支原體肺炎患兒血清白細(xì)胞介素-4，白細(xì)胞介素-17，干擾素-γ，白細(xì)胞介素-36的表達(dá)及臨床意義

潘莉，朱敏，邰建飛

支原體(MP)是引起兒童社區(qū)獲得性肺炎最常見的病原體之一[1]，有報(bào)道顯示兒童支原體肺炎(MPP)可引起高達(dá)40%的社區(qū)獲得性肺炎[2]。支原體感染主要引起呼吸道感染，少數(shù)也可引起嚴(yán)重的肺外表現(xiàn)，如腦炎[3]，心肌炎[4]，腎炎[5]等。MPP大多數(shù)癥狀較輕，是良性、自限性的過程，使用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素臨床癥狀及體征可得到緩解。病原菌的直接作用及機(jī)體的免疫反應(yīng)均在MPP中起重要作用。既往有研究報(bào)道，血清中某些細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素-4(IL-4)、白細(xì)胞介素-17(IL-17)、干擾素-γ(INF-γ)在MPP的發(fā)生及發(fā)展中起重要作用。其水平變化對判斷MPP病情及預(yù)后有重要的臨床價值[6-10]。白細(xì)胞介素-36(IL-36)是細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-1(IL-1)家族中的成員，主要在皮膚、肺及腸等臟器的上皮細(xì)胞及免疫細(xì)胞中，誘導(dǎo)細(xì)胞的活動及細(xì)胞因子的分泌[11]，但目前國內(nèi)尚無其與MPP相關(guān)性的臨床報(bào)道。本文通過對MPP患兒IL-4、IL-17、IL-36及INF-γ測定，旨在為臨床診療提供理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1一般資料本資料選取2011年11月1日至2015年11月1日在常州市金壇區(qū)人民醫(yī)院住院的確診為MPP的患兒45例為MMP組，以腹股溝疝修補(bǔ)術(shù)的19例患兒為對照組。本研究通過常州市金壇區(qū)人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，病人或近親屬對研究方案簽署知情同意書。MMP組入選標(biāo)準(zhǔn)：①肺炎診斷符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，即：具備發(fā)熱、咳嗽、肺部啰音等呼吸道表現(xiàn)，伴胸部影像學(xué)單側(cè)或雙側(cè)異常改變；②痰液MP熒光定量PCR陽性和血MP-IgM抗體陽性或雙份血清第二份血清IgG抗體滴度上升4倍；③病史資料完整；④除外先天性心臟病、遺傳代謝疾病、神經(jīng)系統(tǒng)及支氣管肺發(fā)育不良以及免疫抑制患兒。

1.2研究方法入院24 h內(nèi)采集MPP組與對照組的外周靜脈血行血常規(guī)、血生化、體液免疫、細(xì)胞免疫及血清細(xì)胞因子測定。行細(xì)胞因子測定時，外周血經(jīng)3 000 r/min離心后，分離出血清并保存在溫度為-80 ℃的冰箱中待檢測。采用ELISA方法檢測血清中細(xì)胞因子IL-4、IL-17、IL-36及INF-γ的含量。MPP組在出院前再次抽外周靜脈血行細(xì)胞因子測定。所有檢測操作嚴(yán)格按照相關(guān)規(guī)程完成。

2 結(jié)果

2.1基本資料MPP患兒的臨床及實(shí)驗(yàn)室資料見表1。兩組性別及年齡均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。MPP組中3歲以下15例(33.3%)，3歲以上30例(66.6%)。MPP組中支氣管肺炎占20例(44.4%)，大葉性肺炎占25例(55.6%)，其中5例伴有胸腔積液，均為大葉性肺炎。

表1 MPP患兒的臨床及實(shí)驗(yàn)室資

2.2MPP組及對照組患兒血清IL-4、IL-17、IL-36及INF-γ水平MPP患兒血清IL-4、IL-17、IL-36及INF-γ水平在急性期為：[(723±263)、(398±218)、(413±291)、(3 144±1 932)] ng/L；而對照組為：[(481±198)、(212±39)、(302±87)、(1 632±917)] ng/L，可見較對照組均明顯增高(均P<0.05)，見圖1。

圖1 MPP組與對照組血清IL-4，IL-36，IL-17及INF-γ水平比較

圖2 大葉性肺炎與支氣管肺炎患兒血清IL-4、IL-17、IL-36及INF-γ水平比較

圖3 MPP患兒治療前后血清IL-4、IL-36、IL-17及INF-γ水平比較

2.3支氣管肺炎及大葉性肺炎患兒血清IL-4、IL-17、IL-36及INF-γ水平大葉性肺炎患兒血清IL-4、IL-17、IL-36及INF-γ水平較支氣管肺炎患兒增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，結(jié)果見圖2。

2.4MPP組患兒治療前后血清IL-4、IL-17、IL-36及INF-γ水平患兒治療前后血清IL-4、IL-36、IL-17及INF-γ水平均較前下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，結(jié)果見圖3。

2.5MPP組患兒治療前不同年齡組中血清IL-4，IL-17，IL-36及INF-γ水平3歲以下MPP患兒這四種細(xì)胞因子血清水平分別為[(513.2±239.0)、(468.4±337.8)、(445.7±231.6)、(3 489.5±1 722.7)] ng/L。3歲以上患兒這四種細(xì)胞因子血清水平分別為[(782.0±325.3)、(321.6±187.5)、(303.5±180.9)、(2 335.9±1 457.9)]ng/L，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

近年來MP感染率呈逐年增高的趨勢[12]。免疫反應(yīng)一方面可保護(hù)機(jī)體免受病原菌侵害，但過度的炎癥反應(yīng)可加重疾病的進(jìn)程。免疫炎癥中產(chǎn)生的細(xì)胞因子相互影響、相互作用、相互關(guān)聯(lián)，形成復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)體系，在疾病的發(fā)展過程中起重要作用，同時對判斷疾病的進(jìn)程有指導(dǎo)意義。本研究我們通過對MPP患兒血清細(xì)胞因子測定，發(fā)現(xiàn)MPP患兒血清IL-4，IL-17，IL-36及INF-γ水平在急性期較對照組均明顯增高，在恢復(fù)期下降，且大葉性肺炎，>3歲年齡組MPP患兒這四個細(xì)胞因子均明顯增高。

劉賀臨等[6]發(fā)現(xiàn)MPP患兒血清IL-4水平急性期明顯高于恢復(fù)期和健康對照組，與我們結(jié)果相同，但血清INF-γ水平在急性期、恢復(fù)期及對照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，MPP患兒急性期血清IL-4/INF-γ比值增高提示Th2細(xì)胞在MPP的免疫炎癥中起主要作用。而左慧敏等[13]發(fā)現(xiàn)，IFN-γ質(zhì)量水平急性期較恢復(fù)期和對照組明顯升高，說明急性期血清IFN-γ水平對疾病的發(fā)展有重要提示作用。Th1細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IFN-γ增高激活NK細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞，增加對病原體的殺傷能力。而IL-4通過B淋巴細(xì)胞分泌IgE，介導(dǎo)過敏反應(yīng)，其水平增高在一定程度上可為機(jī)體的自我防御反應(yīng)，以減輕MP所致的炎癥反應(yīng)，有利于機(jī)體增強(qiáng)抗炎效應(yīng)、保護(hù)自身及清除病原，使機(jī)體的損害減少到最低。IFN-γ及IL-4的升高在一定程度上能反應(yīng)Th1及Th2細(xì)胞的功能。但在MP感染免疫中，究竟哪類免疫反應(yīng)起主導(dǎo)作用一直存在爭論。IL-17在肺炎支原體中的作用早在2007年就被報(bào)道，是Th17細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。王冬梅[9]等發(fā)現(xiàn)MPP急性期IL-17水平明顯高于恢復(fù)期和對照組，與我們結(jié)果相同，說明IL-17在急性期明顯增加，參與MPP免疫應(yīng)答反應(yīng)。

大葉性肺炎患兒細(xì)胞因子較支氣管肺炎患兒增高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，一方面，與大葉性肺炎多見于大年齡組患兒，免疫功能相對發(fā)育完善，免疫應(yīng)答反應(yīng)較劇有關(guān)；另一方面，說明MP引起的大葉性肺炎本身炎性反應(yīng)較劇，與大葉性肺炎患兒胸腔積液發(fā)生率高相符，同時也與本研究中>3歲患兒血清細(xì)胞因子相對增高相符合。

IL-36與MPP的相關(guān)性既往無類似報(bào)道。有研究表明，吸煙、TNF-α、IL-1β，IL-17等刺激下，支氣管上皮細(xì)胞分泌IL-36增加[14-15]。IL-36可引起肺組織中的中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞數(shù)量增多，氣道反應(yīng)性增高及黏液分泌增加[10]，本研究中血清IL-36水平在急性期、大葉性肺炎、>3歲患兒中明顯增高，可能與MPP患兒血清TNF-α水平增高及MP對支氣管上皮細(xì)胞刺激有關(guān)，但其具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

綜上所述，在MPP急性期、大葉性肺炎、>3歲年齡組中IL-4，IL-17，IL-36及INF-γ明顯增高，對病情評估有一定指導(dǎo)意義，有助于進(jìn)一步指導(dǎo)MPP的臨床治療。