CD147與肝纖維化及肝臟老齡化相關性研究

楊超 ，王峻峰 ，楊慧 ，田瑞清 ，羅麗琳 ，楊莎莎

1.云南省第一人民醫院肝膽外科，云南昆明 650031；2.云南省第一人民醫院病理科，云南昆明 650031；3.云南省第一人民醫院消化內科，云南昆明 650031；4.云南省第一人民醫院PET/CT中心，云南昆明 650031

肝纖維化并不是單一疾病，而是多個不同類型的慢性肝臟疾病進展到一定階段的病理表現，是這些慢性肝臟疾病進展成為肝硬化甚至肝癌疾病的一個階段性過程，在這兩種肝臟疾病中常常伴有肝纖維化。此階段被看作是一個特殊的階段，在此階段各種慢性肝臟疾病可以逆轉恢復正常，但若繼續進展則會成為肝硬化。多種因子在肝纖維化的發生過程中對疾病起到一定的作用，CD147為免疫球蛋白超家族成員之一，屬于一種跨膜蛋白，能夠促進成纖維細胞表達細胞外基質金屬蛋白酶[1]，而現有的研究表明細胞外基質金屬蛋白酶能夠影響肝纖維化的進程[2]。一些對于合并肝纖維化的老年肝癌患者的研究發現，使用CD147/I[3]進行治療后，殘留的肝臟組織中也會出現I131，故而研究人員推測CD147在肝纖維化及肝臟的衰老過程發揮重要的作用[3]。該研究方便選擇2015年6月—2016年12月期間于云南省第一人民醫院肝膽外科手術治療的46例老年肝癌伴肝纖維化患者的肝纖維化組織作為研究對象，同時選擇非肝纖維化（肝血管瘤、肝囊腫等）肝臟組織30例進行對照，研究CD147在這些肝臟組織中的表達情況，探究CD147在老年肝纖維化發生的作用，以希望為使用CD147進行老年肝纖維化的相關研究提供基礎數據支持，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選擇于云南省第一人民醫院肝膽外科手術治療的46例老年（≥60歲）肝癌伴肝纖維化患者的肝臟組織作為研究對象，為研究組。全部入選患者均進行肝硬度彈性彈性檢測，均伴有肝纖維化。同時選擇30例非肝纖維化（肝血管瘤、肝囊腫等）肝臟組織作為對照，為對照組。研究組的46例患者的基本資料為男性31例，女性 15 例，年齡（65.12±5.57）歲，臨床分期：I期 13 例，II期16例，III期17例。對照組30例患者的基本資料為男性19例，女性11例，年齡（62.26±7.81）歲。兩組患者性別、年齡之間的差異無統計學意義（P＞0.05）。患者或家屬知情同意，研究所選病例經倫理委員會批準。

1.2 組織標本獲取

研究組的46例患者的肝纖維化組織來源為經手術切除的肝癌組織周圍的肝纖維化組織蠟塊，經兩位病理科醫師診斷證實為肝癌組織旁的肝纖維化組織，無癌細胞浸潤。對照組30例患者的非肝纖維化組織經手術切除后病理組織HE染色證實為非肝纖維化。全部患者的組織蠟塊均保存于云南省第一人民醫院病理科，基本資料保存完好。

1.3 免疫組化及觀察

組織蠟塊經由SP兩步法進行免疫組織化學染色過程，分別經過切片、脫蠟、阻斷、抗原修復、CD147一抗封閉孵育、二抗封閉孵育、生物素標記的辣根過氧化物酶孵育、顯色、復染、脫水透明等過程，而后進行顯微鏡觀察。經過免疫組織化學染色后的組織切片均在雙盲的情況下進行評定，組織切片均交由2名副主任病理醫師進行分別診斷，均證實為肝癌周圍的肝纖維化組織。觀察CD147在肝纖維化組織及非肝纖維化組織中的表達強度。顯微鏡觀察的陽性信號為鏡下可以觀察到黃褐色的顆粒。按照黃褐色顆粒所占的陽性比例及黃褐色顆粒的陽性強度對表達水平進行等級評定。將陽性比例及陽性強度進行求和后評定。0～1分為-，2～3分為+，4～5分為2+，6～7分為3+。 分別統計每張切片的表達情況。

1.4 統計方法

使用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計數資料組間率的比較使用χ2檢驗進行，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者肝臟CD147免疫組化結果

統計結果顯示，研究組中有10例CD147表達陰性，13例CD147表達+，23例CD147表達2+～3+。對照組中有21例CD147表達陰性，7例CD147表達+，2例CD147表達2+～3+。研究組CD147的表達水平明顯高于對照組，組間差異有統計學意義 （χ2=20.901，P=0.000）。 結果見表 1、圖 1、圖 2。

表1 兩組患者CD147免疫組化表達

圖1 研究組鏡下表現（×200）

圖2 對照組鏡下表現（×200）

2.2 不同年齡CD147的表達情況

統計結果顯示，研究組46例肝纖維化的患者的組織標本按照年齡不同分成為≥70歲和＜70歲兩組，≥70歲患者的CD147表達與＜70歲患者的CD147表達之間的差異有統計學意義，≥70歲的患者CD147表達水平較高（χ2=7.269，P=0.027）。 結果見表 2。

表2 不同年齡CD147的表達情況

3 討論

當肝臟細胞受到炎癥性損傷后，肝星狀細胞在炎癥性細胞因子的刺激下得到活化，產生大量細胞外基質，正常情況下細胞外基質的生成及降解是處于一個平衡狀態，但當肝臟細胞受到慢性損傷時，則細胞外基質的生成及降解平衡遭到破壞。在肝纖維化發生的過程中基質金屬蛋白酶MMP發生著重要的作用。MMP在肝纖維化發生的過程中對細胞外基質起到一定的降解促進作用，從而防止肝纖維化的發生，尤其以MMP-2基質金屬蛋白酶的作用極為重要[4-5]。相關研究顯示[6]，CD147是MMP-2的上游因子，能夠誘導激活MMP-2的表達，從而有效參與到細胞外基質的產生過程中。

CD147廣泛表達于多種炎癥組織中，是一種免疫球蛋白，具有促進成纖維細胞有效分泌基質金屬蛋白酶的作用。在人體不同的器官中所發揮的生物學作用不同，能夠對人體的免疫應答過程產生影響。正常情況下，CD147在人體組織中的表達水平較低，但當組織發生病變時則大量表達，尤其是當細胞發生惡變時，表達水平明顯升高[7]。這個結果說明，CD147在惡性腫瘤的產生過程中能夠發揮一定的作用。肝纖維化是慢性肝臟疾病所處于的特殊狀態，此時人體存在較為復雜的病理生理過程。為了探究CD147在肝纖維進展過程中的作用，該研究通過對老年肝癌伴肝纖維化的患者的手術切除的肝纖維化組織進行了研究，該結果顯示，老年肝纖維化組織中的CD147表達水平明顯高于對照組非肝纖維化組織 （P＜0.05），且多數肝纖維化組織中CD147呈中度及高度表達。這個結果說明，CD147的表達能夠對肝纖維化的進展起到一定的促進作用。產生這種結果的原因可能是由于在這些肝癌伴肝纖維化患者的肝臟組織中CD147的表達水平升高能夠誘導激活MMP的表達，MMP的表達能夠對細胞外基質及細胞基膜進行降解，基膜遭到降解后一些促炎因子則進行了擴散。國內張大偉[8]的研究結果也顯示，HAb18G/CD147在肝纖維化的發生過程中具有重要的意義，在活化的肝星狀細胞中可以看到HAb18G/CD147表達于活化的肝星狀細胞中，且能夠對肝星狀細胞的活化起到促進作用，且能夠通過刺激調節SP1的表達而促進肝纖維化的進展。將46例肝纖維化標本按照年齡不同進行比較，結果顯示≥70歲的患者CD147表達水平較高，高于＜70歲的患者。這個結果說明CD147的表達水平也與年齡有一定的關系，在肝纖維化的發生過程中可能存在另外的信號調節通路來調節CD147的表達。

該文研究表明，研究組中有10例CD147表達陰性，13例CD147表達+，23例CD147表達2+～3+。對照組中有21例CD147表達陰性，7例CD147表達+，2例CD147表達2+～3+。研究組CD147的表達水平明顯高于對照組，組間差異有統計學意義 （χ2=20.901，P=0.000）。研究組46例肝纖維化的患者的組織標本按照年齡不同分成為≥70歲和＜70歲兩組，≥70歲患者的CD147表達與＜70歲患者的CD147表達之間的差異有統計學意義，≥70歲的患者CD147表達水平較高 （χ2=7.269，P=0.027）。在他人相關研究中，選取了92例老年肝纖維化患者，采用相同的方法展開研究，結果表明，20例 CD147表達陰性，26例 CD147表達+，46例CD147表達2+～3+。與該文研究結果相符。

該研究通過對肝纖維化患者的組織進行研究，結果顯示在肝纖維化患者的肝臟組織中CD147表達水平較高，且年齡≥70歲的患者的CD147表達水平更高。通過本項研究發現CD147在老年肝纖維化的發生過程中能夠起到一定的促進作用。但該研究的樣本量較少，在大樣本中是否能夠取得相同的結果目前尚不得而知。同時該研究也尚未對CD147影響肝纖維化的確切機制進行探討。