一次藥敏試驗(yàn)及其應(yīng)用

徐玉斌 （甘肅省華池縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 745600）

隨著新型致病菌的不斷出現(xiàn)，抗菌藥對(duì)細(xì)菌性傳染病的控制起到了非常重要的作用，但由于養(yǎng)殖過(guò)程中不科學(xué)、盲目的濫用抗菌藥，很多致病性細(xì)菌產(chǎn)生了耐藥性，使得抗菌藥對(duì)細(xì)菌性疾病的控制效果越來(lái)越差，不但造成藥物浪費(fèi)，而且還延誤病情，給養(yǎng)殖戶(hù)造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。并且各種致病菌對(duì)不同的抗菌藥物的敏感性不同，同一細(xì)菌的不同菌株對(duì)不同抗菌藥物的敏感性也有差異。因此，通過(guò)藥敏試驗(yàn)，掌握致病菌對(duì)藥物的敏感性，指導(dǎo)臨床用藥，提高療效。

1 流行病學(xué)調(diào)查

某養(yǎng)殖戶(hù)，養(yǎng)羊95只，發(fā)病羊30只，病死2只。臨床癥狀有體溫升高41℃，食欲廢絕，咳嗽，消瘦，流濃鼻。剖解肺間質(zhì)增厚，有肉樣變化，伴隨出血，肝臟和膽囊腫大。曾經(jīng)用青霉素、板藍(lán)根注射液、磺胺間甲氧嘧啶鈉治療。治療無(wú)效后送檢病死羊肺組織、肝組織進(jìn)行藥敏測(cè)定。

2 試驗(yàn)步驟

2.1 細(xì)菌培養(yǎng)

2.1.1 材料用具 培養(yǎng)基(可購(gòu)買(mǎi)成品)、培養(yǎng)皿、電子天平、錐形瓶、電磁爐、石棉網(wǎng)、玻璃棒、pH試紙、氯化鈉、氫氧化鈉、瓶口塞、酒精燈、接種環(huán)、酒精棉球、記號(hào)筆、吸水紙、恒溫箱、高壓鍋。

2.1.2 培養(yǎng)基的制備 按照各類(lèi)微生物生長(zhǎng)的需要將多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行人工合成：（1）稱(chēng)取蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化鈉5g溶解于1000ml的超純水中。（2）用試劑氯化氫(酸)和氫氧化鈉(堿)校正酸堿度，使其達(dá)到pH值7.2～7.4。加入瓊脂15g，在電磁爐上墊石棉網(wǎng)，用玻璃棒攪拌加熱直至溶解。（3）瓶口塞棉塞，包裝后置高壓鍋內(nèi)，同時(shí)也將接種平皿用報(bào)紙包好置于其內(nèi)，121℃高壓滅菌30min。（4）經(jīng)高壓滅菌后趁熱取出，溫度降到56度左右，在生物安全柜里將培養(yǎng)基傾入滅菌的培養(yǎng)皿，每一空皿傾入培養(yǎng)基20ml，放入4℃冰箱中備用。

2.1.3 病料處理 在超凈工作臺(tái)上取出采集的肺組織、肝組織，用滅菌手術(shù)刀剪剪去手指大小的病變邊緣組織，然后用吸水紙吸干組織水分，在酒精燈火焰上滅菌固定，最后剪開(kāi)組織進(jìn)行接種培養(yǎng)。

2.1.4 細(xì)菌接種 （1）用洗手液將雙手洗凈，擦干，再用75%酒精棉球檫試雙手。當(dāng)手上酒精揮發(fā)完畢后，點(diǎn)燃酒精燈。（2）對(duì)接種環(huán)火焰灼燒滅菌，冷卻后分別蘸取接種物，開(kāi)始在培養(yǎng)皿劃線(xiàn)。左 手 斜 持 平皿(45°角)，用拇指打開(kāi)皿蓋，使其與皿底間分開(kāi)成2～3cm寬的縫隙，靠近火焰周?chē)沂治粘纸臃N環(huán)伸入平皿內(nèi)，在平皿上端1/6范圍來(lái)回劃線(xiàn)，密集涂布。然后用腕力在原劃線(xiàn)處作連續(xù)平行劃線(xiàn)，劃線(xiàn)時(shí)使接種環(huán)與平板成30°～40°角，劃線(xiàn)間距適當(dāng)，不能重疊。（3）接種完畢后，將接種環(huán)火焰滅菌后放回，用記號(hào)筆在皿底玻璃上注明組織名稱(chēng)，接種時(shí)間等，將培養(yǎng)皿倒置，送進(jìn)溫箱。（4）經(jīng)37℃ 18～24h孵育后取出，觀察瓊脂平板表面細(xì)菌生長(zhǎng)情況。

2.2 藥敏試驗(yàn)

將含有定量抗菌藥物的濾紙片貼在已接種了測(cè)試菌的瓊脂表面上，紙片中的藥物在瓊脂中擴(kuò)散，隨著擴(kuò)散距離的增加，抗菌藥物的濃度呈對(duì)數(shù)減少，從而在紙片的周?chē)纬蓾舛忍荻取Ｍ瑫r(shí)，紙片周?chē)志鷿舛确秶鷥?nèi)的菌株不能生長(zhǎng)，可以使抑菌范圍外的菌株生長(zhǎng)，從而在紙片的周?chē)纬赏该鞯囊志Γ煌囊志幬锏囊志χ睆揭蚴芩幬镌诃傊袛U(kuò)散速度的影響而可能不同，抑菌圈的大小可以反映測(cè)試菌對(duì)藥物的敏感程度。

2.2.1 材料準(zhǔn)備 藥敏試紙(購(gòu)買(mǎi))、接種環(huán)、酒精燈、鑷子、恒溫箱、毫米尺。

2.2.2 操作步驟 （1）在“超凈臺(tái)”中，用經(jīng)火焰滅菌的接種環(huán)取適量細(xì)菌分別在平皿邊緣相對(duì)四點(diǎn)涂菌，以每點(diǎn)開(kāi)始劃線(xiàn)涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點(diǎn)劃線(xiàn)至平皿的1/2，依次劃線(xiàn)，直至細(xì)菌均勻密布于平皿。（2）將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，選取慶大霉素、青霉素、鏈霉素、氨芐西林、林可霉素、復(fù)方新諾明、卡那霉素、頭孢曲松、呋喃唑酮、環(huán)丙沙星藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。用鑷子輕按幾下藥敏片，使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼。先在平皿中央貼一片，然后外周等距離貼(外周一般可貼7片)。（3）將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24h后，觀察效果。

2.2.3 結(jié)果觀察與判斷 過(guò)夜培養(yǎng)后形成一個(gè)抑菌圈，用毫米尺測(cè)量抑菌圈直徑，慶大霉素11mm、青霉素4mm、鏈霉素4mm、氨芐西林6mm、林可霉素1mm、復(fù)方新諾明12mm、卡那霉素12mm、頭孢曲松9mm、呋喃唑酮5mm、環(huán)丙沙星12mm。抑菌圈越大，說(shuō)明該菌對(duì)此藥敏感性越大，反之越小，在15mm以上為高敏，10～15mm為中敏，小于10mm為低敏，無(wú)抑菌圈為不敏。

3 藥敏試驗(yàn)的應(yīng)用

藥物敏感實(shí)驗(yàn)后，選擇高敏藥物進(jìn)行治療，推薦藥物有復(fù)方新諾明、卡那霉素、環(huán)丙沙星、慶大霉素。選用復(fù)方新諾明進(jìn)行臨床治療，0.08g/kg給藥，首次加倍，2次/d，連用3d。經(jīng)過(guò)治療病情得到控制，3d治愈力87%，根據(jù)綜合治愈力來(lái)看復(fù)方新諾明療效是明顯的，是臨床的理想藥物。同時(shí)在選擇高敏藥物時(shí)應(yīng)考慮藥物的吸收途徑，因?yàn)樗幟粼囼?yàn)是藥液直接和細(xì)菌接觸，而在給畜禽用藥的時(shí)候，必須通過(guò)機(jī)體的吸收才能使藥物達(dá)到一定的效果，所以用藥時(shí)，要考慮給藥方法，這樣才會(huì)達(dá)到好的治療效果。