改良血清胱抑素C試劑盒的性能評價

張海悅，王姝（通信作者），程慧敏，孫景春，魏瀅

吉林省富生醫療器械有限公司 （吉林長春 130607）

血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑 C ，即血清胱抑素C（Cystatin C，Cys C），是一種小分子蛋白質，大量的臨床應用表明血清Cys C是預測腎小球濾過率下降的最敏感指標，是一種理想的反映腎功能損害的標志物[1-4]。目前，臨床對Cys C的檢測方法包括酶聯免疫吸附測定法、化學發光法和免疫比濁法[5]；其中，酶聯免疫吸附測定法和化學發光法由于操作煩瑣、耗時長、費用高等不足，限制了其廣泛應用；而隨著全自動生化儀的普及和多種快速免疫比濁檢測技術的發展，免疫比濁法因具有反應時間短、精密度高、檢測范圍寬，以及黃疸、溶血、脂血標本影響小和易于自動化等優點，已成為臨床Cys C的主流檢測方法，其中的免疫透射比濁法與免疫散射比濁法的檢測精密度相當[6]。但是，由于免疫比濁法的檢測原理缺乏酶促放大反應，導致現有的Cys C免疫比濁檢測試劑盒不可避免地出現精密度較低等不足[7-8]。我們對試劑盒原料進行了改良，添加β-環糊精等試劑，并采用包埋工藝以提高試劑盒的精密度、穩定性。本研究對改良血清Cys C試劑盒的性能進行評價，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

日立7600全自動生化分析儀；吉林省富生醫療器械有限公司自制的胱抑素試劑盒及校準品；質控液購買于英國朗道公司。

1.2 標本及檢測

采集空腹靜脈血5 ml，于分離膠試管中離心分離血清，采用免疫比濁法測定血清Cys C含量。

1.3 方法

1.3.1 精密度

（1）重復性：檢測濃度（1.00±0.10 ）mg/L的控制血清，重復測定10次，計算變異系數。（2）批間差：分別用3個不同批號的試劑盒檢測濃度（1.00±0.10 ）mg/L的控制血清，每個批號檢測3次，計算批間差。

1.3.2 準確度

選擇外觀正常的高、中、低值Cys C血清各1份作為基礎血清（0.72 mg/L、1.48 mg/L、3.73 mg/L），分別加入不同濃度的校準品（4 mg/L、8 mg/L、12 mg/L），樣品制備如下。（1）基礎樣品：血清0.9 ml+蒸餾水0.1 ml。（2）分析樣品：血清 0.9 ml +Cys C 校準品 0.1 ml。

回收濃度=分析樣品測得濃度-基礎樣品測得濃度。回收率（%）=回收濃度/加入濃度×100%。

1.3.3 最低檢測限

采用10 g/L牛血清白蛋白+0.9%氯化鈉注射液作為空白樣本，空白樣本應不含被測物；在生化分析儀上連續重復檢測20次，記錄檢測結果。

1.3.4 穩定性

取Cys C檢測試劑盒進行穩定性試驗，37 ℃下分別放置3、7、15、30 d后進行檢測；開封穩定性試驗分別按2～8 ℃下放置3、7、15、30、45、60 d 后進行測定；與2～8 ℃儲存試劑同時測定2份（低值、高值）血清。

1.3.5 抗干擾性

選擇正常與異常濃度的 Cys C（0.62～4.07 mg/L）3個濃度9個血清樣本，分別加入含干擾物質（膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯）的血清溶液（血清:干擾物質=9:1），使試樣本中膽紅素濃度分別為40 、80、160、320 μmol/L，血紅蛋白濃度分別為2、4、8、10 g/L，甘油三酯濃度分別為4、6、8、10 mmol/L，每個樣本重復檢測3次，結果取平均值[9]。

2 結果

2.1 精密度

2.1.1 重復性

重復測定10次控制血清樣本，變異系數為1.40%，見表1。

表1 重復性試驗結果

2.1.2 批間差

3個不同批號的試劑盒檢測濃度（1.00±0.10 ）mg/L的控制血清，批間差為2.94%，見表2。

表2 批間差試驗結果

2.2 準確度

不同濃度Cys C的回收范圍為96.25%～104.50%，平均回收率為101.27%，見表3。

2.3 最低檢測限

最低檢測限為0.030 mg/L，見表4。

表4 最低檢測限試驗結果

2.4 穩定性

Cys C檢測試劑盒于37 ℃、避光環境中貯存30 d，開封后于2～8 ℃、避光環境中貯存60 d的偏差的絕對值均＜5%，見表5～6。

表5 高溫穩定性試驗結果

表6 開封穩定性試驗結果

2.5 抗干擾性

膽紅素≤320 μmol/L、血紅蛋白≤10 g/L、甘油三酯≤10 mmol/L時對Cys C檢測試劑盒檢測結果的干擾均＜5%，見表7。

表7 抗干擾性試驗結果（%）

3 討論

Cys C是新近發展起來的一個評價腎功能早期損害的靈敏指標，其可在體內以恒定速度產生，不受年齡、性別、體重、炎癥狀態等因素影響[10]。由于血清中Cys C濃度較低，故其測定方法需具有較高的靈敏度及特異度。免疫比濁法雖然檢測靈敏度較差，但仍可達150 μg/L左右，遠遠低于健康人血清Cys C濃度的下限值，可滿足臨床需要。本研究中的改良試劑盒最低檢測限更是可達到0.030 mg/L（即30 μg/L）；同時干擾試驗證明，本試劑盒基本上不受血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯的影響，具有較好的抗干擾性；回收率可達96.25%～104.50%，批間變異系數均較小（＜2.94%），說明改良試劑盒具有較高的精密度、準確度和抗干擾性。

目前，市場上出現的Cys C檢測試紙及試劑盒，因其會受到溫度、光照等外界因素的影響，導致結果偏差較大，所以市場前景不好；而本研究中的試劑盒經過改良具有較好的高溫穩定性和開封穩定性[11-12]。這些結果均表明改良Cys C試劑盒性能穩定性能好、干擾少、準確度和精密度高、操作簡便快速，可以用于臨床常規血清Cys C的檢測，并且在診斷腎功能早期損害和評價腎移植患者腎功能等領域中有廣闊應用前景。