MTHFR基因多態性與老年慢性腎衰竭的相關性

余波 張韶英 聶斌 管斯斯

(華中科技大學同濟醫學院附屬武漢中心醫院綜合一科，湖北 武漢 430012)

慢性腎衰竭(CRF)患者常伴有維生素缺乏和高同型半胱氨酸(Hcy)血癥(HHcy)。CRF患者，尤其是行血液透析和腹膜透析治療的患者易發生葉酸缺乏〔1〕。葉酸與神經精神疾病、出生缺陷、腫瘤等密切相關，特別是近年來葉酸缺乏被證實與CRF患者動脈粥樣硬化等心腦血管疾病的發生相關〔2〕。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是葉酸代謝途徑的關鍵酶，MTHFR基因突變可顯著降低其活性，導致蛋氨酸循環障礙，Hcy水平上升，發生HHcy〔3〕。HHcy是冠心病、腦血管和周圍血管疾病發生的獨立危險因素，因此MTHFR基因突變是CRF患者發生心血管疾病的危險因素〔4〕。本研究旨在探討MTHFR基因突變對武漢市老年CRF人群Hcy的影響及葉酸補充治療的作用。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取華中科技大學同濟醫學院附屬武漢中心醫院2015年2月至2017年2月收治的268例CRF患者為CRF組。納入標準：符合美國慢性腎衰竭治療指南中有關尿毒癥的診斷標準；尿毒癥期CKD 3～4期；年齡≥60歲；知情同意。排除標準：合并嚴重肝疾病、全身性感染、腫瘤者；近3個月內服用過維生素B12和葉酸者。CRF組男172例，女96例；年齡60～88〔平均(69.5±6.5)〕歲；透析時間12～76〔平均(52.6±15.9)〕個月；原發病：血液透析腎病122例，慢性腎小球腎炎62例，慢性間質性腎炎38例，高血壓腎小球動脈硬化癥20例，梗阻性腎病20例，多囊腎病6例。另外選取同期健康體檢人群250例為對照組，男166例，女84例；年齡60～85〔平均(70.2±7.3)〕歲。兩組性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1基因多態性檢測 采集所有受檢者2 ml靜脈血，EDTA抗凝，全血DNA提取嚴格按試劑盒(北京諾博萊德科技有限公司)說明書操作，并進行DNA濃度測定。上PCR儀器(上海百傲Bio-Rad T100型)檢測，PCR擴增條件：50℃ 5 min；94℃ 5 min；94℃ 25 s，56℃ 25 s，72℃ 25 s，35個循環；72℃ 5 min。MTHFR 677C/T基因雜交過程嚴格按說明書進行，結束后采用芯片識讀儀(上海百傲科技有限公司BE-2.0型)對雜交結果進行掃描判定。

1.2.2治療方法 CRF組每日口服葉酸(常州制藥廠有限公司，國藥準字H32023302，規格：5 mg×100片)5 mg/d，維生素B6(廣東恒健制藥有限公司，國藥準字H44020622，規格：10 mg×1 000片)10 mg/d，維生素B12(上海信誼九福藥業有限公司，國藥準字H31022370，規格：25 μg×100片)，50 μg/d。連續服用6個月。

1.3觀察指標 治療前后，采集患者靜脈血2 ml，采用免疫熒光偏振法檢測Hcy水平，試劑盒為上海基免實業有限公司產品。采用去蛋白終點比色法檢測肌酐(Scr)，試劑盒為北京雷根生物技術有限公司產品，根據以下公式計算eGFR，eGFR(ml·min-1·1.73 m-2)=175×(Scr)-1.154×(年齡)-0.203×(0.742女性)。記錄治療期間心血管事件發生情況，心血管事件主要指心肌梗死、心律失常、心源性猝死、心絞痛和心力衰竭。

1.4統計方法 采用SPSS18.0軟件行χ2及t檢驗。

2 結 果

2.1兩組MTHFR基因677C/T多態性比較 CRF組和對照組MTHFR基因677C/T多態性基因型分布均處于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)，所觀察到的基因型頻數與預期的基因型頻數相符合。兩組CC、CT和TT型基因頻率差異有統計學意義(P<0.05)；CRF組T等位基因頻率顯著高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組MTHFR基因677C/T多態性多態性基因型比較及Hardy-Weinberg平衡分析〔n(%)〕

與對照組比較：1)P<0.05

2.2不同基因型患者治療結果比較 治療前、后，MTHFR基因TT型血清Hcy水平均顯著高于CC、CT型(均P<0.05)，eGFR均顯著低于CC、CT型(均P<0.05)；治療前后血清Hcy水平和eGFR差值均顯著低于CC、CT型CRF患者(均P<0.05)。見表2。

2.3不同基因型患者心血管事件發生率比較 MTHFR基因TT型心絞痛、心肌梗死、心力衰竭和總體心血管事件發生率顯著高于CC、CT型(均P<0.05)。見表3。

表2 MTHFR基因677C/T CC、CT和TT型CRF患者治療結果比較

與TT型相比:1)P<0.05，下表同

表3 MTHFR基因677C/T CC、CT和TT型心血管事件發生情況比較〔n(%)〕

3 討 論

MTHFR基因全長17 kb，包含11個外顯子，位于人類1號染色體1p36.3位置，存在 29種不同位點的基因突變，其中以677C/T位點突變最為常見，即第677位核苷酸 C至T(丙氨酸至纈氨酸)突變〔5，6〕。MTHFR基因是葉酸和Hcy代謝途徑中的關鍵酶，葉酸吸收進入人體經MTHFR還原和轉甲基化形成5-甲基四氫葉酸，這是葉酸在血清中的主要存在形式，當MTHFR 基因C677C/T位點突變可導致其耐熱性和活性下降，導致血清Hcy水平上升〔7，8〕。HHcy不但被證實是心腦血管疾病的獨立危險因素，Hcy水平上升可導致腎功能下降，Hcy是CRF的重要致病因素之一〔2，9〕。

本研究表明MTHFR T等位基因可能是武漢市老年人群發生CRF的一個易感基因。李秀季等〔10〕報道稱，原發性高血壓腎衰竭患者MTHFR T等位基因頻率明顯高于健康人群和原發性高血壓腎功能正常患者，認為MTHFR T等位基因是我國北方漢族人原發性高血壓患者發生腎衰竭的一個易感基因。有國外學者也證實，MTHFR T等位基因是原發性高血壓患者動脈硬化性器官損傷的獨立危險因素〔11〕。蘭瑩瑩〔12〕報道，MTHFR 基因C677 C/T多態性對原發性高血壓患者血清葉酸和谷丙轉氨酶水平的關聯性存在交互作用，TT基因型人群中的葉酸和谷丙轉氨酶水平相關性顯著低于MTHFR 基因CC 基因型。

Hcy是由蛋氨酸代謝生成的一種含硫氨基酸，可導致動脈粥樣硬化和血栓性疾病的發生。在Hcy復雜的轉化過程中，葉酸、維生素B6和維生素B12發揮重要作用，可降低血清Hcy水平〔13，14〕。本研究結果表明MTHFR T等位基因可能是導致血清Hcy水平上升的易感基因，MTHFR基因TT型CRF患者腎功能損害更為嚴重。其主要機制可能是：MTHFR基因TT型導致Hcy水平上升明顯，高血清Hcy損害腎臟，并最終影響腎臟功能〔15，16〕。經葉酸補充治療后，MTHFR基因TT型CRF患者治療效果較差。

葉酸不但能降低血清Hcy水平，還能拮抗其毒性作用〔17〕。本研究結果表明MTHFR基因TT型更易發生心血管事件。研究〔18，19〕顯示，補充葉酸能顯著降低終末期腎病患者發生心血管疾病的風險，本研究也支持補充葉酸能有助于降低CRF心血事件發生率。

綜上，MTHFR T等位基因可能是武漢市老年人群發生CRF的一個易感基因，MTHFR基因TT型患者腎功能更差，葉酸補充治療效果不佳。因此，臨床上應對CRF患者推廣MTHFR基因多態性的篩查，從而有助于指導臨床治療。