農(nóng)林害蟲室內(nèi)生物測(cè)定方法概述

周 嫻,張恒嘉

(福建農(nóng)林大學(xué)林學(xué)院，福建 福州 350002)

1 背景

目前，我國(guó)在農(nóng)業(yè)和林業(yè)的發(fā)展上面臨著嚴(yán)重的蟲害危機(jī)。在農(nóng)業(yè)方面，農(nóng)業(yè)發(fā)展與糧食問(wèn)題息息相關(guān)，早在1976年馬世駿等人就統(tǒng)計(jì)出每年全世界的糧食由于病蟲害影響損失了10%～15%[1]。而在林業(yè)方面，由于森林害蟲適應(yīng)力強(qiáng)、繁殖擴(kuò)散速度快也給我國(guó)的森林資源造成了極大的損失。在2013年，國(guó)家林業(yè)和草原局統(tǒng)計(jì)得出全國(guó)森林蟲害面積達(dá)到了847.46萬(wàn)hm2[2]。

我國(guó)對(duì)于農(nóng)林蟲害的防治手段主要方法有誘捕器誘捕[3]、化學(xué)農(nóng)藥施用[4]以及生物防治[5]等。其中，在對(duì)害蟲的化學(xué)防治和生物防治的研究中，生物測(cè)定是對(duì)藥效分析的關(guān)鍵試驗(yàn)環(huán)節(jié)，而可靠的生物測(cè)定方法對(duì)于研究具有重要的意義。因此，本篇文章將對(duì)目前現(xiàn)有的一些農(nóng)林害蟲室內(nèi)生物測(cè)定體系進(jìn)行總結(jié)概述，為今后農(nóng)林害蟲的防治研究提供基礎(chǔ)與參考。

2 農(nóng)林害蟲生物測(cè)定方法

2.1 觸殺式活性測(cè)定

觸殺劑是指接觸蟲體后透過(guò)害蟲體表使害蟲中毒致死的藥劑[6]。觸殺式殺蟲劑主要適用于刺吸式或舔吸式口器的害蟲，包括對(duì)同翅目、半翅目、雙翅目等在內(nèi)的昆蟲有殺蟲活性。目前較為常見的觸殺式生物測(cè)定方法包括：浸葉法、藥膜法、滴蟲法、浸蟲法、Potter噴霧法等。

2.1.1 浸葉法 浸葉法是指，將試蟲的食物浸入待測(cè)藥液后晾干，試蟲在取食過(guò)程中接觸藥液中毒，并在測(cè)定時(shí)間內(nèi)對(duì)試蟲的死亡情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)的方法。目前，浸葉法較多應(yīng)用于煙粉虱、稻縱卷葉螟、梨小食心蟲等昆蟲的生物測(cè)定環(huán)節(jié)。

何玉仙等人在使用煙粉虱成蟲進(jìn)行其對(duì)煙堿類殺蟲劑抗性的實(shí)驗(yàn)中描述的浸葉生測(cè)法的主要方法為：將新鮮棉花打成小圓片，浸入稀釋成不同濃度的藥液，10S之后取出晾干，使用CO2對(duì)煙粉虱雌成蟲進(jìn)行短暫的麻醉，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中，48h后觀察記錄情況[7]。韋茂兔等人發(fā)明的1種針對(duì)煙粉虱成蟲的毒力測(cè)定方法[8]、蘇建亞等人公開發(fā)明的1種稻縱卷葉螟采集與生物測(cè)定方法[9]和庾琴等人的1種針對(duì)于梨小食心蟲的初孵幼蟲的毒力測(cè)定方法[10]中也用到了以上類似的方法。

2.1.2 藥膜法 藥膜法是將放置試蟲的容器浸泡于待測(cè)藥液中，使試蟲與容器接觸一定時(shí)間后致死的方法。中黑苜蓿盲蝽、薊馬等昆蟲可以使用藥膜法進(jìn)行生物測(cè)定。

李國(guó)平等人測(cè)定殺蟲劑對(duì)中黑苜蓿盲蝽的毒力時(shí)，將丙酮溶液轉(zhuǎn)移到閃爍瓶中，熱狗機(jī)上旋轉(zhuǎn)使丙酮在室溫下?lián)]發(fā)，再將中黑苜蓿盲蝽成蟲接入瓶中，使其充分接觸，一段時(shí)間后測(cè)定死亡率[11]。孔祥義等人對(duì)薊馬進(jìn)行5種藥劑的室內(nèi)毒力測(cè)定實(shí)驗(yàn)[12]和韓冬銀等人測(cè)定9種殺蟲劑對(duì)芒果薊馬的毒力實(shí)驗(yàn)[13]中也均采用了藥膜法。

2.1.3 滴蟲法 滴蟲法是將待測(cè)藥液滴到試蟲的蟲體上，一定時(shí)間后統(tǒng)計(jì)死亡率的方法。滴蟲法可以在斜紋夜蛾、稻縱卷葉螟等昆蟲的生物測(cè)定中使用。

武懷恒等人采用滴蟲法測(cè)定農(nóng)藥對(duì)斜紋夜蛾幼蟲的殺蟲效果中，將供試農(nóng)藥原液使用超純水稀釋，并在斜紋夜蛾幼蟲的前胸背板滴上藥液，藥液處理之后正常飼喂新鮮棉花，48h后記錄試蟲死亡數(shù)量[14]。蘇建坤等人進(jìn)行了稻縱卷葉螟抗藥性測(cè)定及抗性監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)[15]時(shí)也采用了上述方法。

2.1.4 浸蟲法 浸蟲法是將試蟲直接浸入待測(cè)藥液，培養(yǎng)一定時(shí)間并記錄存活情況的方法。浸蟲法可以用于螨蟲、蚜蟲、松材線蟲、蚜蟲等昆蟲的生物測(cè)定環(huán)節(jié)。

孟和生在進(jìn)行比較兩種不同生物測(cè)定方法對(duì)殺螨劑毒力測(cè)定結(jié)果的影響時(shí)，將害螨的背部固定于粘貼有雙面膠的玻片上，初步剔除死亡和不活潑的試蟲，將帶螨玻片浸入藥液中，吸干多余藥液，于生化培養(yǎng)箱中放置24h，統(tǒng)計(jì)死亡率[16]。蔡文欣等人在進(jìn)行高效殺滅松材線蟲藥物配制的實(shí)驗(yàn)中采用了浸蟲法：配制不同藥液，挑取供試松材線蟲到離心管中，加入藥劑后置于恒溫箱中靜置，復(fù)蘇后鏡檢，檢測(cè)線蟲的死亡數(shù)[17]。羅蘭等人在對(duì)小麥蚜蟲進(jìn)行了殺蟲劑的毒力測(cè)定[18]時(shí)也采用了類似方法。

2.1.5 Potter噴霧法 Potter噴霧法是將試蟲先接到合適的帶有食物的容器中，使用Potter噴霧塔噴施一定時(shí)間藥劑，再培養(yǎng)一定時(shí)間并統(tǒng)計(jì)試蟲死亡率的方法。目前，該方法可用于煙粉虱成蟲的生物測(cè)定環(huán)節(jié)。

王澤華等人公開發(fā)明了一種煙粉虱成蟲的室內(nèi)測(cè)定方法。其步驟為：將塑料養(yǎng)蟲盒的底部鋪上一層1%瓊脂，并將黃瓜葉片背面置于其上，接入煙粉虱成蟲，保鮮膜封口并用解剖針扎數(shù)孔，之后置于-18℃冰箱內(nèi)使試蟲凍僵2～3min，并迅速將其置于Potter噴霧塔下，噴施藥劑后重新封口，置于27℃恒溫箱中飼養(yǎng)48h，觀察并統(tǒng)計(jì)存活情況[19]。

2.2 胃毒式活性測(cè)定

胃毒劑是指藥劑進(jìn)入害蟲體內(nèi)，經(jīng)胃腸道吸收使害蟲中毒致死的藥劑[6]。胃毒式殺蟲劑適用于咀嚼式口器害蟲，具有該口器的害蟲較多是鞘翅目、鱗翅目、直翅目和膜翅目害蟲。該生物測(cè)定方法中又以培養(yǎng)基混藥法、葉片夾毒法為常見方法。

2.2.1 培養(yǎng)基混藥法 培養(yǎng)基混藥法是一種配制對(duì)應(yīng)害蟲的人工飼料，按照一定比例在飼料中添加毒素，并將帶毒飼料直接飼喂試蟲，達(dá)到生物測(cè)定目的的方法。其可用于甜菜夜蛾、綠盲蝽若蟲等昆蟲。

曾曉慧等人進(jìn)行的蘇云金芽孢桿菌對(duì)甜菜夜蛾幼蟲的毒力測(cè)定中提及一種培養(yǎng)基混藥法。其方法為：將稀釋好的藥液均勻混入人工飼料中，倒入24孔板，接入甜菜夜蛾初孵幼蟲，一段時(shí)間后統(tǒng)計(jì)其死亡率[20]。梁革梅等人在發(fā)明專利中提及了有毒物質(zhì)對(duì)綠盲蝽若蟲的毒力測(cè)定方法：將待測(cè)藥劑與人工飼料混合，并將其制成膠囊狀，接入試蟲，一定時(shí)間后統(tǒng)計(jì)并得到生物測(cè)定數(shù)據(jù)[21]。

2.2.2 葉片夾毒法 葉片夾毒法是將待測(cè)藥劑加在一片葉片上，再用另一葉片覆蓋，提供給試蟲當(dāng)食物，一定時(shí)間后統(tǒng)計(jì)其存活情況的方法。美國(guó)白蛾幼蟲可以采用該方法進(jìn)行生物測(cè)定。

范立鵬等人在進(jìn)行紫莖澤蘭乙醇提取物對(duì)美國(guó)白蛾幼蟲的毒力測(cè)定中提及一種夾毒葉片法：使用打孔器將桑葉打成小圓葉片，將待測(cè)液使用微量點(diǎn)滴儀滴在葉片中央，待揮發(fā)，再將涂有漿糊的葉片覆蓋于藥面上制成夾毒的葉片，置于保濕培養(yǎng)皿中并接入試蟲，喂食2h后，換成新鮮無(wú)毒桑葉，48h后統(tǒng)計(jì)試蟲死亡情況并計(jì)算[22]。

2.3 內(nèi)吸式活性測(cè)定

內(nèi)吸劑指的是能夠被植物的葉、莖、根或種子吸收，并輸導(dǎo)至植物各部分組織內(nèi)，植物汁液被害蟲取食后，害蟲中毒死亡的藥劑。內(nèi)吸式殺蟲劑適用于防治具有刺吸式口器的害蟲[6]，而刺吸式口器一般為同翅目、半翅目、蚤目、虱目和部分雙翅目昆蟲所有。目前較為常見的有葉片吸收法等。

葉片吸收法指的是將葉柄于藥液中浸泡一定時(shí)間后取出，待葉柄吸收藥液之后，取下相同大小的葉片并接入試蟲進(jìn)行的生物測(cè)定方法。煙粉虱成蟲可以使用上述方法進(jìn)行生物測(cè)定。何玉仙等人在使用煙粉虱成蟲進(jìn)行其對(duì)煙堿類殺蟲劑抗性的實(shí)驗(yàn)中采用的內(nèi)吸生測(cè)法的主要方法為：從棉花苗上摘下新鮮供試葉片，將葉柄浸入系列濃度藥液，再用打孔器打下小圓片，正面朝下置于平鋪有瓊脂的培養(yǎng)皿中，使用CO2將煙粉虱的雌成蟲進(jìn)行短暫的麻醉，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，48h后觀察記錄情況[7]。

3 展望

目前，農(nóng)林害蟲給我國(guó)的農(nóng)業(yè)、林業(yè)已造成極大的經(jīng)濟(jì)損失，并且嚴(yán)重破壞了生態(tài)環(huán)境的穩(wěn)定性，因此農(nóng)林害蟲的防治工作刻不容緩。當(dāng)前，對(duì)于蟲害的防治研究中需要同時(shí)考慮對(duì)蟲害的抑制以及環(huán)境保護(hù)2個(gè)方面，即在穩(wěn)定害蟲數(shù)量的同時(shí)確保投放的藥物不造成對(duì)其他生物和環(huán)境的危害，保證生態(tài)環(huán)境的可持續(xù)發(fā)展。因此，可靠有效的生物測(cè)定對(duì)于農(nóng)林蟲害的防治的研究具有重要的意義，而對(duì)于不同類型的農(nóng)林蟲害采取針對(duì)性的生物測(cè)定方法進(jìn)行試驗(yàn)對(duì)于后續(xù)的田間應(yīng)用具有現(xiàn)實(shí)意義。