新生兒血紅蛋白對地中海貧血篩查準確性分析

沈妙娜，陳海雷，劉 勇

(中山大學孫逸仙紀念醫院兒科，廣州 510120)

珠蛋白生成障礙性貧血(又稱地中海貧血，以下簡稱“地貧”)是一種由于基因缺失或突變導致珠蛋白合成障礙導致的遺傳性溶血疾病，根據編碼α及β肽鏈的基因缺失或突變情況，地貧主要分為α-地貧及β-地貧，未檢出地貧基因攜帶視為健康新生兒[1-2]。重型α-地貧一般在妊娠后期發生胎兒水腫，胎死宮內或在出生后48 h內死亡；中重型β-地貧和部分中間型α-地貧在出生后3～6個月出現貧血癥狀，并進行性加重[3-4]。輕型地貧與缺鐵性貧血相似，少數輕型地貧患者可伴缺鐵性貧血，貧血影響兒童生長發育[5-7]。對新生兒進行地貧篩查，可及早發現中重型地貧。本研究旨在探討新生兒臍帶血與出生后1～3 d外周血血紅蛋白(Hb)組分與表達量對地貧的篩查準確性,現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2016年1月至2017年6月在本院出生，并進行地貧攜帶基因篩查的新生兒220例為研究對象，其中男89例，女131例。

1.2儀器與試劑 主要儀器有法國Sebia公司Capillarys2全自動毛細管電泳儀與Hb分析檢測試劑盒及質控品。DNA提取與檢測試劑盒由深圳亞能生物有限公司提供。

1.3方法 應用全自動毛細管電泳技術分析新生兒臍帶血或外周血Hb組分。

1.3.1標本類型 選取胎齡大于37周新生兒，臍帶血為新生兒出生時臍帶殘留靜脈血，外周血為新生兒出生1～3 d采集的靜脈血。

1.3.2Hb毛細管電泳分析 檢測臍帶血與外周血Hb組分，包括HbA、HbF及異常條帶。

1.3.3地貧基因檢測 α-地貧基因檢測：東南亞缺失(--SEA/αα)、3.7及4.2缺失(-α3.7/αα、-α4.2/αα)；3種非缺失點突變：-αCS/αα、-αQS/αα和-αWS/αα。β-地貧基因檢測：βCD41-42/βN(-TTCT)、βIVS-Ⅱ-654/βN(C>T)、β-28/βN(A>G)、βCD71-72/βN(+A)、βCD17/βN(A>T)、βCD26/βN(G>A)、βCD31/βN(-C)、βCD27-28/βN(+C)、βIVS-Ⅰ-1/βN(G>T)、βCD43/βN(G>T)、β-32/βN(C>A)、β-29/βN(A>G)、β-30/βN(T>C)、βCD14-15/βN(+G)、Cap+40-43(-AAAC)、起始密碼子突變Initiation condon(T>G)和βIVS-Ⅰ-5/βN(G>C)。

2 結 果

2.1新生兒地貧基因與Hb電泳結果 220例新生兒地貧基因診斷結果中，地貧基因攜帶者以靜止型α-地貧16例、輕型α-地貧56例與輕型β-地貧34例為主；中間型α-地貧5例；輕型α-地貧復合β-地貧1例，其HbF水平為83.10%，HbA水平為15.50%，Hb Bart′s水平為1.10%。未檢出β-地貧雙重雜合子或純合子，各種基因類型Hb電泳結果見表1。地貧基因檢測結果見表2。

表1 Hb分析結果

注:與健康新生兒比較，*P<0.05；-為檢測結果為陰性

表2 地貧基因檢測結果

2.2新生兒外周血與臍帶血Hb結果比對 220例研究對象中，外周血組74例，臍帶血組146例。兩組在健康新生兒、輕型α-地貧與輕型β-地貧HbF、HbA百分比重疊，結果一致。

2.3ROC曲線分析 通過ROC曲線分析，HbF篩查輕型β-地貧曲線下面積達到0.958，截斷值為86.65%，靈敏度為94.12%(32/34)，特異度為84.26%(91/108)。

3 討 論

人體不同發育時期珠蛋白生成存在著一定的變化規律。妊娠5周，α珠蛋白基因、γ珠蛋白基因開始在肝臟表達，胎兒血中開始出現HbF，妊娠10周，β珠蛋白基因開始表達，血中出現HbA，而此時α珠蛋白基因、γ珠蛋白基因表達達到高峰，HbF成為主要Hb。之后α珠蛋白基因持續高表達，δ珠蛋白開啟并維持比較低的表達水平，血中出現HbA2，γ珠蛋白基因在出生前后關閉，HbF迅速減少，至6個月后不超過5%[8]。

α珠蛋白基因在胚胎12周后持續高表達，β珠蛋白基因在胎兒36周后才逐漸表達增加[9]。Hb合成受珠蛋白基因調控。本研究結果顯示，健康新生兒與輕型α-地貧、輕型β-地貧HbF、HbA水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)，說明新生兒，甚至胚胎時期，輕型α-地貧、輕型β-地貧導致珠蛋白基因表達減少影響了Hb合成，Hb的表達量變化可以用于篩查地中海貧血。

本研究結果顯示，輕型β-地貧HbF值高于健康新生兒，HbA低于健康新生兒，差異有統計學意義(P<0.05)。同時，本研究采用ROC曲線分析并計算曲線下面積，評價臍血或外周血Hb 電泳對β-地貧診斷的準確性，結果顯示，HbF截斷值為86.65%，靈敏度為94.12%(32/34)，特異度為84.26%(91/108)，曲線下面積達到0.958，與相關研究比較，HbA截斷值為13.00%，靈敏度稍低，特異度高，總體AUC高[10]。但該研究未指出新生兒胎齡，可能存在胎齡對Hb影響。

由于α珠蛋白鏈既合成HbF，又合成HbA，當α珠蛋白鏈合成減少時，機體優先合成攜氧功能的HbA，因此本研究結果出現輕型α-地貧HbA百分比值甚至高于健康新生兒，靜止型與中間型α-地貧HbA水平也高于健康新生兒。說明HbA、HbF對α-地貧不是合適的篩查指標。

Hb Bart′s是α-地貧代償機制中產生的異常Hb。體內合成Hb Bart′s(γ4)對氧的親和力極高，即使在低氧的組織中也不能釋放氧，因此Hb Bart′s胎兒水腫綜合征造成胎兒宮內嚴重缺氧，全身組織器官水腫，最終致死[11-12]。本研究中輕型α-地貧外周血18例，臍血38例均可檢出Hb Bart′s，均值都在2.80%。5例α-地貧中間型Hb Bart′s均大于20.00%。把電泳出現Hb Bart′s條帶作為新生兒輕中型α-地貧篩查指標，其靈敏度為100.00%(61/61)，特異度為100.00%(108/108)。而16例靜止型α-地貧僅2例出現Hb Bart′s，用Hb Bart′s條帶篩查α-地貧主要漏檢靜止型α-地貧，與其他年齡段篩查存在同樣缺陷[13]。比較成人α-地貧篩查，新生兒出生時進行α-地貧具有最高的特異度。

綜上所述，新生兒出生時的臍帶血或出生1～3 d的靜脈血進行毛細管Hb電泳對于篩查地貧意義重大。篩查輕型β地貧選HbF 86.65%作為截斷值，篩查α-地貧選擇Hb Bart′s條帶，一旦電泳出現Hb Bart′s條帶，考慮α-地貧特異度為100.00%。由于新生兒Hb處于變化的動態過程中，新生兒胎齡對Hb影響大，本文中選取大于胎齡37周新生兒，對于胎齡小于37周Hb情況需進一步研究。