熒光原位雜交技術在薔薇屬植物研究中的應用綜述

田 敏， 張 婷， 唐開學， 張 顥， 邱顯欽， 晏慧君， 王其剛， 蹇洪英

(云南省農業科學院花卉研究所/云南省花卉育種重點實驗室/國家觀賞園藝工程技術研究中心，云南昆明 650200)

熒光原位雜交(fluorescent in situ hybridization，FISH)技術是一種非放射性原位雜交技術。它的基本原理是將待測的核酸(DNA或RNA)用連接有報告分子的核苷酸(如biotin-dUTP或digoxigenin-dUTP)標記成探針，然后將標記的探針按堿基互補配對原理雜交到染色體上；檢測時用與熒光素耦連的抗報告分子的單克隆抗體(如anti-digoxigenin-Rhodamine)或特異結合蛋白(如avidin-FITC)與報告分子標記的核苷酸探針特異性結合，通過熒光素的顯色來確定探針與探針標記的靶核酸的共有序列及這些序列在受體細胞核和染色體上的物理分布，對其進行定位、定性及定量研究。FISH技術具有試驗周期短、靈敏度高、分辨率高、直觀可見等優點[1]。隨著熒光原位雜交技術的深入和多元發展，該方法已用于核酸研究的各個方面[2]。在植物中，熒光原位雜交技術主要應用于多倍體的起源和演化[3]，植物種間雜交后代的鑒定和外源染色體檢測[4]，構建DNA物理圖譜分析染色體的易位、倒位、互換及重組等結構變異等研究。此外，FISH在轉基因植株的細胞學鑒定、胚挽救、體細胞融合植株的早期鑒定、遺傳轉化材料分析、基因組的結構及其在細胞中的空間排列與功能等研究中也發揮著重要作用，展示了廣闊的應用前景。

現代月季為薔薇屬(RosaL.)植物，是世界第一大切花，是由薔薇屬內很多種或品種反復雜交而成的一大類栽培復合體[5-6]。薔薇屬植物是最先吸引了細胞學家注意力的庭園植物之一[7]，從林奈時期即對其進行了染色體研究[8]。從1904年Strasburger對薔薇屬染色體基數的報道至今，全世界對其胞核學的研究已有很多[8-9]，但鑒定薔薇屬的每一條染色體仍很困難。這是因為多種薔薇屬植物的種子萌發和枝條扦插較困難，常用嫁接方法進行繁殖，植株根系實為砧木的根系，因此一般選用莖尖為制片材料，而莖尖相對于根尖細胞分裂率低、細胞內含物較多、細胞壁較厚[10]，更為主要的原因是薔薇屬植物的染色體為小染色體(平均長度 2.81 μm)[11-13]，導致難以穩定地得到高質量的熒光原位雜交圖譜[14]，使熒光原位雜交技術在薔薇屬中的應用受到一定的限制。此外，由于可利用的薔薇屬染色體特異標記有限，利用熒光原位雜交技術進行染色體研究、使每一條染色體有特定的標記而便于識別的工作還無法展開。

筆者綜述了染色體熒光原位雜交技術在薔薇屬上的應用情況，展望了其在該屬植物研究中的應用前景，旨在為薔薇屬植物的分子細胞遺學研究提供參考。

1 特定DNA序列定位

通過rDNA在染色體上的定位，能夠清楚地識別形態相近的染色體和核型相似的物種。根據rDNA位點數目、位置和拷貝數的變化，可以揭示染色體結構的變異，有利于分析物種親緣關系、多倍體的形成等問題，并將細胞遺傳學研究深入到分子水平[1]。薔薇屬中已經定位的序列只有高度重復序列，包括45S rDNA和5S rDNA。

1.1 45S rDNA

45S rDNA在細胞分裂間期大量轉錄表達形成特殊的區域，參與核仁形成。每個45S rDNA轉錄單位包括18S rDNA、5.8S rDNA、26S rDNA 3個亞單位和中間的間隔區序列(internal transcribe spacer，ITS)，呈高度保守狀態，在基因組中為串聯重復序列，不同物種中的拷貝數為500～40 000。至今，45S rDNA在25個薔薇屬野生種/變種、12個古老月季品種及6個現代月季品種染色體上的位點數目和位置已有報道(表1)。

Ma等于1997年首先將熒光原位雜交技術應用到薔薇屬植物上。她用從大豆(Glycinemax)中克隆到的18-26S rDNA做探針，進行了月季花(R.chinensis)、香水月季(R.odorata)、Rosa×fortuniana、金櫻子(R.laevigata)、刺梨(R.roxburgii)和1個現代品種(Rosa‘Angel Face’)的FISH分析，首次提出用18-26S rDNA重復序列進行薔薇屬植物的染色體熒光原位雜交是可行的，并指出rDNA雜交位點對應于核仁組織區(NOR)，具有相對保守的數量和位置，即1個染色體組有1個NOR，且NOR都位于亞中著絲點染色體的短臂近端部[10]。隨后，Fernández-Romero 等也用來自大豆的 18-25S rDNA做探針，研究了5個2倍體薔薇野生種大花香水月季(R.gigantea)、麝香薔薇(R.moschata)、野薔薇(R.multiflora)、玫瑰(R.rugosa)、R.sempervirens和2個古老品種(R.chinensis‘Semperflorens’，R.gallica‘Versicolor’)的rDNA定位[14]。5個2倍體薔薇野生種的結論與Ma等的一致，但古老品種R.chinensis‘Semperflorens’有3個雜交位點，分布于3條近似的染色體上，而R.gallica‘Versicolor’有6個雜交位點，位于3對不同的染色體上。Akasaka等以從小麥(Triticumaestivum)中獲得的45S rDNA做探針，分別對屬于A型染色體組[21-22]的單瓣月季花(R.chinensisvar.spontanea)、大花香水月季、麝香薔薇、野薔薇、光葉薔薇(R.wichuriana)，B型染色體組的小葉薔薇(R.willmottiae)，C型染色體組的玫瑰和D型染色體組的R.marretii、R.foliolosa進行了45 rDNA定位[11-12]，其中A型染色體組的薔薇最為重要，創造現代月季的8個野生種染色體全部屬于該染色體組[23]。A型染色體組的這5個薔薇野生種的45S rDNA雜交位點的數目和位置都比較固定，都有2個雜交位點，都位于隨體染色體也是最短染色體(chromosome 7)的短臂端部，顯示了在該染色體上的45S rDNA等位基因座。其他3個染色體組的薔薇野生種的45S rDNA的位置也與A型染色體組的種類近似，位于最短染色體的短臂端部；但R.foliolosa(D型染色體型)的45S rDNA雜交位點數為6，且與同染色體組的R.marretii核型差異較大。Flory認為薔薇屬植物起源于亞洲東部，其中某些種逐漸遷移到北美洲[24]，因此Akasaka等推測可能在R.foliolosa遷移到北美的過程中其染色體發生了重組，形成了因地理分布造成的核型變異[12]。Lim等用從小麥中克隆的 18-5.8-26S rDNA為探針檢測到5倍體的狗薔薇(R.canina)有5個45S rDNA雜交位點，但未明確位點的準確位置[17]。2014年張婷等用來自番茄(Solanumlycopersicum)的45S rDNA為探針進行了桂味組(Section Cinnamomeae)的多苞薔薇(R.multibracteata)、合柱組(Section Synstylae)的川滇薔薇(R.soulieana)及金櫻子組(Section Laevigatae)的金櫻子(R.laevigata)的原位雜交研究，結果表明45S rDNA的位點數相對保守，這3個2倍體的薔薇品種都只有1對45S rDNA位點，且大都位于1對異型同源sm染色體的短臂上，其中多苞薔薇和川滇薔薇的2個45S rDNA位點信號強弱有區別，而金櫻子的雜交信號強弱一致[16]。

表1 45S rDNA基因在薔薇屬43個種或品種染色體上的定位及位點數目

田敏等分別于2012年和2013年用來自蕃茄的45S rDNA對紫月季花(R.chinensisvar.semperflorens)、大白花(R.chinensis‘Dabaihua’)和杏花村(R.chinensis‘Betty Prior’)，香水月季復合群(R.odoratacomplex)的香水月季原變種(R.odoratavar.odorata)、大花香水月季(R.gigantea)、來自云南富民的2倍體粉花香水月季(R.odoratavar.erubescens)和來自云南維西的3倍體粉花香水月季(R.odoratavar.erubescens)[15]，月月紅(R.chinensis‘Slater’s crimson China’)、一品朱衣(R. ‘Yipinzhuyi’ )、牡丹月季(R. ‘Mudanyueji’ )、月月粉(R.chinensis‘Parson’s pink China’)、金粉蓮(R. ‘Jinfenlian’)、 湖中月(R. ‘Huzhongyue’ )、大富貴(R. ‘Dafugui’ )、青蓮學士(R. ‘Qinglianxueshi’)、春水綠波(R. ‘Chunshuilübo’)、綠萼(R. ‘Viridiflora’)等10個中國古老月季品種[18]，以及和平(R. ‘Peace’)、粉和平(R. ‘Pink Peace’)、R. ‘Rose Gaujard’ 、紅雙喜(R. ‘Double Delight’)、蜜糖(R. ‘Honey’)等5個現代月季品種[19]處于細胞分裂間期和前中期的核進行了熒光原位雜交研究。結果表明，從月季組的薔薇野生種到中國古老月季品種的形成過程中，45S rDNA位點數與多倍化過程緊密相關且與倍性成正比，中國古老月季的45S rDNA的數量和位點與原產中國的野生種一致；但在現代品種中的45S rDNA位點數減少了，均只有3個。該研究在一定程度上表明中國古老月季是由原產中國的一些野生種經長期的雜交或自然突變，經由人工選育固定下來而形成的，相關的核型分析[25]和SSR分子標記[26]也支持這一觀點；而現代月季滲入了歐洲的一些薔薇屬種質，這種遠緣雜交引起了染色體更大的變異，導致rDNA的數量發生較大的變化。此外，原產中國的月季花復合群、香水月季復合群及古老品種，不論是在染色體的倍性和形態上[25，27]，還是在45S rDNA位點的拷貝數和間期組織模式上，都表現出多樣性，而現代栽培品種卻表現出一致性。

總體來說，雖然目前對薔薇屬植物的45 rDNA定位研究主要還是集中在數量上，對其在染色體組上的精確定位較少，但從已有的研究可知，除R.foliolosa、古老品種R.gallica‘Vesicolor’和大富貴外，45S rDNA的位點數在薔薇野生種和古老品種中均對應于核仁組織區，具有比較保守的數量和位置，即1個染色體組對應1個45S rDNA位點，且都位于亞中部著絲點染色體的短臂近端部。現代品種的45S rDNA位點數則表現出與野生種或變種和古老品種不同的變化規律：除R. ‘Angel Face’外，其他5個現代品種的45S rDNA少于其對應的染色體組數，且在拷貝數和間期組織模式上都表現出一致性，表明反復的品種間雜交和自交已使染色體結構漸漸趨于同質。因此，要進一步提高現代月季的品質需要從野生資源[28]和古老月季[29]中引入新的種質。

1.2 5S rDNA

5S rDNA是絕大多數生物的核糖體大亞基的一個組成部分，其功能在真核生物中還不太清楚。5S rDNA基因家族通常以高拷貝串聯重復形式存在于基因組中，有2 000～5 000 個拷貝，且常不與其他重復序列(如26S-5.8S-18S)串聯在一起。每個5S rDNA重復單位由基因編碼區和非編碼區(間隔區)組成，長度為200～1 000 bp。編碼區長度為 120 bp，非編碼區長度為100～700 bp。120 bp的編碼區相對間隔區序列比較保守[30]，間隔區序列差異很大，位于間隔區中部的序列變化最豐富[31]。相對于45S rDNA，5S rDNA應用于薔薇屬植物的熒光原位雜交有一定的困難，到目前為止僅對13個薔薇野生種進行了5S rDNA的定位(表2)。

Ma等首先研究了5S rDNA應用于薔薇屬植物染色體熒光原位雜交的可行性。她用克隆自黑木相思樹(Acaciamelanoxylon)的5S rDNA做探針沒有獲得成功，但指出來自黑木相思樹的5S rDNA既能雜交到與豆科植物親緣關系較遠的單子葉植物，也能雜交到與之親緣關系相對較近的梨屬植物上[10]，此次試驗未成功不是由于原位雜交的程序有誤或是5S rDNA序列的差異性，而是由于染色體制片的問題。不過自此后，薔薇屬植物的5S rDNA原位雜交的探針都是克隆自靶染色體材料的基因組本身。

Akasaka等從野薔薇中克隆了5S rDNA，制備成探針對屬于A型染色體組的單瓣月季花、大花香水月季、麝香薔薇、光葉薔薇，B型染色體組的小葉薔薇，C型染色體組的玫瑰和D型染色體組的R.marretii、R.foliolosa進行了rDNA定位[11-12]。A型染色體組的5種薔薇的5S rDNA雜交位點數目和位置的變化較大，反應了染色體重組現象。Wu 等認為這5個種的同源性較高[32-33]，而它們最短染色體上都同時有45S和5S rDNA位點，這可以作為A型染色體組薔薇的染色體特征標記；5S rDNA雜交位點除位于最短染色體以外，其余位點都位于其他染色體長臂的相近區域。在B、C、D染色體組的薔薇中，5S rDNA的雜交位點數目比較固定，位于染色體長臂上，且與45S rDNA不在同一條染色體上。綜合來看，這9個2倍體薔薇中，5S rDNA位點數有2個(1對)、3個和4個(2對)，其中具1對5S rDNA位點的種，其5S rDNA位點位于非45S rDNA染色體長臂的近著絲點處；具3個或2對的種有1對5S rDNA位點與45S rDNA位于同一染色體的長臂或短臂上，其余位點則位于另外染色體的長臂的近著絲點處。Lim 等用來自狗薔薇的5S rDNA為探針與自身的染色體進行雜交[17]，得到8個雜交位點，均位于染色體長臂的近著絲點處，其中3個位點與45S rDNA位于同一染色體，另外5個位點位于別的染色體上。

表2 5S rDNA基因在薔薇屬13個種染色體上的定位及位點數目

張婷等參照Akasaka等的方法[11-12]，以PCR方法制備5S rDNA，用于桂味組的多苞薔薇、合柱組的川滇薔薇及金櫻子組的金櫻子的染色體熒光原位雜交研究，得出3個2倍體野生種的5S rDNA位點數量不等，但都位于染色體長臂的近著絲點處，雜交信號的強弱有差異[16]。具體來看，多苞薔薇的1對5S rDNA位于非45S rDNA染色體的長臂的近著絲點處；川滇薔薇和金櫻子有2對5S rDNA位點，其中1對位于45S rDNA染色體的長臂的近著絲點處，另1對位于其他染色體長臂的近著絲點處。由此得出，薔薇屬植物中5S rDNA位點按是否與45S rDNA有共線性分為2種：只有1對5S rDNA位點，與45S rDNA沒有共線性，且位于染色體長臂的近著絲點處；有3個、2對或更多5S rDNA位點，與45S rDNA共線性的5S rDNA位點位于染色體短臂或長臂的近著絲點處，其余位點位于其他染色體長臂的近著絲點處。該結論與Akasaka等的[11-12]基本一致。

因此，不同于45S rDNA，5S rDNA的位點數在薔薇屬不同種中變異較大，有2、3、4、8個不等，且沒有一定的規律，在染色體上也沒有固定的分布模式。目前尚未見有對薔薇屬古老品種和現代品種的5S rDNA定位的報道。

2 染色體同源性分析

熒光原位雜交方法已在很多植物中普遍應用，但由于薔薇屬植物的染色體較小，熒光原位雜交技術的普遍應用有一定難度，因此，應用其進行分子細胞遺傳學的深入研究較少，目前主要應用于染色體的同源性及親緣關系的初步推測上。

在Ma等的研究中，R.×fortuniana分裂間期時2個NOR位點在大小上是相同的，但其中1個NOR位點較分散也較活躍[10]，這與Shepherd認為這個種為雜交起源(R.banksiae×R.laevigata)[34]的觀點相吻合，因此推測其為雜種起源。同時，現代品種R. ‘Angel Face’(2n=4x)的染色體組有4個 18-26S rDNA 雜交位點，但其中2個位點信號強度較強，表明其由AABB 2種異源染色體組成，且比例為2 ∶2。

Fernández-Romero等用18-25S rDNA的原位雜交結合小孢子母細胞(pollen mother cells，PMCs)減數分裂染色體制片、花粉育性觀察和實際結實率統計的方法，分析了古老品種R.chinensis‘Semperflorens’和R.gallica‘Versicolor’各自的染色體同源性[14]。R.chinensis‘Semperflorens’的3個18-25S rDNA雜交位點分布于3條近似的染色體上；PMCs減數分裂時最多形成6個3價體和3個1價體，這兩方面的證據表明R.chinensis‘semperflorens’的染色體之間具有很高的同源性，為自發形成的同源3倍體，這種同源性會導致在減Ⅰ后期時染色體分配出現較多的錯誤從而導致不育；花粉育性觀察和結實率統計支持此結論。而R.gallica‘Versicolor’的6個18-25S rDNA雜交位點位于3對不同的染色體上，其中位于1對較小的染色體上的信號較強，結合nrDNA的ITS1序列研究的結果[35]，表明R.gallica‘Versicolor’為異源起源，其中一個染色體組含有1個NOR，另一個染色體組含有2個NOR。PMCs減數分裂時最多形成14個2價體，也證明其異源性，在減Ⅰ后期時染色體能正常分配使其可育；花粉育性觀察和結實率數據符合此結論。

狗薔薇為5倍體，它減數分裂時特殊的配子不均等分裂方式很早引起了學者的極大興趣[8，21]。Lim等用FISH技術輔助分析狗薔薇不均等減數分裂中的染色體分配情況。他用18-5.8-26S rDNA和5S rDNA為探針，分別與體細胞和PMCs進行雙色FISH，證明了狗薔薇中只有1對同源染色體，在形成配子時此同源染色體均勻分配到雌雄配子中，其他一直處于單價體形式的染色體都分配到雌配子中[17]。該研究為利用FISH深入研究薔薇屬植物的染色體同源性及其配子形成時的分配方式提供了參考。

張婷等基于rDNA-FISH的核型分析研究發現多苞薔薇有2種核型類型[16]，一種與Jian等常規核型分析的結果相同，屬較為原始的1A型，另一種為更進化的2A型[37]。前者沒有異型同源染色體，且5S rDNA位點染色體不是sm染色體；后者的2對rDNA染色體都是異型同源染色體。這可能是由于研究材料來自不同居群，它們之間存在核型差異，這也從細胞水平上反映了其種內存在豐富的形態變異和遺傳多樣性。川滇薔薇的核型及核型公式與Jian等基于常規核型分析的結果[36]相同，但2對sm染色體的序號相差較大，這一方面可能是由于研究材料來源不同所致，另一方面也可能是由于常規核型分析的精確度不高導致染色體排序有誤。金櫻子在核型和核型公式上與Crane等基于常規核型分析的結果相同[37]，但在染色體排序上稍有差別。這3種薔薇野生種均存在異型同源染色體，異型同源染色體由于較大的長度差異使研究人員在常規染色體核型分析時很容易將其錯配。因此，基于rDNA-FISH的薔薇屬植物染色體核型分析更加準確可靠，應采用類似的較精確的方法對一些分布較廣、種內存在豐富形態變異的薔薇進行進一步的核型研究。由此可見，熒光原位雜交技術不僅能準確地識別各自染色體組中的同源染色體，而且還能通過雜交位點數量、位置和強弱體現各自染色體的結構特征，為染色體識別提供了明確有效的標記。

3 原位雜交技術在薔薇屬植物研究中的應用前景

作為分子遺傳學與細胞遺傳學結合而產生的一門新興技術，原位雜交具有上述2個學科所不具備的許多優點，它不僅能夠將核酸序列直接定位在染色體或間期核中的特定位置，以構建染色體的物理圖譜，分析染色體和基因組的結構，而且能對伴隨物種形成過程中的基因組內及基因組間的結構重排進行探測[38]。在其他栽培作物中，利用特定DNA序列、大片段克隆(BAC/YAC)和整個基因組DNA(gDNA)作為探針，研究多倍體的起源、不同基因組之間的關系、DNA物理圖譜、染色體結構變異等的報道已有很多，但在薔薇屬植物的染色體結構變異檢測、基因定位、外源染色體鑒定及親緣關系研究上，FISH技術都還沒有得到充分應用。薔薇屬植物分布廣泛、種類眾多、分類復雜，如何應用成熟的FISH技術來解決復雜的遺傳和進化問題，也就成為了薔薇屬植物分子細胞遺傳學研究的方向。針對目前的研究現狀，可將FISH應用于以下3個方面。

3.1 現代月季形成過程中的染色體變異

作物馴化可以看作是植物進化的一種模型，在馴化過程中隨著農業需求性狀的選擇育種，染色體、DNA結構會隨之改變[39]。薔薇屬植物有著悠久的栽培歷史，經過長期自然和人工栽培的變異、雜交、選擇，經歷了從薔薇野生種(wild roses or species roses，WR or SR)演化到古老月季(old garden roses，OGR)，進而到現代月季(modern roses，MR)的過程。我國的薔薇屬資源是創造現代月季的重要原始親本。原產我國的月季花復合群(R.chinensiscomplex)和香水月季復合群(R.odoratacomplex)是現代月季最重要的兩大性狀即連續開花和芳香怡人(茶香)的來源[23]。我國古老月季如月月紅、月月粉、彩暈香水和淡黃香水等，對現代月季的育成起到了決定性的作用[40]，是野生薔薇和現代品種之間的過渡類型[6，41]?，F代月季來自我國的原始野生親本均是2倍體[34，42]，而現代月季品種通常是4倍體[43]；Heinisch等還推測在現代月季的雜交育種中出現過更高倍(大于4倍)的雜種[44]。那么在從薔薇野生種演化到古老月季，進而演化到現代月季的過程中，染色體在結構上發生了怎樣的變化？對現代月季及其重要歷史親本進行系統的以染色體熒光原位雜交為基礎的分子細胞遺傳學研究，是回答這些問題的前提和必要途徑。

3.2 薔薇屬植物的染色體變異及分布規律研究

薔薇屬約有200多個種[5]，由于缺乏遺傳背景的詳盡研究，制約了其在現代月季遺傳改良中的深入應用。早期的研究認為自然界中野生種存在2x至8x的倍性[21-22]，最近在分布于我國云南的野生種中發現了6x和10x[36，45]卻沒有發現4x和8x，并且多倍化主要集中在分布于高海拔地區的桂味組植物中，總體比例不到10%。根據已有的關于薔薇屬植物的染色體報道可知，除分布在歐洲的狗薔薇組(Sect.Caninae)和薔薇組(Sect.Rosa)、高海拔和極地周圍的桂味組以及北美的卡羅萊納組(Sect.Carolinae)中多倍體種占一定比例外，絕大部分薔薇野生種均為2倍體。因此，薔薇屬植物進化和演化的細胞學動力主要還是來自染色體的重組和結構變異。那么，薔薇屬植物是否存在比10x更高的倍性？組間和組內各種間基于FISH的親緣關系如何？多倍體和染色體結構變異與生境特別是海拔的關系如何？系統演化過程中染色體重組和結構變異各自扮演了怎樣的角色？利用熒光原位雜交技術對這些問題進行深入研究，是研究薔薇屬植物的遺傳多樣性和系統演化的必要細胞學手段，也可為利用這些野生資源對現代月季品種進行種質創新和遺傳改良提供細胞學數據。

3.3 薔薇屬植物多倍體的起源研究

植物多倍化是一種普遍存在的生物學現象，多倍化是植物進化和多樣化的重要原動力[46-47]。對于植物多倍體，FISH和GISH(基因組熒光原位雜交技術)是探測祖先基因組來源、理清種間進化關系、構建遺傳圖譜、分析基因組雜交漸滲和促進遺傳育種的重要手段[48]。常用的方法有單親本GISH[49]、雙親本GISH[50]、基因組特異探針[51]并結合減數分裂時染色體的配對行為[14]等方法來判斷多倍體基因組的起源和組成，特別是GISH為鑒別外源染色體帶來了方法上的革命[52]。雖然整個薔薇屬植物系統演化的主要細胞學動力可能不是多倍化，但多倍化現象在狗薔薇組、桂味組及卡羅萊納組中卻十分顯著。那么，這些多倍體是如何形成的？是多倍化(同源多倍化和異源多倍化)還是由原始染色體斷裂產生？哪些種參與了它的形成并承擔了什么角色？要解答這些科學問題，需要用到分子細胞遺傳學的研究方法，可以利用與多倍體薔薇有較近親緣關系且分布區重疊的其他薔薇的基因組為探針進行GISH雜交，并結合減數分裂時染色體rDNA-FISH信號進行分析，闡明這些多倍體薔薇的起源和形成過程，為研究薔薇屬植物的系統演化提供分子細胞遺傳學證據。