0.01%硫酸阿托品滴眼液的制備及質量標準研究

夏愛波 拜如霞 汪靜 李建和

【摘 要】

目的：建立 0.01 %硫酸阿托品滴眼液的制備工藝及其質量控制方法。方法：取硫酸阿托品與輔料制成濃度為 0.01 %的微量硫酸阿托品滴眼液，以乙腈-庚烷磺酸鈉磷酸鹽溶液（含 0.05 mol·L-1 磷酸二氫鉀溶液和 0.0025 mol L-1庚烷磺酸鈉溶液，用磷酸調節pH 至3.9）（18：82）為流動相進行洗脫，用高效液相色譜法測定硫酸阿托品的含量。結果：所得制劑為無色澄明液體，硫酸阿托品檢測濃度線性范圍為 20～2000μg·mL-1 （r =0.9999），平均回收率為102.32% （RSD =0.91%，n =9）。結論：該制劑制備工藝簡單，含量測定方法簡便、準確，質量可控。

【關鍵詞】 硫酸阿托品；滴眼液；制備；高效液相色譜法

【中圖分類號】R969.4 【文獻標志碼】

B 【文章編號】1005-0019（2018）16-085-01

1 儀器和試藥

LC -20AT高效液相色譜儀，包括 SPD -20A 檢測器 、 CLAS S -VP6.12 SP1 色譜數據系統 、SPD-20A 分光光度計 （日本島津公司）；ME204E 電子分析天平 （梅特勒-托利多儀器有限公司）；PHS-3C精密PH計（上海雷磁儀器廠）；STY滲透壓摩爾濃度檢測儀（北京漢柏科創儀器廠）。

硫酸阿托品對照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號：715 -20001）；硫酸阿托品 （生產企業：江西立信藥業有限公司；批準文號：國藥準字H36021249）；水為注射用水，乙腈以及庚烷磺酸鈉鹽兩者為色譜純，其他相關試劑皆為分析純 。

2 處方工藝優化

在確定阿托品滴眼液主藥規格為100 ug·mL-1的基礎上，對本處方工藝進行優化。

2.1 抑菌劑的選擇及用量確定 眼用制劑的pH值范圍一般是 5.5～7.8，過高或過低都會使眼部有刺激感，因而限定了部分抑菌劑的使用范圍。設計眼用制劑處方時，pH值的變化對抑菌劑的效力影響很大，如苯扎氯銨在pH 4～10時具有抗菌活性，并隨pH值增高而增強；羥苯乙酯適宜的pH值范圍很大，且具有廣譜抗菌活性，但其水溶液只在pH 3～6范圍內熱壓滅菌而不發生降解；苯甲醇在pH 5以下時活性最強，pH 8以上時幾乎沒有活性；三氯叔丁醇在pH高5.5時活性及穩定性下降。pH不僅影響抑菌劑的活性，而且可能影響其穩定性[4]。由于本制劑的PH值范圍為6.0～7.5，所以，選用苯扎氯銨作為抑菌劑較為合適。苯扎氯銨的用量一般為0.005～0.02%[5]，由于本制劑主要用于青少年近視且需長期使用，為盡可能減少其毒性，因此選擇最低劑量0.005%作為抑菌劑用量。同時為了增強抑菌劑的殺菌力，合用0.05%EDTA作為輔助抑菌劑，以達到1時內重新消滅污染的細菌和霉菌的目的[4]。

2.2 抑菌劑不同流動相選擇不同 選用羥苯乙酯作為抑菌劑，由于阿托品和羥苯乙酯的溶解性不同，使得流動相在選擇中很難兼顧兩者，必須進行梯度洗脫，才能達到出峰快，峰形好的效果，選用苯扎氯銨作為抑菌劑，不需進行梯度洗脫就能達到快速分離效果，如表1、2所示。

3 處方與制備

3.1 處方 硫酸阿托品 0.01 g，氯化鈉 0.31g ，硼酸 1.17g，硼砂 0.11g，苯扎氯銨 0.005%，EDTA-2Na 0.05%，注射用水加至100mL。

3.2 制備 稱取適量硼酸、硼砂以及氯化鈉，對其進行充分的攪拌并達到完全溶解的狀態，冷卻后將硫酸阿托品以及苯扎氯銨加入到溶液中，繼續進行充分的攪拌并達到完全溶解的狀態，然后過濾溶液，加注射用水于自濾器之上，達到 100mL，攪拌均勻，使用流通蒸汽（100 ℃）滅菌 半小時，最后進行無菌分裝。

4 質量控制

4.1 性狀 澄明無色液體。

4.2 鑒別

4.2.1 托烷生物堿類的鑒別反應[6]

由于用藥典法進行鑒別其結果為陰性，故此改進了對托烷生物堿類的鑒別方法。取供試品約50ml（約相當于硫酸阿托品 5mg）置分液漏斗中，加氨試液堿化（pH值約為8），用氯仿30ml分次提取，合并氯仿液，待氯仿揮干后按藥典法操作。殘渣顯托烷生物堿類的鑒別反應。

4.2.2 本品顯硫酸鹽的鑒別反應[6]。

4.3 檢查

4.3.1 PH值 在6.0～7.5之間，其它要與《中國藥典》2015版四部通0631相符合符合[6]。

4.3.2 滲透壓 為285～310 mOsM，其它應符合《中國藥典》2015版四部通則0632[6]。

4.3.3 無菌 取本品依法檢查應符合《中國藥典》2015版四部通則1101[6]。

5 含量測定

5.1 色譜條件及系統適用性試驗 5C18-MS-Ⅱ（5μm ，4.6ID×250 mm）；流動相：乙腈-庚烷磺酸鈉磷酸鹽溶液（含 0.05 mol·L-1 磷酸二氫鉀溶液和 0.0025 mol L-1庚烷磺酸鈉溶液，用磷酸調節pH 至3.9）（18：82）；流速：1.0mL·min-1；柱溫：30℃；檢測波長：210nm；進樣量：20μL。取20uL對照品溶液，將其注入液相色譜儀，理論板數應不低于4000（按硫酸阿托品峰計），硫酸阿托品毗鄰雜質峰之間的分離度要與相關要求相一致。

5.2 溶液的制備

5.2.1 供試品溶液 按處方配制0.01%硫酸阿托品滴眼液，用水溶解后加水定容至刻度，混勻，得到含硫酸阿托品100μg·mL-1 的供試品溶液。

精密量取本品適量，即得。

5.2.2 對照品儲備液 精密稱取在 120 ℃干燥至恒重的硫酸阿托品對照品0.0203g，置于100 mL量瓶中，用水溶解后加水定容至刻度，混勻，得濃度為203μg·mL-1的阿托品對照儲備液。

5.3 方法學考察

5.3.1 線性關系考察 精密吸取阿托品對照品儲備液，加水配制成濃度為25.38、50.75、76.13、101.5、126.88、152.25、177.63、203 μg·mL-1的阿托品溶液，過濾后將其注入液相色譜儀，微孔濾膜參數為0.45 um，測定條件為“5.1”項下色譜。分別以對照品溶液濃度（X，ug·mL-1）以及峰面積積分值（Y）為橫、縱坐標，將標準曲線制備出來，得回歸方程： Y = 25136X – 885.19 ，r = 0.9999，表明在 20～200 ug·mL-1范圍內硫酸阿托品顯示的線性關系良好。

5.3.2 穩定性考察 取適量本品，參照“5.2.1”項下方法進行供試品溶液的制備，分別在 0、1、2、4、6、12、24 h小時以上述色譜條件為參考進樣，對色譜圖進行詳細記錄。結果顯示硫酸阿托品峰面積RSD= 0.38% ，則表明在 24小時內樣品有著良好的穩定性。

5.3.3 精密度考察 取適量相同的供試品溶液，進行連續六次進樣，對硫酸阿托品峰面積進行測定。結果顯示為RSD = 0.10% ，則表明儀器有著良好的精密度。

5.3.4 重復性考察 平行制備6份供試品溶液，方法以“5.1”項下為準，分別進樣。結果顯示硫酸阿托品峰面積RSD = 0.88% ，則表明方法有著良好的重復性。

5.3.5 回收率試驗 硫酸阿托品對照品精密稱取約 0.008g、0.01g和0.012g，不同克數各3份，將其分別置于容積為100 mL的量瓶中，按處方比例將適量處方量空白輔料加入其中，加水溶解，直至稀釋到規定刻度，將其配制成模擬樣品溶液，濃度分為低（80 %））、中（100 %）、高（120 %）三個等級。在液相色譜儀注入20 μL，回收率按外標法計算。結果，其平均回收率為102.32%，RSD = 0.91% ，說明該方法可行。回收率試驗結果見表1。

6 討論

因為硫酸阿托品分子結構中不存在共軛結構，紫外吸收不明顯，鑒于此，參照相關規范[7]，在 210 nm 近紫外波長處對阿托品的含量進行檢測，以便于紫外檢測器檢測。現行[8]的中和滴定法為規格不同的硫酸阿托品滴眼液的質量標準，中和滴定法的突出優勢是所需設備儀器較少且操作簡單，但缺陷是容易受到標準液、指示劑等的影響，導致結果RSD出現較大偏差。本課題考察了乙腈-庚烷磺酸鈉磷酸鹽溶液[9]作為流動相在不同比例時的色譜圖，結果表明流動相18：82作為洗脫濃度，即可保證阿托品的分離效果不受其它溶劑和雜質峰的影響，各色譜峰之間的分離度較好，且基線平穩峰形較好。另外通過對流動相pH值的調節，使色譜峰峰形變銳，減小拖尾。本文所采用的方法通過方法學驗證后，有著結果準確、靈敏、簡便以及專屬性好的特點，適用于測定0.01% 硫酸阿托品滴眼液的含量。

參考文獻

[1] Gwiazda JE， Hyman L， Norton TT， et al. Accommodation and related risk factors associated with myopia progression and their inter-action with treatment in COMET children[J]. Invest phthalmol VisSci， 2004， 45： 2143-2151.

[2] 張世磊，賀艷麗. 眼用制劑中抑菌劑的應用[J]. 食品與藥品2010，12（9）：343-345

[3] 催福德. 藥劑學[M]. 人民衛生出版社560

[4] 國家藥典委員會編. 中華人名共和國藥典2015年版四部[M]. 中國醫藥科技出版社. 2015年：35，77，78， 136

[5] 湖南省醫療機構制劑規范[M]. 湖南科學技術出版社. 2016年：625

[6] 中國醫院制劑規范（西藥制劑） [S]. 第2版. 1995年：182

[7] 陳希， 張文婷. 硫酸阿托品注射液有關物質和pH值的相關性分析[J]. 今日藥學，2016， 26 （2）：112-114