氯化鋰對牙髓干細胞增殖與分化的影響

李樂楓，蔣備戰

(同濟大學附屬口腔醫院牙體牙髓病學教研室-上海牙組織修復與再生工程技術實驗中心，上海 200072)

Wnt/β-catenin信號通路與牙胚生長發育、牙冠形態發生以及牙根發育形成的過程密切相關，它在牙上皮的增殖發育以及成牙本質細胞的生長分化過程當中都起到了重要的作用[1-2]。相關研究表明，無機化合物氯化鋰作為該經典信號通路的激活劑，具有上調該通路的能力；通過加入氯化鋰(LiCl)對該通路進行激活，能促進細胞的增殖與骨向分化[3]。而對于牙髓牙本質復合體受損傷后的蓋髓治療過程中，牙髓干細胞(dental pulp stem cells，DPSCs)受蓋髓材料的作用，具有形成修復性牙本質的潛能[4]。然而，氯化鋰對于牙髓牙本質復合體再生的作用尚未有深入研究。本課題擬從細胞研究層面上探究Wnt/β-catenin通路的激活劑氯化鋰對牙髓干細胞增殖與分化的影響，為蓋髓材料的研發提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

低糖型DMEM培養基、胎牛血清、谷氨酰胺、青鏈霉素購自美國Gibco公司；0.25%胰蛋白酶、CO2恒溫孵箱購自美國Thermo公司；低速離心機購自德國Eppendorf公司；YJ-875型超凈工作臺購自蘇州凈化設備廠；倒置相差顯微鏡及照相系統購自日本Nikon公司；10cm培養皿及15、50mL離心管購自美國Corning公司；抗人(Vimentin、Cytokeratin 19、CD34、CD45、CD90、CD105、CD146)抗體、山羊抗兔二抗購自Abcam公司；氯化鋰、CCK-8試劑盒、茜素紅染液購自南京凱基公司；膠原酶、地塞米松、抗壞血酸、β-甘油磷酸鈉購自Sigma公司。

1.2 牙齒樣本的收集

本實驗經過同濟大學倫理委員會批準(倫理審查編號： 2018-012)，嚴格遵照有關人類細胞提取及研究應用規定進行操作。……