白術芍藥散聯合美沙拉嗪治療潰瘍性結腸炎臨床療效及對血清和結腸黏膜NGAL、MMP-9 表達水平的影響

楊倩倩 周建波 蔡 升 方 瑩

作者單位：寧波大學附屬陽明醫院消化內科（余姚315400）

潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種自直腸向結腸逆行蔓延的慢性非特異性炎癥，病程遷延難愈，病情反復發作，嚴重影響患者的生存質量[1]。目前UC 尚無特效治療方案，其臨床常用藥物包括氨基水楊酸類、糖皮質激素類及免疫抑制劑類，但上述藥物的療效差強人意，且具有一定的副作用[2]。白術芍藥散又稱痛瀉要方，源自《丹溪心法》，組方由白術、白芍、陳皮和防風構成，具有柔肝止痛、補脾止瀉的效果，在治療腸鳴腹痛、大便泄瀉和肝旺脾虛諸證中療效可靠。研究顯示，白術芍藥散治療UC 具有良好的療效及安全性[3-4]。中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL）是脂質運載蛋白家族的一個成員，表達于人體的結腸、胃、肝等多個組織，參與機體的炎性反應、免疫反應、細胞凋亡、細胞分化等多種生理病理過程[5]。本研究檢測UC 患者血清及結腸黏膜NGAL、基質金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）mRNA 表達水平，探討白術芍藥散治療UC 的可能作用機制。

1 臨床資料

1.1 一般資料 2015 年6 月-2016 年6 月在寧波大學附屬陽明醫院消化內科診治初發型潰瘍性結腸炎（UC）患者80 例，采用隨機數字表法分為觀察組和對照組，各40 例。觀察組中男24 例，女16 例，平均年齡（42.18±9.25）歲，平均病程（5.26±3.48）年；對照組中男25 例，女15 例，平均年齡（41.87±9.23）歲，平均病程（5.22±3.45）年。本研究方案通過醫學倫理委員會審核，患者知情同意。

1.2 納入與排除標準 納入標準：（1）所有患者符合中華醫學會消化病學分會炎癥性腸病學組“炎癥性腸病診斷與治療的共識意見”[6]中有關輕、中型UC的診斷標準；（2）患者或家屬簽署知情同意書。排除標準：（1）重型UC；（2）合并腦、肺、心、肝、腎等臟器的嚴重疾病；（3）哺乳及妊娠期婦女；（4）藥物過敏者。

2 方 法

2.1 治療方法 對照組給予美沙拉嗪腸溶片（規格：0.25g/片，批號150320，葵花藥業）1.0g，1 天4 次，觀察組在對照組基礎上給予白術芍藥散煎劑（白術30g，白芍20g，陳皮15g，防風20g，水煎2 次，取汁200mL）100mL，1 天2 次。兩組療程均為8 周。

2.2 觀察指標 兩組患者治療結束后復查腸鏡并Mayo 評分量表[7]評估臨床療效。Mayo 評分量表：（1）排便次數：正常計0 分，每天增加1～2 次計1 分，每天增加3～4 次計2 分，每天增加＞5 次計3 分；（2）大便帶血：無大便帶血計0 分，大便帶血少于一半時間計1 分，大便帶血占大部分時間計2 分，大便帶血為持續性計3 分；（3）腸鏡檢查：無病變計0 分，有輕度病變（少許充血）計1 分，有中度病變（明顯糜爛）計2分，有重度病變（潰瘍形成）計3 分；（4）醫師評估病情：無異常計0 分，輕度計1 分，中度計2 分，重度計3 分。上述各項評分之和≤2 分則臨床緩解；3～5 分則輕度活動；6～10 分則中度活動；11～12 分則重度活動。分別于治療前后經內鏡取腸黏膜標本，于-70℃凍存待檢。采用RT-PCR 檢測腸黏膜NGAL、MMP-9 mRNA 表達水平。取適量腸黏膜作成組織勻漿，以Trizol 法提取組織總RNA，再把獲得的RNA 反轉錄為cDNA，將cDNA 作為模板，分別添加目標基因引物，上PCR 儀進行擴增。最后，取PCR 產物在瓊脂糖凝膠中電泳，并用溴化乙錠染色，之后圖像分析儀行半定量分析。分別于治療前后清晨空腹狀態下，經外周靜脈抽取3mL 血液，離心并分離血清，于-70℃凍存待檢。采用ELISA 法檢測血清NGAL、MMP-9 蛋白表達水平。實驗過程嚴格按照說明書步驟進行操作。NGAL、MMP-9 酶聯免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒購于美國R&D公司、NGAL、MMP-9、β-actin 引物及反轉錄試劑盒購于日本TaKaRa 公司、總RNA 抽提試劑盒購于美國Invitrogen 公司、熒光定量PCR 儀購于美國Bio-Rad 公司。

2.3 療效標準 依據《對炎癥性腸病診斷治療規范的建議》及Mayo 評分量表[7]評價臨床療效，顯效：臨床癥狀全部緩解，且大便次數≤2 次/天，大便鏡檢無白細胞、紅細胞。有效：臨床癥狀基本緩解，且大便次數2～4 次/天，大便鏡檢白細胞或紅細胞＜10 個/高倍鏡視野。無效：臨床癥狀、大便次數、大便鏡檢細胞數都未緩解。

2.4 統計學方法 應用SPSS17.0 統計軟件進行數據處理，計數資料用%表示，組間比較采用χ2檢驗，計量資料用均數±標準差（）表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

3 結 果

3.1 兩組UC 患者基礎資料比較 兩組UC 患者性別、年齡、病程等資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

3.2 兩組UA 患者治療后臨床癥狀改善比較 治療后，觀察組40 例中顯效25 例，有效12 例，無效3例，總有效率92.5%；對照組40 例，顯效18 例，有效10 例，無效12 例，總有效率70%，觀察組總有效率顯著優于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。

3.3 兩組UA 患者Mayo 評分比較 治療后，兩組患者Mayo 評分均較治療前降低（P＜0.05），觀察組Mayo評分明顯低于對照組（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組潰瘍性結腸炎患者治療前后Mayo 評分比較（分）

表1 兩組潰瘍性結腸炎患者治療前后Mayo 評分比較（分）

注：與本組治療前比較，△P＜0.05；與對照組治療后比較，*P＜0.05；對照組給予美沙拉嗪腸溶片治療；觀察組給予美沙拉嗪腸溶片+白術芍藥散

組別 例數 治療前 治療后對照組406.58±3.462.24±1.15△觀察組406.61±3.521.32±1.01*△

3.4 兩組UA 患者腸黏膜NGAL、MMP-9 mRNA 表達水平比較 兩組治療前腸黏膜NGAL、MMP-9 mRNA 表達水平比較差異無統計學意義（P＞0.05）；治療后，兩組患者腸黏膜NGAL、MMP-9 mRNA 水平均明顯降低（P＜0.05），觀察組腸黏膜NGAL、MMP-9 mRNA 表達水平較對照組降低明顯（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組潰瘍性結腸炎患者腸黏膜NGAL、MMP-9 mRNA表達水平比較（）

表2 兩組潰瘍性結腸炎患者腸黏膜NGAL、MMP-9 mRNA表達水平比較（）

注：與本組治療前比較，△P＜0.05；與對照組治療后比較，*P＜0.05；NGAL：中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白；MMP-9：基質金屬蛋白酶9；對照組給予美沙拉嗪腸溶片治療；觀察組給予美沙拉嗪腸溶片+白術芍藥散

組別 例數 治療前NGA治L療 后 治療前MMP-治9療后對照組400.86±0.140.63±0.12△0.72±0.130.55±0.11△觀察組400.87±0.150.44±0.09*△0.73±0.140.39±0.09*△

3.5 兩組UA 患者血清NGAL、MMP-9 蛋白水平比較 兩組治療前血清NGAL、MMP-9 mRNA 水平差異無統計學意義（P＞0.05）；治療后，兩組患者血清NGAL、MMP-9 mRNA 水平均明顯降低（P＜0.05），觀察組血清NGAL、MMP-9 蛋白水平較對照組降低明顯。見表3。

3.6 不良反應 對照組發生惡心2 例，觀察組發生惡心1 例，均自行緩解。兩組間不良反應發生率差異無統計學意義（P＞0.05）。

表3 兩組潰瘍性結腸炎患者血清NGAL、MMP-9 水平比較（）

表3 兩組潰瘍性結腸炎患者血清NGAL、MMP-9 水平比較（）

注：與本組治療前比較，△P＜0.05；與對照組治療后比較，*P＜0.05；NGAL：中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白；MMP-9：基質金屬蛋白酶9；對照組給予美沙拉嗪腸溶片治療；觀察組給予美沙拉嗪腸溶片+白術芍藥散

組別 例數 治療N前G AL（ng/治mL療）后 治療MM前P-9（治pg療/m后L）對照組40137.06±30.18103.21±26.29△19.28±6.2612.48±4.25△觀察組40137.45±30.2479.25±18.54*△19.33±6.297.33±3.24*△

4 討 論

UC 發病機制尚未完全闡明，其涉及環境、遺傳、炎癥、免疫和腸道菌群等多種因素[8]。UC 屬中醫“五更泄”、“泄瀉”、“便血”等范疇，認為病因病機脾胃虛弱，脾失運化，濕熱瘀阻，腸絡受損[3]。白術芍藥散用白術苦甘而溫，補脾燥濕；白芍味酸性寒，柔肝止痛；陳皮辛苦而溫，醒脾和胃；防風疏散肝郁，祛濕止瀉[9]。研究表明，白術含白術內酯，而白術內酯能抑制LPS 誘導的巨噬細胞合成誘導型一氧化氮合酶及釋放TNF-α，繼而發揮抗炎效應[10]。白芍總苷提取物能抑制前列腺素E2、白三烯B4 和一氧化氮的生成，而且能抑制淋巴細胞的增殖，還能調節輔助性T 細胞和抑制性T 細胞的分化[11]。陳皮含有黃酮類成分，能抑制LPS 誘導的NO，TNF-α，IL-1β 和IL-6 的產生[12]。防風含香豆素類物質，白芷靈（一種香豆素成分）能抑制LPS 誘導的巨噬細胞中NFκB 信號通路激活[13]。本研究結果顯示，觀察組的臨床癥狀改善總有效率（86.00%）顯著優于對照組（73.00%），提示白術芍藥散聯合美沙拉嗪治療UC 具有良好的臨床療效。

正常生理狀態下，NGAL 在腎、結腸、胃及肝臟等組織中表達水平極低；但當炎癥發生時，NGAL 呈現出高表達[14]。研究顯示，NGAL 的持續升高與中性粒細胞的持續活化密切相關[15]。

研究顯示，NGAL 與TNF-α、IL-1β、CRP 等多種炎癥因子密切相關，NGAL 可能是炎癥反應中的一個重要節點[16-17]。研究證實，MMP-9 通過降解基底膜中的Ⅳ型膠原，破壞腸黏膜屏障，使腸黏膜通透性升高，促進炎癥的擴散[18]。UC 患者血清NGAL、MMP-9 水平與UC 病情嚴重程度呈正相關[19]。本研究發現，經治療后，觀察組腸黏膜NGAL、MMP-9 mRNA 表達較對照組明顯降低；觀察組血清NGAL、MMP-9 蛋白表達較對照組明顯減少。上述結果提示，白術芍藥散可能通過抑制NGAL、MMP-9 的轉錄和表達，進而抑制腸道炎癥反應，改善腸黏膜屏障。

綜上所述，白術芍藥散聯合美沙拉嗪治療UC 具有良好的臨床療效，其作用機制可能與抑制NGAL、MMP-9 的轉錄和表達，進而抑制腸道炎癥反應，改善腸黏膜屏障有關。