桑葉提取物、茶多酚及其復配物的抗氧化和降血糖活性

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(華南理工大學食品科學與工程學院,廣東廣州 510640)

桑葉(MorusalbaL.),是我國著名的藥食兩用草本植物,富含多種生物活性物質,如多酚、生物堿、多糖、維生素等。《本草綱目》曾記載,桑葉“汁煎代茗,能止消渴”。據(jù)報道,桑葉及其提取物具有降血糖[1]、降血脂[2]、抗糖尿病[3]、抗氧化[4]和抗腫瘤[5]等藥理作用。茶多酚(Tea polyphenloys)是茶葉中一類多羥基酚類化合物的總稱,主要成分包括兒茶素類、黃酮類、黃酮醇類、酚酸類、縮酚酸類及聚合酚類等。大量研究表明,茶多酚具有抗氧化[6]、降血糖[7]、降血脂[8]和調節(jié)免疫[9]等生理活性,在功能食品方面具重要的應用前景。

相對于單一的活性物質,復配兩種或多種活性物質具有多靶點、多種作用機制的優(yōu)勢。同時,復配聯(lián)合產生的協(xié)同效應可以增強功能活性、減少劑量、延緩耐藥性發(fā)展和降低毒性。李玲[10]發(fā)現(xiàn)桑葉和苦瓜提取物的復配物抗氧化效果顯著,具有協(xié)同作用;Kan等[11]發(fā)現(xiàn)桑葉提取物在與葫蘆巴籽、西洋參復配使用時,可以有效預防胰島素抵抗、糖耐量受損;馬燕妮[12]發(fā)現(xiàn)桑葉提取物與其它草本復配物具有協(xié)同抗氧化作用。此外,作為天然、高效、安全的抗氧化劑,茶多酚已得到廣泛應用。有研究表明,茶多酚對糖尿病小鼠的高血糖、高血脂具有一定的改善作用[13]。綜合桑葉提取物與茶多酚的優(yōu)勢,研究其復配物協(xié)同抗氧化兼聯(lián)合降糖的效果,不僅可進一步提高因自由基作用引起的疾病和糖尿病的治療效果,還能節(jié)省能源、降低成本。為此,本文將桑葉提取物與茶多酚進行復配,制備出二者復配物,研究該復配物對ABTS+、DPPH自由基清除能力,以及對糖尿病關鍵酶(α-淀粉酶、蔗糖酶和麥芽糖酶)體外抑制活性,為開發(fā)抗氧化、降血糖多功能復合劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

桑葉提取物和茶多酚 分別購自西安圣青生物科技有限公司和成都艾科達化學試劑有限公司,其主要活性成分及含量如表1所示。

表1 原料的主要活性成分及含量Table 1 The bioactive constituents and content of raw materials

維生素C、豬胰腺α-淀粉酶(Type VI-B，50 U/mg)、ABTS(2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid))、DPPH(1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl) Sigma-Aldrich公司;阿卡波糖片(批號:19990205,規(guī)格:50 mg/片) 拜耳醫(yī)藥保健有限公司;Glucose C-Ⅱ Test Wako kit(葡萄糖檢測試劑盒) Wako Pure公司;健康SD大鼠(體質量180～200 g) 廣州中藥大學實驗動物中心;其他試劑 均為分析純。

FSH-2A高速勻漿機 常州市偉嘉儀器制造有限公司;TGL16M/MR臺式高速冷凍離心機 湖南邁達儀器有限公司;Scinentz-z18NZ冷凍干燥機 寧波新芝生物科技股份有限公司;SpectraMax? i3多功能酶標儀 Molecular Devices公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 MLE和TP單獨作用溶液的配制 分別稱取50 mg的MLE和TP,加入10 mL的去離子水配制成5 mg/mL的樣品溶液。將MLE和TP樣品溶液稀釋成合適的濃度進行ABTS+自由基和DPPH自由基清除能力和糖尿病關鍵酶(豬胰腺α-淀粉酶、鼠小腸蔗糖酶和麥芽糖酶)活性抑制的測定。具體如下:

DPPH自由基清除能力測定:取MLE和TP樣品稀釋液0.0001、0.001、0.005、0.01、0.05、0.1、1 mg/mL的濃度進行測定。

ABTS+自由基清除能力測定:由于低濃度的MLE清除ABTS+自由基效果較弱,取0.005、0.01、0.05、0.1、0.4、0.7、1 mg/mL的MLE進行,TP所取的濃度與上述DPPH自由基清除能力測定的濃度相同。

α-淀粉酶活性抑制的測定:取MLE和TP稀釋液0.01、0.1、0.5、1、3、5 mg/mL的濃度進行測定。

蔗糖酶活性抑制的測定:取0.001、0.01、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1、2、3、4、5 mg/mL的MLE和TP溶液進行測定。

麥芽糖酶活性抑制的測定:取0.01、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1、2 mg/mL的MLE和TP溶液進行測定。

1.2.2 MLE和TP復配物的配制 以MLE和TP質量比為3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3制取二者的復配物,MLE與TP復配物的組成見表2。根據(jù)MLE和TP單獨作用時的抗氧化活性和糖尿病關鍵酶活性抑制測定的結果,配制適當?shù)目傎|量濃度為0.001 mg/mL和1 mg/mL的復配液。取濃度為0.001 mg/mL的復配液進行DPPH和ABTS+自由基清除能力測定,并與MLE和TP單獨作用的結果相比較,然后選取自由基清除能力最佳的復配物進行其他濃度的活性追蹤;取1 mg/mL的復配液對三種糖尿病關鍵酶抑制活性的測定,與MLE和TP單獨作用的效果相比較,選取其中酶抑制效果最好的復配物進行其他濃度的活性追蹤。

表2 桑葉提取物與茶多酚復配物的組成Table 2 Composition of the compounds of MLE and TP

1.2.3 抗氧化活性測定

1.2.3.1 DPPH自由基清除能力測定 DPPH自由基清除能力測定參考Brand-Williams等[14]的方法并加以改進。精確稱取19.70 mg DPPH試劑,用無水乙醇溶解于250 mL容量瓶中,定容,配制200 μmol/L DPPH工作液。移取1 mL樣品溶液和3 mL DPPH無水乙醇溶液于l0 mL試管中,混勻,室溫下避光放置30 min后,在517 nm處測定樣品吸光值Ai。樣品對照組用相同體積的無水乙醇代替DPPH,吸光值用Aj表示;空白組以無水乙醇代替樣品溶液,用A0表示,同時以相同濃度的VC作為控制對照組。DPPH自由基清除率計算公式如下:

DPPH自由基清除率(%)=[1-(Ai-Aj)/A0]×100

式(1)

1.2.3.2 ABTS+自由基清除能力測定 ABTS+自由基清除能力測定參考Roberta Re[15]方法并加以改進。ABTS+使用液配制方法:將5 mL ABTS溶液(7 μmol/L)和5 mL K2S2O8溶液(2.45 μmol/L)避光反應12 h后生成,該使用液提前1 d配制,并且必須當天使用。使用前用水稀釋到吸光值在732 nm處為0.70±0.02。移取0.4 mL不同濃度的樣品溶液和3 mL ABTS+使用液于l0 mL試管中,室溫下避光反應30 min,于732 nm波長下檢測樣品吸光值A1,用相同體積的樣品溶劑代替樣品溶液作為對照,吸光值為A0,以相同濃度的VC作為控制對照組。計算公式為:

ABTS+自由基清除率(%)=[1-(A1-A0)/A0]×100

式(2)

1.2.4 降血糖活性測定

1.2.4.1α-淀粉酶抑制活性的測定α-淀粉酶抑制活性的測定參考Chen[16]方法稍作修改。用0.1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH6.9)配制1%(w/v)馬鈴薯淀粉并煮沸15 min作為底物。淀粉酶溶液用0.1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH6.9)配制成所需濃度。取0.5 mLα-淀粉酶溶液(1 U/mL)于試管中,加入0.5 mL樣品溶液,在37 ℃水浴中孵化10 min后,添加底物0.5 mL可溶性淀粉溶液,在25 ℃室溫下反應10 min。最后,加入1 mL DNS試劑[20 mL 96 μmol/L 3,5-二硝基水楊酸(用水配制)與8 mL 5.315 mol/L酒石酸鉀鈉(用2 mol/L NaOH配制),再用12 mL去離子水稀釋]。將試管放入沸水浴中,滅酶5 min,冷卻后加入5 mL去離子水稀釋,在520 nm波長下檢測樣品吸光值為A1。以相同濃度的阿卡波糖為陽性對照,同時設定樣品對照組(樣品+緩沖液+底物),吸光值為A2;空白組(緩沖液+酶液+底物)及空白對照組(緩沖液+緩沖液+底物),吸光值分別為A3、A4。抑制劑對α-淀粉酶抑制率的計算公式為:

α-淀粉酶抑制率(%)=[1-(A1-A2)/(A3-A4)]×100

式(3)

1.2.4.2 蔗糖酶和麥芽糖酶的制備 蔗糖酶和麥芽糖酶的制取方法參考GU Shu-Jing[17]的方法并稍作修改。將健康大鼠禁食12 h后,放血處死,取其小腸置于含pH6.9,0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液的培養(yǎng)皿漂洗,反轉小腸內腔,剝離小腸刷狀緣膜,拭干,按W∶V=1∶5加入磷酸鹽緩沖溶液后勻漿,以上操作在冰浴下完成。將收集到的液體在4 ℃條件下離心(11000 r/min,30 min),取上清液加入固體硫酸銨使溶液達到飽和,靜置過夜,將其在4 ℃條件下離心(11000 r/min,30 min),棄上清液,取沉淀用緩沖液溶解,置于同樣的緩沖液中透析,最終所得溶液為酶液,放置-80 ℃冰箱備用。二糖酶活力單位的定義:在37 ℃、pH6.0的條件下,每毫克蛋白內容物每分鐘水解1 nmol相應底物作為1個酶活力單位(U)。蛋白定量測定采用考馬斯亮藍法。

1.2.4.3 蔗糖酶和麥芽糖酶抑制活性的測定 蔗糖酶和麥芽糖酶抑制活性的測定參考文獻[18]的方法稍作修改。蔗糖、麥芽糖和樣品均用0.1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液配成所需濃度。吸取0.5 mL樣品溶液于試管中,加入底物(0.2 mL的3.5 mmol/L麥芽糖溶液,或0.5 mL的56 mmol/L蔗糖溶液),搖勻,在37 ℃條件下水浴孵化5 min。然后加入0.5 mL的酶溶液,37 ℃條件下繼續(xù)反應20 min。最后,將試管放入沸水中滅酶5 min。冷卻后用葡萄糖檢測試劑盒在505 nm處檢測樣品吸光值為A1。以相同濃度的阿卡波糖為陽性對照,同時設定樣品對照組(樣品+緩沖液+底物),吸光值為A2;空白組(緩沖液+酶液+底物)及空白對照組(緩沖液+緩沖液+底物),吸光值分別為A3、A4。樣品抑制劑對蔗糖酶和麥芽糖酶抑制率計算公式為:

蔗糖酶/麥芽糖酶抑制率(%)=[1-(A1-A2)/(A3-A4)]×100

式(4)

1.2.5 聯(lián)合指數(shù)(Combination Index,CI) 為了判斷MLE與TP的復配物是否具有協(xié)同作用,根據(jù)Chou Ting-Chao[19]藥物聯(lián)合作用原理,用聯(lián)合指數(shù)(CI)判定藥物1和藥物2聯(lián)合作用效果,CI<1為協(xié)同作用;CI=1為疊加作用;CI>1為拮抗作用。

聯(lián)合指數(shù)(CI)=D1/Dx1+D2/Dx2

式(5)

注：式中D1、D2分別是藥物1和藥物2聯(lián)合作用抑制率為50%時的作用濃度;Dx1、Dx2是藥物1和藥物2單獨作用時的作用抑制率為50%時的作用濃度。

1.3 統(tǒng)計分析

所有的數(shù)據(jù)平行測定3次,各組數(shù)據(jù)均以(平均值±標準誤)表示,用Excel 2010、Origin 8.0和SPSS 20.0等軟件處理,Duncan’s multiple range test分析差異顯著性(p<0.05)。

2 結果與分析

2.1 抗氧化活性分析

2.1.1 DPPH自由基的清除作用

2.1.1.1 MLE和TP對DPPH自由基的清除作用 由圖1可知,TP和MLE都具有一定的清除DPPH自由基效果,且在0～0.05 mg/mL的濃度范圍內,二者清除自由基的能力隨著濃度的增加而顯著上升。在濃度為0.05 mg/mL時,TP、MLE及VC對DPPH自由基清除率分別為88.86%、36.01%及80.48%。在0.05～1.0 mg/mL的濃度范圍內,隨著濃度的增加,TP和MLE對DPPH自由基的清除能力緩慢增加,且在1.0 mg/mL時,TP、MLE及VC對DPPH自由基清除率分別為93.96%、68.16%和95.12%。總體而言,TP和VC對DPPH自由基的清除能力相當,MLE較弱。

圖1 MLE及TP清除DPPH自由基能力Fig.1 DPPH radical scavenging activities of MLE and TP

2.1.1.2 復配物對DPPH自由基的清除作用 總質量濃度為0.001 mg/mL的MLE和TP及其復配物對DPPH自由基的清除效果如圖2所示。由圖2可知,復配物MLE∶TP=1∶1和MLE∶TP=1∶3對DPPH自由基的清除率顯著高于MLE(p<0.05);與TP組比較,復配物MLE∶TP=1∶3對DPPH自由基清除率與TP組差異不顯著(p>0.05),其它均顯著較低(p<0.05)。選取抗氧化效果較好的兩組復配物(MLE∶TP=1∶1和MLE∶TP=1∶3)進行其它濃度的抗氧化活力追蹤。

圖2 MLE-TP復配物清除DPPH自由基能力Fig.2 DPPH radical scavenging activities of MLE-TP compounds

如圖3所示,兩組復配物對DPPH自由基清除能力均呈劑量依賴性,且MLE∶TP=1∶1和MLE∶TP=1∶3對DPPH自由基的半最大效應濃度(EC50)分別為0.010 mg/mL和0.008 mg/mL,大于TP(0.004 mg/mL),小于MLE(0.088 mg/mL)。根據(jù)藥物聯(lián)合作用理論計算聯(lián)合作用指數(shù)CI,復配物MLE∶TP=1∶1和MLE∶TP=1∶3對DPPH自由基的CI分別為1.307、1.523 mg/mL。由于CI>1 時,表明MLE和TP復配的兩組復配物MLE∶TP=1∶1和MLE∶TP=1∶3對DPPH自由基的清除能力表現(xiàn)為拮抗作用。

圖3 MLE和TP及其復配物清除DPPH自由基能力曲線Fig.3 DPPH radical scavenging activities of MLE,TP and their compounds

2.1.2 ABTS+自由基的清除作用

2.1.2.1 MLE和TP對ABTS+自由基的清除作用 由圖4可知,TP和MLE具有一定的清除ABTS+自由基效果。在0～0.05 mg/mL的濃度范圍內,TP對ABTS+自由基的清除能力隨著濃度的增加而顯著上升,在0.05 mg/mL時,TP和VC對ABTS+自由基的清除率分別為99.82%和95.76%。與TP相比,在0.05～1.0 mg/mL的濃度范圍內,MLE對ABTS+自由基的清除能力隨著濃度的增加而緩慢增加,在1.0 mg/mL時,其對ABTS+自由基的清除率為99.94%。

圖4 MLE及TP清除ABTS+自由基能力Fig.4 ABTS+radical scavenging activities of MLE and TP

2.1.2.2 復配物對ABTS+自由基的清除作用 圖5為總濃度0.001 mg/mL 時,MLE和TP及其復配物對ABTS+自由基的清除效果。如5圖所示,TP對ABTS+自由基的清除效果均顯著優(yōu)于五組復配物(p<0.05),且復配物均顯著優(yōu)于MLE(p<0.05)。在五組復配物中,MLE∶TP=1∶1和MLE∶TP=1∶3對ABTS+自由基的清除率最高,且相當。故選取此二組進行其它濃度的抗氧化活力追蹤。

圖5 MLE-TP復配物清除ABTS+自由基能力Fig.5 ABTS+ radical scavenging activities of MLE-TP compounds

如圖6所示,在0～0.1 mg/mL的濃度范圍內,兩組復配液對ABTS+自由基清除能力均高于MLE組,低于TP組。且MLE∶TP=1∶1和MLE∶TP=1∶3對ABTS+自由基的EC50分別為0.010和0.003 mg/mL,大于TP(0.002 mg/mL),小于MLE(0.120 mg/mL)。經計算,MLE∶TP=1∶1和MLE∶TP=1∶3兩組復配物對ABTS+自由基的CI分別為1.525、1.131 mg/mL,表明MLE∶TP=1∶1和MLE∶TP=1∶3對ABTS+自由基的清除能力表現(xiàn)為拮抗作用。

圖6 MLE和TP及其復配物清除ABTS+自由基能力Fig.6 ABTS+ radical scavenging activities of MLE,TP and their compounds

2.2 降血糖活性分析

2.2.1α-淀粉酶抑制作用

2.2.1.1 MLE和TP對α-淀粉酶抑制作用 人體胰臟中的α-淀粉酶是水解淀粉最主要的酶。機體攝入的淀粉由α-淀粉酶進行初步水解生成葡萄糖和低聚糖,為淀粉的完全水解增加血糖做出重要的第一步。因此,通過抑制α-淀粉酶的活性可以對糖尿病的治療產生有效的作用[20]。圖7為MLE和TP對α-淀粉酶的抑制率曲線圖,以阿卡波糖為陽性對照。由圖可知,MLE及TP對α-淀粉酶具有一定的抑制效果,在研究的濃度范圍內,酶活的抑制率隨著樣品濃度的增加而增大。當濃度增加至5 mg/mL時,MLE、TP及阿卡波糖的抑制率分別為50.39%、89.63%及94.47%。

圖7 MLE及TP對α-淀粉酶的抑制作用Fig.7 Inhibition effects of MLE and TP on α-amylase

2.2.1.2 復配物對α-淀粉酶抑制作用 圖8是總濃度為1 mg/mL 的不同配比復配物對α-淀粉酶的抑制作用。在總濃度為1 mg/mL的條件下,五組復配物對α-淀粉酶抑制作用都顯著強于MLE(p<0.05);其中,只有復配物MLE∶TP=2∶1對α-淀粉酶抑制作用顯著強于TP(p<0.05)。因此,選取復配物MLE∶TP=2∶1進行活性追蹤。

圖8 MLE-TP復配物對α-淀粉酶的抑制作用Fig.8 Inhibition effects of MLE-TP compounds on α-amylase

如圖9所示,在濃度0～3 mg/mL范圍內,各組樣品對α-淀粉酶抑制作用隨著濃度的增加而增加,且MLE∶TP=2∶1對α-淀粉酶抑制作用明顯高于任一單一組分。當濃度為3 mg/mL時,MLE∶TP=2∶1、MLE及TP組對α-淀粉酶的抑制率分別為70.87%,37.98%及60.52%。此外,MLE∶TP=2∶1對α-淀粉酶的IC50為1.707 mg/mL,小于MLE(5.102 mg/mL)及TP組(1.847 mg/mL)。經計算,復配物MLE∶TP=2∶1對α-淀粉酶的CI為0.531,小于1,表明在該配比之下MLE和TP復配使用對α-淀粉酶具有協(xié)同抑制作用。

圖9 MLE、TP及其復配物對α-淀粉酶的抑制作用Fig.9 Inhibition effects of MLE,TP and their compounds on α-amylase

2.2.2 蔗糖酶抑制作用

2.2.2.1 MLE和TP對蔗糖酶抑制作用 二糖酶如蔗糖酶和麥芽糖酶主要存在于小腸細胞刷狀緣膜上,是參與碳水化合物代謝的關鍵酶。碳水化合物水解過程中產生的二糖通過二糖酶的作用水解為單糖被機體吸收,從而導致餐后血糖水平的升高。有研究發(fā)現(xiàn)糖尿病病理狀態(tài)下腸道中二糖酶的活性較于正常狀態(tài)下明顯增強[21-22],加速葡萄糖的生成和吸收,進而致使血糖急劇升高。因此,通過抑制腸道中二糖酶的活性,有助于延緩碳水化合物的水解和吸收的過程,控制餐后血糖水平,這對糖尿病患者的治療具有著重要意義。圖10為MLE及TP對蔗糖酶的抑制率曲線圖,MLE及TP對蔗糖酶活性表現(xiàn)出顯著的抑制作用。在0～1 mg/mL濃度范圍,二者對蔗糖酶的抑制率隨著濃度的增加顯著增加,且MLE對蔗糖酶的抑制率要強于TP。當濃度為1 mg/mL時,MLE和TP對蔗糖酶的抑制率分別為92.47%和89.07%。在1～3 mg/mL濃度范圍,二者對蔗糖酶的抑制作用相當,且無明顯變化。

圖10 MLE及TP對蔗糖酶的抑制作用Fig.10 Inhibition effects of MLE and TP on sucrase

2.2.2.2 復配物對蔗糖酶抑制作用 總濃度為1 mg/mL的不同配比的復配物對蔗糖酶抑制作用如圖11所示,五組復配物對蔗糖酶抑制作用都顯著強于TP(p<0.05),其中,MLE∶TP=3∶1、MLE∶TP=2∶1、MLE∶TP=1∶1及MLE∶TP=1∶3這四組對蔗糖酶抑制率略微高于MLE,選取其中對蔗糖酶抑制效果最強的復配物MLE∶TP=1∶1進行活性追蹤。

圖11 MLE-TP復配物對蔗糖酶的抑制作用Fig.11 Inhibition effects of MLE-TP compounds on sucrase

由圖12可知,MLE∶TP=1∶1對蔗糖酶抑制作用強于任一單組分,且在0～0.4 mg/mL濃度范圍,復配組對蔗糖酶抑制作用隨著濃度的增加顯著增強;在0.4～2 mg/mL范圍,緩慢增加。在0.4 mg/mL時,MLE∶TP=1∶1、MLE及TP對蔗糖酶的抑制率為91.63%、87.8%及62.63%。此外,MLE∶TP=1∶1的蔗糖酶的IC50為0.026 mg/mL,均小于阿卡波糖、MLE及TP(0.035 mg/mL、0.034 mg/mL及0.276 mg/mL)。MLE∶TP=1∶1的聯(lián)合指數(shù)CI為0.429,小于1,表明MLE與TP的復配物MLE∶TP=1∶1對蔗糖酶具有協(xié)同抑制作用。

圖12 MLE、TP及其復配物對蔗糖酶的抑制作用Fig.12 Inhibition effects of MLE,TP and their compounds on sucrase

2.2.3 麥芽糖酶抑制作用

2.2.3.1 MLE和TP對麥芽糖酶抑制作用 圖13為MLE及TP對麥芽糖酶的抑制率曲線圖,由圖可知MLE及TP對蔗糖酶表現(xiàn)出顯著的抑制效果。當MLE及TP從0增加到1 mg/mL時,二者對蔗糖酶活的抑制作用顯著增強,隨后無明顯變化。在1 mg/mL時,MLE對麥芽糖酶抑制率分為95.35%,高于阿卡波糖(92.30%),TP為85.84%。

圖13 MLE及TP對麥芽糖酶的抑制作用Fig.13 Inhibition effects of MLE and TP on maltase

2.2.3.2 復配物對麥芽糖酶抑制作用 圖14是總濃度為1 mg/mL 的不同配比的復配物對麥芽糖酶抑制率,五組復配物對麥芽糖酶抑制作用都顯著強于TP(p<0.05)。其中,有三組復配物顯著強于MLE(p<0.05),即MLE∶TP=3∶1、MLE∶TP=2∶1和MLE∶TP=1∶1。選取其中對麥芽糖酶抑制效果最強的復配物MLE∶TP=1∶1進行活性追蹤。

圖14 MLE-TP復配物對麥芽糖酶的抑制作用Fig.14 Inhibition effects of MLE-TP compounds on maltase

由圖15可知,MLE∶TP=1∶1對麥芽糖酶抑制作用強于MLE及TP,且MLE∶TP=1∶1對麥芽糖酶的IC50為0.023 mg/mL,均小于阿卡波糖、MLE及TP(0.051 mg/mL、0.036 mg/mL及0.087 mg/mL)。MLE∶TP=1∶1的聯(lián)合指數(shù)CI為0.452,小于1,表明MLE與TP的復配物MLE∶TP=1∶1對蔗糖酶具有協(xié)同抑制作用。

圖15 MLE、TP及其復配物對麥芽糖酶的抑制作用Fig.15 Inhibition effects of MLE,TP and their compounds on maltase

3 結論

MLE、TP及其復配物都具有一定的清除ABTS+和DPPH自由基效果,TP效果最佳。MLE-TP復配物對ABTS+和DPPH自由基的清除能力大于MLE,但其對清除ABTS+和DPPH自由基的聯(lián)合指數(shù)CI均大于1,MLE-TP聯(lián)合抗氧化具有拮抗作用。

MLE、TP及其復配物均表現(xiàn)出顯著的糖尿病關鍵酶抑制作用,且MLE-TP復配物對糖尿病關鍵酶的抑制效果優(yōu)于單樣品。MLE∶TP=2∶1對a-淀粉酶的抑制效果最佳,其聯(lián)合指數(shù)為0.531;MLE∶TP=1∶1對蔗糖酶和麥芽糖酶的抑制作用最強,其聯(lián)合指數(shù)CI分別為0.429和0.452。這表明MLE-TP復配物可以提高糖尿病關鍵酶的抑制效果,具有協(xié)同降血糖的作用。MLE和TP的協(xié)同降糖功效,為開發(fā)安全和高效的天然降血糖功能食品和相關藥物提供理論依據(jù)。