迷迭香精油殼聚糖納米粒的制備及其對冷藏草魚保鮮效果研究

劉善智，范小靜，閆 合，周一萬，張 興

(西北農林科技大學 無公害農藥研究服務中心，陜西省生物農藥工程技術研究中心，陜西楊凌 712100)

水產動物具有低脂肪、高蛋白、高不飽和脂肪酸以及維生素和礦物質豐富等特點，是合理膳食結構中不可缺少的組成部分。同時，由于水分及營養成分含量高，且自身易攜帶大量細菌，水產品在加工、儲運和銷售過程中極易變色、變味和腐敗變質。目前，低溫貯藏是最常見的水產品保鮮方式。然而低溫環境并不能有效延緩嗜冷菌的生長繁殖和不飽和脂肪酸的氧化，過低的溫度還會使水產品的質構特性發生劣化[1]，因此，在水產品貯藏期間常常會使用一些化學保鮮劑。常用的化學合成保鮮劑其潛在的毒副作用被越來越多的人所詬病[2]，開發天然無毒的生物保鮮劑，延長水產品貨架期，提高水產品安全性，已成為水產品保藏技術發展的趨勢。

植物精油是從芳香植物中提取，具有強烈香味的揮發性油狀液體物質。由于其安全無毒，活性良好等優點，精油保鮮劑的開發與利用現已成為食品貯藏加工領域的熱點內容。精油本身水溶性差，易揮發，對光、熱等環境因素敏感，這些特性限制了精油的使用范圍，因此研制緩釋型精油保鮮劑，提高其穩定性和利用率，對食品保鮮意義重大[3]。殼聚糖成本低廉、安全可食用、生物降解性和生物相容性好，是制備精油保鮮劑的理想載體材料。本試驗在西北農林科技大學無公害農藥研究服務中心前期篩選的基礎上，選擇迷迭香精油作為芯材，利用離子交聯法制備迷迭香精油殼聚糖納米制劑(rosemary essential oil loaded chitosan nanoparticles，CS-NP-REO)并優化其制備工藝，進一步考察最優工藝下制備的迷迭香精油殼聚糖納米制劑對冷藏草魚肉的保鮮作用，以期為冷藏魚肉保鮮劑的研制奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 材料與試劑 鮮活草魚(Ctenopharyngodonidella)購自陜西省楊凌好又多超市。

殼聚糖(CS，脫乙酰度≥80%)、三聚磷酸鈉(TPP)、2-硫代巴比妥酸(TBA)、三氯乙酸、氧化鎂、硼酸、氫氧化鈉、鹽酸、甲基紅、次甲基藍等，購自上海阿拉丁試劑有限公司。

迷迭香精油(rosemary essential oil，REO)購自廣州恒信香料有限公司。

菌落總數的測定用平板計數瓊脂(plate count agar，PCA)培養基：將胰蛋白胨 5 g， 酵母浸膏 2.5 g，葡萄糖 1.0 g，瓊脂 15 g，加入蒸餾水中，煮沸溶解，pH 調至7.0，121 ℃高壓滅菌15 min。

1.1.2 儀器與設備 HITACHI CR22N高速冷凍離心機，日本日立公司；UV-2500 紫外分光光度計，日本島津公司；KJELTEC 2300，自動凱氏定氮儀，丹麥FOSS公司；WSC-S 測色色差計，上海精密科學儀器有限公司；PHS-3C 酸度計，上海日島科學儀器有限公司。

1.2 CS-NP-REO的制備及條件優化

參考武陶和丁武[4]的方法，采用離子交聯法制備CS-NP-REO及空白納米粒(CS-NP)。稱取適量的殼聚糖粉末，室溫下溶于φ=1% 醋酸溶液，在室溫下攪拌(600 r/min)過夜，得到不同的CS溶液。調節溶液pH至4，0.45 μm微孔濾膜過濾。加入溶液體積φ=1%的吐溫-80，攪拌混勻。逐滴加入不同質量濃度的TPP溶液，CS與TPP溶液體積比為5∶2，溫和攪拌30 min，即得CS-NP。

量取一定濃度的REO乙醇溶液，CS與REO體積比為5∶1，緩慢逐滴加入到配制好的CS溶液中，室溫下溫和攪拌30 min( 600 r/min )，然后逐滴加入TPP溶液，室溫下溫和攪拌30 min，即得CS-NP-REO混懸液。

1.2.1 單因素試驗 根據文獻中的報道以及預試驗結果，選擇CS、TPP、REO質量濃度和反應體系pH 4項制備條件設計單因素試驗。

pH對CS-NP-REO包封率的影響：用NaOH和醋酸調節溶液pH到3、3.5、4、4.5、5，制備CS-NP-REO，固定CS、TPP、REO分別為3、1.5、2 mg/mL，觀察納米粒混懸液狀態并測定包封率。

CS質量濃度對CS-NP-REO包封率的影響：按前述方法分別制備質量濃度為1、2、3、4和5 mg/mL的CS溶液用于CS-NP-REO混懸液制備，固定TPP、REO質量濃度分別為1.5和2 mg/mL，觀察納米粒混懸液狀態并測定包封率。

TPP質量濃度對CS-NP-REO包封率的影響：按前述方法分別制備質量濃度為0.5、1、1.5、2和2.5 mg/mL的TPP溶液用于CS-NP-REO混懸液制備，固定CS、REO質量濃度分別為3 和2 mg/mL，觀察納米粒混懸液狀態并測定包封率。

REO質量濃度對CS-NP-REO包封率的影響：按前述方法分別制備質量濃度為0.5、1、1.5、2和2.5 mg/mL的REO溶液用于CS-NP-REO混懸液制備，固定CS、TPP質量濃度分別為3和1.5 mg/mL，觀察納米粒混懸液狀態并測定包封率。

1.2.2 CS-NP-REO制備條件優化 根據以上試驗結果，以CS質量濃度(A)(1、2、3 mg/mL)、TPP質量濃度(B)(1、1.5、2 mg/mL)、REO質量濃度(C)(1、1.5、2 mg/mL)為影響因子設計L9(33)正交試驗進行工藝優化，固定CS、TPP和REO體積比為5∶2∶1。

1.3 CS-NP-REO的表征

1.3.1 包封率和載藥量的測定 取REO 10.00 mg于10 mL量瓶中，加乙醇定容，得1.0 mg/mL精油乙醇溶液。精密量取該溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0和1.2 mL，分別置于10 mL量瓶中，加乙醇稀釋，得質量濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10和0.12 mg/mL系列待測液。以溶劑作為空白對照，在250 nm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，質量濃度為橫坐標，得回歸方程y= 1.09x- 0.001 7(R2= 0.991 6)，x線性范圍0.02～0.12 mg/mL。

將CS-NP-REO混懸液置于超濾離心管中，4 ℃下高速離心(8 000 r/min)60 min，取上清液，用紫外分光光度計測定游離精油含量，檢測波長250 nm。納米粒分離洗滌后，冷凍干燥稱質量。包封率(EE)=(總投藥量-游離藥量)/總投藥量×100%；載藥量(LC)=(總投藥量-游離藥量)/納米粒質量×100%

1.3.2 納米粒外觀形態與粒徑的測定 稱取CS-NP-REO凍干粉末，用φ=1%醋酸稀釋至適當濃度，滴加到硅片上自然風干，固定噴金后，掃描電鏡下觀察其形態大小。

1.4 CS-NP-REO對冷藏草魚肉保鮮效果評價

1.4.1 保鮮劑的制備 根據“1.3.1”所述方法，按照優化后的條件制備CS-NP和CS-NP-REO。并以無水乙醇為溶劑，配制與CS-NP-REO中包封的REO濃度相同的精油溶液。

1.4.2 草魚肉處理 將質量約1 kg的鮮活草魚，擊斃后去頭、尾、鱗、骨、內臟，用水沖洗干凈，沿脊椎剖為兩半，置于4 ℃冰箱中，備用。使用滅菌過的案板、盛裝容器、刀具等，在無菌試驗操作臺將肉樣剝皮后切成魚塊，按質量隨機等分為4組：CS-NP組、CS-NP-REO組、REO組和CK組。以事先配制好的不同保鮮劑浸浴處理2 min，取出后于4 ℃冷庫中瀝干，裝入滅菌的食品保鮮袋內并密封，立即置于4 ℃冰箱中儲藏。處理當天記為儲藏第0天，分別在貯藏的第1、3、5、7、9 天，隨機取樣進行感官評定、pH、菌落總數、揮發性鹽基氮值(TVB-N)、硫代巴比妥酸值(TBARS)和色差的測定。

1.4.3 指標測定 感官評定：采用5人組成的感官評定小組進行感官描述檢驗，按照色澤、氣味、組織形態與組織彈性對不同處理條件下草魚肌肉的感官質量進行評定，分數范圍為1～10分[5]，色澤(10分：非常光亮；1分：無光澤)光亮、氣味輕微(10分：輕微；1分：強烈)、肌肉紋理清晰(10分：清晰； 1分：模糊)、彈性好(10分：很有彈性；1分：沒彈性)，得分越高。

色差測定：用色差計測定樣品L*、a*、b*，各樣品均進行3次測定取平均值。

pH測定：稱取5 g 魚肉于燒杯中，加入45 mL 蒸餾水，攪拌均勻后靜置，利用pH計測定其pH。

菌落總數測定：按照GB 4789.2-2010《食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數測定》[6]釆用平板計數培養基(PCA)傾注法計數測定。

TVB-N測定：參照水產行業標準SC/T3032-2007《水產品中揮發性鹽基氮的測定》[7]，采用KJELTEC 2300自動凱氏定氮儀測定。

TBARS測定：參照黃卉等[8]的方法。取10.0 g 魚肉樣品絞碎，加入50 mLφ=7.5%三氯乙酸(含w=0.1%EDTA)，振搖30 min，雙層濾紙過濾2次。取5 mL上清液，加入5 mL 0.02 mol/L 2-硫代巴比妥酸(TBA)溶液，沸水浴反應40 min，取出用流動水冷卻，于8 000 r/min離心10 min，取上清液，加入5 mL氯仿搖勻，靜置分層后取上清液分別在532 nm和600 nm處比色，記錄吸光值并用以下公式計算TBARS。

TBARS=(A532-A600)/155×(1/10)×72.06×100

(3)

1.5 數據處理與統計分析

利用Excel 2010和SPSS 19.0對數據進行分析處理及繪圖，多重比較采用Duncan’s法(P<0.05為顯著水平)。

2 結果與分析

2.1 CS-NP-REO的制備及條件優化

2.1.1 單因素試驗結果 由圖1可知，pH在 3～4 時，殼聚糖納米粒包封率不斷增大。當pH等于4時，包封率達到最大(83.07%)，反應體系最為穩定。

圖1 單因素試驗結果Fig.1 Results of one-factor experimental

之后pH繼續增加，體系中絮狀物和沉淀更容易形成，包封率變化不顯著。在TPP質量濃度(1.5 mg/mL)不變的條件下，包封率隨CS質量濃度的增加而增大。當CS質量濃度為3 mg/mL時，納米粒包封率達到最大(84.73%)，之后開始減小；在CS質量濃度(3 mg/mL)不變的條件下，納米粒包封率隨著TPP質量濃度的增加，先增大后減小。在TPP質量濃度為 1.5 mg/mL 時達到最大(83.06%)。納米粒包封率隨著REO質量濃度的增加而增大。REO質量濃度為2 mg/mL時，包封率為76.34%，當質量濃度超過2 mg/mL時，包封率變化不顯著。

2.1.2 正交試驗結果 由極差分析和方差分析結果可知(表1和表2)，影響包封率的因素順序為 A>C>B，其中CS質量濃度對精油包封率有顯著影響，REO和TPP質量濃度影響較小。組合A2B2C3包封率最高，因此，制備CS-NP-REO的較優條件是CS、TPP和REO質量濃度為2、1.5和2 mg/mL，體積比為5∶2∶1，pH為4。

表1 L9(33)正交試驗結果Table 1 Results of L9(33) orthogonal test

表2 方差分析結果Table 2 Variance analysis of orthogonal design

2.2 CS-NP-REO的表征

2.2.1 包封率和載藥量 采用超濾離心法檢測最優條件(CS、TPP和REO質量濃度為2、1.5和2 mg/mL，體積比為5∶2∶1，pH為4)下制備的CS-NP-REO，結果顯示納米粒包封率為84.52%，載藥量為10.56%。

2.2.2 納米粒外觀形態與粒徑 掃描電鏡下放大105倍后，可以觀察到CS-NP-REO呈球形顆粒狀，形態飽滿，粒徑均勻，約為200 nm，在懸液中分散性良好。

2.3 CS-NP-REO保鮮效果評價

2.3.1 CS-NP-REO對冷藏草魚肉感官評分的影響 由圖2結果可知，貯藏期間草魚肉感官評分隨貯藏時間的變化不斷下降。經CS-NP-REO處理的樣品變化趨勢和對照組有明顯差異。貯藏初期，魚塊肌肉組織緊密完整，紋理清晰，富有彈性，表面光亮，具有鮮味。在貯藏第5天時，CS-NP-REO處理組變化較慢，尚無明顯異味，肉體表面仍具光澤，而對照組樣品開始有腥臭味，肉質疏松且彈性較差，紅色變淡，表面缺乏光澤，感官評分平均為6.11，已接近腐敗；CS-NP-REO處理組在第7天時開始呈現腥臭味，感官評分降至6.20，對照組則有明顯的氨臭味，肉樣紋理不清，顏色輕微發黃，按壓變形后不易恢復且表面附有白色粘液。

圖2 冷藏草魚貯藏過程中感官評分的變化Fig.2 Changes of sensory evaluation of chilled grass carp during storage

2.3.2 CS-NP-REO對冷藏草魚肉pH的影響 冷藏草魚貯藏過程中pH的變化如圖3所示，各處理組及空白對照組的pH在整個貯藏過程中呈上升趨勢，這與周強等[9]的結果一致。與空白對照組相比，經保鮮劑處理后的各樣品pH變化緩慢，CS-NP-REO處理組效果尤為明顯。在9 d的貯藏期內，CS-NP-REO處理草魚肉的pH在6.69～6.96變化，其中第3天最低，其后一直上升。CS-NP、REO及空白處理組pH變化分別為6.72～7.02、6.87～7.11、6.79～7.21。CS-NP-REO處理組在貯藏第9天時pH達到6.96，仍未超過7，而對照組在第7天就達到7.07，且貯藏過程中其pH始終低于對照組，說明CS-NP-REO對冷藏草魚具有一定的保鮮作用。

圖3 冷藏草魚貯藏過程中pH的變化Fig.3 Changes of pH in chilled grass carp during storage

2.3.3 CS-NP-REO對冷藏草魚肉菌落總數的影響 如圖4所示，草魚肉在貯藏期間，隨著貯藏時間的延長，菌落總數不斷上升。菌落總數初始值為1.28×104～ 1.86×104CFU/g。儲藏初期，CS-NP處理組和CS-NP-REO處理組菌落總數增長相對緩慢，在冷藏第3 天時，兩組草魚肉的品質均在一級品范圍以內，其菌落總數與REO組和對照組存在顯著差異(P<0.05)。對照組在貯藏的第7天菌落總數達到2.09×107CFU/g，肉樣表面有白色粘液，并散發腥臭味，超出淡水魚可接受閾值，而經CS-NP-REO處理后，魚肉菌落總數在第7天達到4.47×106CFU/g，第9天達到1.51×107CFU/g。

圖4 冷藏草魚貯藏過程中菌落總數的變化Fig.4 Changes in total viable counts(TVC) of chilled grass carp during storage

2.3.4 CS-NP-REO對冷藏草魚肉TVB-N的影響 根據《SC/T 3032-2007 水產品中揮發性鹽基氮測定的方法》[7]的規定，淡水魚的TVB-N不得大于限量值20 mg/hg，超出不可食用。由圖5可知，對照組在第5天TVB-N達到19.64 mg/hg，已接近不可食用的閾值，在貯藏第7天，TVB-N為31.72 mg/hg，肉樣已腐敗變質；CS-NP-REO處理組在貯藏第7天TVB-N為18.74 mg/hg，仍低于限量值，且與REO組22.73 mg/hg 存在顯著性差異(P<0.05)。在貯藏第9天時，CS-NP-REO組TVB-N達到24.42 mg/hg，樣品腐敗變質，草魚最終冷藏時間在9 d以內。

圖5 冷藏草魚貯藏過程中TVB-N的變化Fig.5 Changes in TVB-N of chilled grass carp during storage

2.3.5 CS-NP-REO對冷藏草魚肉TBARS的影響 如圖6所示，貯藏初期，新鮮草魚TBARS在0.50×10-3mg/g以下，對照組和CS-NP處理組分別在第1、3天后迅速上升，CS-NP-REO組和REO組整個貯藏內變化緩慢。從第5天到貯藏結束，CS-NP-REO組TBARS顯著(P<0.05)低于CS-NP處理組，說明CS-NP包埋迷迭香精油后，其對脂質的抗氧化作用顯著(P<0.05)優于空白納米粒。在貯藏第7天時，對照組TBARS已達1.72 ×10-3mg/g，CS-NP組達到1.28×10-3mg/g，而REO組和CS-NP-REO組分別為0.52×10-3mg/g、0.61×10-3mg/g。這說明REO具有良好的抗氧化作用。CS-NP-REO能有效減緩冷藏草魚肉中脂肪氧化速率。

2.3.6 CS-NP-REO對冷藏草魚肉色差變化的影響 由表4可知，隨著貯藏時間的延長，肉樣漸漸失去光澤，紅色褪去，黃度增加。各處理組較對照組變化緩慢。貯藏第7天，對照組肉樣完全腐敗變質，其a*在4組試驗中最低(2.01)；b*最高(1.53)，且與各處理組存在顯著差異(P<0.05)。

圖6 冷藏草魚貯藏過程中TBARS的變化Fig.6 Change in TBARS of chilled grass carp during storage

色差指標Change of color處理Treatment貯藏時間/d Storage time13579L?CS-NP-REO50.72±0.27 aA50.53±0.13 aA50.12±0.12 bA49.07±0.02 cA48.76±0.05 cACS-NP50.67±0.02 aA49.41±0.07 bB50.33±0.40 aA47.40±0.06 cD46.58±0.05 dCREO50.73±0.03 aA50.46±0.05 bA50.28±0.16 bA48.59±0.05 cB46.73±0.06 dCCK50.53±0.62 bA49.63±0.04 bA49.65±0.12 bA48.19±0.06 cC47.20±0.06 dBa?CS-NP-REO3.54±0.10 aA3.17±0.01 bA2.82±0.01 cA2.24±0.02 dB2.21±0.06 dBCS-NP3.51±0.01 aA3.16±0.04 bA2.78±0.01 cA2.23±0.04 dB2.46±0.02 cAREO3.61±0.01 aA2.92±0.02 bC2.53±0.04 cB2.56±0.01 cA2.15±0.05 dBCK3.61±0.27 aA3.01±0.02 bB2.26±0.02 cC2.01±0.10 cC1.39±0.04 dCb?CS-NP-REO0.59±0.06 bA0.52±0.01 bC0.30±0.02 cC1.27±0.03 aB1.33±0.03 aBCS-NP0.61±0.01 cA0.76±0.04 bB0.82±0.12 bB1.31±0.02 aB1.39±0.01 aBREO0.62±0.01 dA0.80±0.01 cB1.32±0.03 bA1.31±0.08 bB1.48±0.04 aBCK0.61±0.11 dA1.34±0.04 cA1.46±0.03 cA1.53±0.03 bcA1.77±0.13 aA

注：同行不同小寫字母表示顯著差異(P<0.05)，同列不同大寫字母表示顯著差異(P<0.05)。

Note:Values in the same row with the different lowercase letters are not significantly different(P<0.05),values in the same column with different capital letters are not significantly different(P<0.05).

貯藏末期CS-NP-REO組L*顯著大于其他各組，說明魚肉亮度較大，表面有光澤，CS-NP-REO處理可有效減緩草魚冷藏期間的氧化過程，改善魚肉的外觀色澤，延長保藏時間。

3 討論與結論

3.1 CS-NP-REO對冷藏草魚的保鮮效果

為開發能夠應用于生鮮魚肉的新型綠色化學保鮮劑，本研究以殼聚糖為壁材，以迷迭香精油為芯材，制備了CS-NP-REO。經測定CS-NP-REO處理的草魚肉在冷藏期間各指標的變化發現，其對冷藏草魚具有明顯的保鮮效果。從感官指標上看，空白處理組在貯藏第3天，L*已低于50，b*達1.34，魚肉失去光澤，顏色變黃，而CS-NP-REO處理組冷藏7 dL*降至49.07，b*上升至1.27，比對照組延長了4 d左右。從微生物指標上看，在冷藏第3 天，CS-NP-REO處理組菌落總數為3.02×104CFU/g ，對照組為3.98×10-5CFU/g，兩者存在顯著差異，說明殼聚糖納米粒在貯藏初期，對魚肉有明顯的抑菌效果。從理化指標方面比較，對照組在第5天TVB-N已接近不可食用的閾值，CS-NP-REO組可貯藏8 d左右，延長了3 d貨架期。對照組和CS-NP-REO組的TBARS分別于第3天和第9天達到0.7左右，將冷藏草魚的貯藏終點延長了6 d。綜合上述各項指標的測定結果，可以看出：CS-NP-REO對冷藏草魚具有明顯的保鮮效果，可延長肉樣貨架期3～4 d。該結果與如張進杰等[10]制備的殼聚糖和Nisin混合涂膜液，將鰱魚塊的貨架期延長了3～4 d，與劉楠等[11]利用生物保鮮劑Nisin，延長了冷藏草魚片3 d貨架期的結論一致。國外也有研究[12-14]利用殼聚糖納米粒做為藥物載體，包埋百里香精油、牛至精油、Nisin等其他生物保鮮材料，提高其保鮮效果，擴大其應用范圍，延長了不同食品的貨架期。

3.2 CS-NP-REO通過延緩脂質氧化和抑制致腐微生物的生長繁殖來延長草魚的貯藏時間

CS-NP-REO的保鮮作用與迷迭香精油和殼聚糖的生物活性有關。迷迭香精油具有良好的抗氧化能力[15-17]和抑菌能力[18-19]。殷燕等[19]用迷迭香提取物延長了真空包裝豬肉餅的貨架期，在一定濃度下，其保鮮效果與二丁基羥基甲苯相當。本試驗通過比較不同處理下草魚肉TBARS隨時間發生的變化可以看出，CS-NP-REO和REO處理組都能有效地抑制丙二醛的產生，說明 CS-NP-REO主要依靠迷迭香精油抵抗脂質的氧化。Maria[20]研究證明迷迭香精油能有效延緩金頭鯛魚糜中脂質氧化的速率。同樣有研究證明，殼聚糖也具備一定程度的抗氧化能力[21]和抑菌能力[22]，本試驗在對各組肉樣菌落總數的測定結果分析中發現，殼聚糖納米粒能在貯藏初期較好地抑制菌落生長。這與處理美國紅魚時的測定結果相一致[23]。說明CS-NP-REO的殼聚糖壁材對魚肉上的細菌菌落有抑制作用。Solval等[24]同樣用殼聚糖納米粒來抑制凍蝦中好氧菌及霉菌的數量，改善了其在貨架期內的質量。CS-NP-REO結合迷迭香精油和殼聚糖的保鮮活性，并增強了作用效果，比兩者的單獨使用更能延長生鮮魚肉的貯藏時間。

3.3 CS-NP-REO在生鮮魚肉的保鮮應用上具有進一步開發價值

提高植物精油穩定性和持效性的緩釋劑型的開發，成為研究的熱點。裴志勝等[25]利用羅望子膠和阿拉伯膠分子包埋法制備微膠囊高良姜精油，并應用于冷藏金鯧魚糜的保鮮中，在一定程度上延緩了魚糜的變質。丁德龍等[26]以殼聚糖為壁材，白豆蔻精油為芯材制備微膠囊保鮮劑，提升了雞肉在貯藏期內的鮮度水平。本研究中利用離子交聯法制備的CS-NP-REO能有效延長迷迭香精油的保鮮作用時間，提高作用效果，改善其難溶于水、揮發性強的缺點，提高了植物精油的實用性。而且CS-NP-REO制備全程使用無毒的天然材料，因此可廣泛應用于食品領域。盡管在本研究中，CS-NP-REO在冷藏草魚上保鮮效果良好，但影響生鮮魚肉貨架期的因素很多，不同的水產種類、棲息環境、致死方式、貯藏加工條件等都會造成結果的差異，因此，實現CS-NP-REO對不同生鮮魚肉的實際保鮮應用，仍需要進一步的指標檢測和中試放大試驗。

經CS-NP-REO處理的草魚肉在(4±0.5) ℃條件下儲藏時保存時間可達8 d以上，優于對照組5 d 的儲藏期，同時優于同質量濃度下的殼聚糖納米粒和迷迭香精油的單獨處理，具有延長冷鮮草魚貨架期的作用，在進一步開發新型綠色保鮮劑方面具有廣闊前景。