血清學分析，假如送檢血清的樣品少于5份的話，所有的血清樣品都要檢測。

附錄1提到這種監測流程的目標是為快速檢測檢測8000份案例，每次檢測至少5份樣品，所以將要分析40000份樣品。

很多實驗室每年要接受數千份的血清樣品，所有送到NAHLN實驗室的血清都要進行分析，以保證地方代表性，為達到每年8000案例的目標，所有實驗室需按照分配的樣品量進行代表性的檢測。

D 高風險豬群的血清檢測。

（1）豬群概述。這個監測流程由高風險的商品豬群（可能與野生豬群接觸）組成，還包括可能在州際流動的豬群。

（2）病例定義。高風險豬群就是那些生活在野豬活動的范圍內，并且在這些地方的管理導致豬群能夠接觸野生豬群而感染PRV。在這個監測流程中，以下的豬群與地區可視為高風險：一是坐落于野生豬群附近的高風險區，并且具有與外部接觸通道的豬群/場址，指由國家、聯邦或者管理人員劃分根據項目劃定的野生豬群生活范圍10英里（1英里≈1.6千米）以內。二是豬群/場址的位置在野豬尋找配偶的10英里范圍之內。三是豬群/場址的附近有動物遷徙的歷史。

這些豬群都可以采樣，AVIC、國家獸醫或者他們的委派者有責任在所在州內將豬群進行分類，執業獸醫的檢查或者在同一生產體系下的跨州移動活動將有助于識別那些在各州邊境活動的高風險豬群。

（3）數據來源。這種采樣流程的數據來源包括血清學樣品，以及國家/地方管理人員挑選的合適于PRV監測的豬群信息。NSU、NCAHP的工作人員以及流行病學專家將會幫助政府在合適豬群的數量和采樣目標的基礎之上建立采樣標準。收集的樣品數據將由聯邦政府合作項目員工將所要求的電子信息上傳到ASHM項目數據庫，這些信息包括：場址信息（地理位置），日期，檢測原因。

血清樣品的試管壁將根據APHIS的送檢標準打上條形碼，以便NAHLN的儀器能夠讀取與分類，接受豬血清樣品的NAHLN的實驗室將通過NAHLN的電子信件系統將所有的檢測結果（每個樣品結果，包括陽性與陰性）上報，這些信息將以電子信息的形式傳達到AHSM的PRV數據庫。

（4）采樣方法。AVIC、國家獸醫或者其委派者可授權到農場進行高風險豬群甄別的檢測，挑選出來檢測的豬群必須具有代表性，來源要避免主觀臆斷，在高風險地區對合適豬群采樣的頻率可根據設施的類型來劃定，具有生物安全防護地區的采樣頻率比未采取防護的地區要低，表2顯示了采樣頻率。

對每個獨立豬群使用95/10的統計法來決定采集血清樣品的數量。95/10的采樣是指當豬群內有10%的血清陽性時，有95%可能在豬群內檢測到陽性。豬群采樣數量如下：少于100頭檢測25頭，100～200頭檢測27頭，201～999頭檢測28頭，1000頭以上檢測29頭。

如果交易市場和公豬/母豬屠宰場與識別的高風險場點更匹配，并能按照95/10原則進行采樣，那么則可放棄基于農場的采樣流程。

我們已經確定使用這種采樣流程的數學和統計學分析，根據附錄1，可分為三部分：有跨州移動豬的高風險區域豬群，在野豬狩獵俱樂部附近的養殖場，有野生豬群縣的戶外豬群的檢測。

為了實現快速檢測發現感染，假定每年檢測高風險區域跨州移動的1000個豬群、狩獵區10英里以內的75個豬群以及坐落于高風險區的500個戶外生產點，詳細信息見附錄2。

表2 采樣頻率

E 與野生豬群接觸豬群的報告與血清學檢測。

（1）豬群概述。適合這種監測的豬群包括位于野生豬群活動區的高風險豬群，這種監測方式建立在自愿上報野生豬群侵入到家養豬群的基礎上。

（2）病例定義。關注自己豬群周圍的野生豬群情況并且將情況上報到相關機構的生產者都可以參與監測。當豬群劃定為暴露組時就可以進行檢測，暴露組分為：直接的物理接觸，例如與野生公豬接觸的繁殖期母豬；可以看到明顯的與野生豬群接觸的痕跡，比如活動軌跡。

（3）數據來源。數據的主要來源包括符合概述中描述的暴露豬群的血清和（或）抗原的分析以及相關的信息。

（4）采樣方法。AVIC、國家獸醫與其委派者決定上報的野生豬群是否采樣，以及最合適的采樣時間和方法。如果豬群符合檢測的標準，我們會在接觸事件發生后的30～60天內在豬場進行95/10水平的采樣，如果豬群內出現相關的臨床癥狀，立刻進行病理學和抗原學的檢測。

這個調查中獲得的數據將會錄入AHSM項目組疫病數據庫的事件管理模塊中，為了顯示調查過程的進展和維護報告暴露事件的歷史記錄，上報給AVIC或國家獸醫的合格和不合格的案例都必須輸入到數據庫中。

樣品采集的信息由聯邦政府合作項目的負責人管理，并上傳到AHSM的PRV數據庫中，這些數據包括：場點信息（地理位置），暴露、樣品采集以及樣品檢測的日期，樣品篩選的原因，暴露的等級（地區、警戒線、性傳播等）。

這個監測流程內接收送檢樣的NAHLN實驗室必須將檢測的結果通過NAHLN的電子通信系統上報結果，并將信息傳達到AHSM的PRV數據庫。

盡管這是病例檢測中一個重要的環節，僅依靠可視的證據和自愿上報的話，這種采樣流程對快速檢測沒有太大的作用，因為快速檢測中，這個流程僅能達到最終目標的2%。如附錄1所述，每年檢測30個豬群，每個豬群花費300美元。

主要服務于目標2的監測流程：證明無疫

目標2的目的是證明美國商品豬PRV無疫，主要監測的基礎是公/豬和育肥豬的屠宰監測。

F 屠宰場公/母豬的血清學檢測。

（1）豬群概述。監測的豬群包括商業化養豬項目規定的并且在特定的聯邦指定屠宰場屠宰的母豬，為保證足夠的地理分布密度，也會挑選其他的屠宰場。由商品母豬和一些高風險母豬的檢測共同組成。

（2）病例定義。在認定的屠宰場內宰殺的代表性的血清樣品將使用NAHLN許可的血清學試驗和診斷儀器來檢測。由產業發起的，通過NSU指導的采樣方案中所識別的場點開展的高風險群目標采樣或許已發展為自愿項目的認定標準。

（3）數據來源。包括血清樣品的信息（收集和送檢的日期）、屠宰場的識別以及豬項目的識別號碼。項目相關人員將指導方法的開發以及為屠宰樣品的信息管理尋找資金支持，包括挑選樣品的地域信息。電子硬件和軟件系統將由CADIA的應用信息管理單位升級以保證采集的標注條形碼的樣品符合NSU提出的項目目標。

從這個流程中獲得標有條形碼豬樣品的NAHLN實驗室將通過NAHLN的電子通信系統公布所有的動物檢測結果（包括陰性與陽性結果），這些信息將上傳到AHSM的PRV數據庫。要求的樣品信息包括：場點信息（地理位置），收集送檢及檢測的日期，檢測結果（通過NAHLN的電子通信系統）。

（4）采樣方法。根據FSIS的動物處置報告系統截至2007年的數據，美國全國有659個聯邦指定豬屠宰場，表3列出了宰殺商品豬、公豬、母豬的屠宰場數量：

表3 豬的屠宰場

在宰殺母豬的382個屠宰場中，其中有32個也宰殺商品豬，這些屠宰場僅2007年就宰殺了3306962只母豬。有25個屠宰場主要宰殺母豬，宰殺3125074頭或者母豬總數占94.5%，我們有針對性地在這25個屠宰場內采集了至少90%的母豬樣品，還有許多屠宰場也都是當前商品豬（公/母豬）長期監測的采樣點。

電子動物疫病報告系統的數據將會更新母豬屠宰場清單，動物疫病報告電子系統是美國農業部食品安全監督服務（FSIS）的一個數據庫。挑選的豬場根據屠宰母豬的數量分為3到4級，在一些大型的工廠則會適當地降低采樣頻率，以防止采樣過于頻繁，小型工廠適當提高采樣的頻率。按照現在的標準，未來5年中，采樣量將從790000降到5000～6000，我們將建立一個過渡期，以滿足當前MSS的參與者所要求的經濟條件和樣品量，過渡期也考慮到監測項目的標準和PRV監測數據庫不斷發生變化的情況。

附錄1提到監測流程的相對權重、監測目標和優化，屠宰的公/母豬的監測列為第8條，根據加權法，這個流程的采樣數量比證明無疫所需要的樣品數量多80倍，但至今僅完成了目標的12%。使用附錄1所描述的方法來看，證明在商品豬群內的PRV無疫僅需要5000份樣品。

在州際貿易中自愿采用地方政策使用的精選動物的標簽必須考慮到有目的性的檢測PRV感染的高風險區，以及商品母豬群采樣的代表性，NSU和NCAHP強烈希望生產的參與者在接下來的兩年內自愿參與到識別項目中，識別系統的建立將有助于風險和隨機監測時樣品的采集，以及動物血清樣品的檢測。

G 屠宰場商品豬的肉汁檢測。

（1）豬群概述。監測群體包括聯邦政府挑選的屠宰場里屠宰的商品豬。送到食品安全監督機構所監測的豬代表了商品豬，這是因為這些屠宰場生產的商品是合法的州際/國際貿易的商品。

（2）病例定義。在選定的屠宰場內選擇的具有代表性的商品豬的肉汁樣品需要使用標準的肉汁檢測試驗進行檢測。另外，屠宰場如果能自愿接受豬群區域識別編號（大多是可見編號，主要是印記）將有助于高風險豬群的定向采樣，證明無疫的代表豬群的選擇，或在NSU州抽樣方案下的豬群中選擇（目標1——快速檢測D部分）。

（3）數據來源。這個監測流程的數據包括樣品采集和運送的日期、屠宰場、動物地域識別號碼以及符合病例的可進行地域識別的獸體（由屠宰場標注的代表地域信息的文身或尾號）的檢測結果。

項目的工作人員不斷發展方法和尋求資金，以允許獲得所有待宰豬批號的電子信息，自愿參與地域信息識別的待宰豬群的批號必須與其最后生活的區域相關聯，注意力將集中在工廠關注的關于機密信息的保護，這常常發生在那些第三方合作的私人企業將豬群所在地的一些敏感信息從屠宰場收集的信息分離出來，一旦這些信息被刪除后僅剩地域識別信息，這些信息將被傳送到NSU和CADIA用于監測算法的改進，電腦的硬件與軟件將由CADIA-AIM進行更新以滿足選擇性的完成大量數字（印記）的即時識別并確定采樣的地域信息，不斷更新的硬件、軟件系統等將提示采樣者所需的胴體是何時到達采集地點的。

國家獸醫處雇傭的動物衛生技術人員和/或接觸的人員需要采集：可識別批號的樣品，放入標有條形碼并綁定固定編號的收集帶中；采集的日期；運輸的日期等。

（4）采樣方法。最初是在14個已注冊的商品豬屠宰場內采樣，這些屠宰場宰殺的豬有50%是商品豬，添加新的屠宰場是為了保證足夠的地理覆蓋范圍，表4列出了目前美國采集肉汁病料的屠宰場和樣品數量。

為實現目標2，必須采集5000份肉汁樣品。因為樣品是用來證明無疫的，所以所有的樣品都不可重復，不能有相同日期、相同的批號或地域編碼，附錄1說明了這種監測流程的弊端以及必須采集5000份樣品才會有統計學意義。

表4 美國采集肉汁病料的屠宰場和樣品數量

以目標3為目的的監測方法：監控PRV國際或者國內的來源

目標3的目的在于監測商品豬PRV的潛在傳染源，其并不包括監測流程，但是包括確定高風險豬群的采樣目標以及評估PRV由國外傳入境的可能性。目標3由三部分組成：

（1）監測野生豬群，包括美國境內野生豬群的數量與分布以及監測野生豬群內PRV的存在情況。

（2）豬群禁獵區數量和分布的定期總結。

（3）監測國際上PRV的流行情況。

由于目標3支持監測活動但并不包含采樣的流程，所以目標3的介紹方式與之前不同，豬群概述、病例定義、數據來源以及采樣方法不全部適合目標3中的各個組成部分。

H 監測野生豬群。這部分是將每個州內野生豬群的分布和潛在風險通知到聯邦政府的管理人員和州立獸醫局。對野生豬群的監測可以細分為兩部分：已知的野生豬群的分布情況和已知野生豬群的PRV的流行情況。但是正如之前在“野生豬群”［本刊2018年16期《美國偽狂犬病監測計劃（1.01版）——概述》］中提到的，為了評估潛在的PRV暴露風險，我們認為所有的野豬都是PRV陽性。考慮到豬群被當地野生豬群感染的風險，通過采樣獲得血清學的監測數據往往存在一些不確定因素。

野生豬群的分布以及野生豬群的PRV監測：

（1）豬群概述。包括政府、聯邦管理中心、野生動植物保護機構劃定的所有野生豬群。野生豬群是指不受限制可自由活動的豬群。

（2）病例定義。我們可以在國家繪制的野生豬群分布圖中辨別上報的野豬和群體的規模，發現野生豬群時應上報給州或聯邦代理處，可能的話準確劃分出其分布的位置。繪制的位置將用來幫助確定高風險豬群的地理位置。

為確定PRV在野生豬群中的存在狀況，由國家和聯邦代理處劃分的野生豬群將由APHIS的野生動植物服務中心（WS）采樣并進行PRV檢測，并按照WS、VS以及政府管理人員的協議進行。這個監測項目的主要作用是證明一個地區是否有PRV的感染、PRV的陽性豬群是否在擴散，或者PRV在一個地區的野生豬群中是否消失。

（3）數據來源。所有用來繪制野生豬群分布的地圖的數據將由州立獸醫局及其合作單位進行收集和保存，并且使用即時繪圖系統跟蹤和監測野生豬群的動向，鏈接地址為http://www.uga.edu/scwds/dist_maps.htm。

送檢野豬血清和組織病料的監測數據信息包括采集的日期、送檢組織或樣品的類型、送檢豬的大概年齡或成熟程度以及送檢豬的來源等，WS的工作人員將采集的樣品的數據保存在ASHM的PRV數據庫的野生豬群部分。

收到標有條形碼的野生豬群樣品的NAHLN或其他PRV指定實驗室應該通過電子通信系統將結果從NAHLN數據庫上傳到AHSM數據庫，相關的政府、聯邦和WS的工作人員可以看到結果。

通過野豬PRV的血清學監測獲得的發現或信息將通過繪圖來展示已確定的PRV陽性豬群的分布，項目的工作人員將監控AHMS的數據庫并給當地政府提供信息。

（4）監控的資源。證明野生豬群中存在PRV的樣品由APHIS野生動植物服務中心（WS）提供。由WS采集的用于經典豬瘟（CSF）監測的樣品同樣也可以進行PRV和布魯氏菌病的檢測。樣品量的大小由VS與WS合作后每年每個州樣品的多少決定，并且依賴于空閑資金、CSF檢測項目和其他機構的幫助。

野生豬群發現后由VS及其合作者（現在為SCWDS）繪制在地圖上，聯邦和州立機構將野生豬群情況上傳到http://www.uga.edu/scwds/dist_maps.htm，可能的話，野生豬群的報告最好是驗證過的。

I 豬群禁獵區的數量和分布的日常總結。

（1）豬群概述。符合目標3的豬群包括所有生態保護區豬群和野生豬群。

（2）病例定義。有未知情況的野生豬群的禁獵區是通過直接或間接接觸給商品豬群帶來疫病的，了解禁獵區的位置有助于聯邦政府機構鑒別高風險豬群，這部分監測將協助其他的目標。在狩獵俱樂部周圍的高風險豬群將符合目標1的“需進行血清學檢測的高風險豬群”監測流程。

（3）數據和監控的資源。收集禁獵區的位置并在地圖上標注。相關的數據包括禁獵區是否開放、是否有豬群及其地理位置。州、聯邦及每個州內其他的管理機構應當每年將包含在管理計劃中的野生/傳統豬群的位置等信息作為其認證報告的一部分，這些信息由NSU使用并且繪制在NSU繪制的地圖上，或提供給VS的合作者進行標注，匯總的地圖將提供給NSU。

如有需要的話，政府有權對之前劃分在禁獵區內的豬群進行血清學監測。

J 監控國際疫病情況。通過進口生豬及其產品或其他動物而引入PRV

的風險是很小的，為監控來源于國際的風險，CEAH的問題解決中心（CEI）與OIE以及行業內工廠合作，以保證公眾及時掌握那些可能影響美國的疫病情況。CEI負責鑒別和監控那些可能會影響進口豬及其商品的一些變化。如果CEI在進口的豬或其商品中檢測到PRV存在的可能性增加時，CEI將通知NSU并調撥適合的人員進行控制，接著將實行國內的PRV監測計劃以及評估國內風險增加的情況。

另外，美國農業部國家衛生檢驗局將與國家動物衛生政策和項目員工、NCIE、OIE以及與美國獸醫局國際服務中心交流的其他國家的獸醫國際部門共同監控世界的動物健康水平，有關世界動物衛生狀況的信息會在這些組織以及美國獸醫處的其他部門和動物衛生機構之間進行交流。PRV正是國際之間交流的熱點之一，當發現存在風險的國際來源時，NSU及其他管理機構將收到通知，NSU將評估這個風險并根據結果實施相應的國內監測計劃。