金銀花等多味中藥對雞胚中新城疫病毒復(fù)制的抑制效果研究

喬月琴

（東臺市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，江蘇 東臺 224200）

雞新城疫病又稱亞洲雞瘟，由新城疫病毒引起，家禽發(fā)病后致死率較高，給養(yǎng)殖戶造成重大重大的經(jīng)濟(jì)損失。中草藥具有良好的抑菌能力，阻斷病毒的吸附、穿入、復(fù)制、轉(zhuǎn)染等環(huán)節(jié)起到直接抗病毒作用，還可調(diào)動機(jī)體的應(yīng)激能力、提高機(jī)體免疫功能和抗病防御機(jī)能。王世英，張登榮等人研究表明中草藥對新城疫疾病的預(yù)防有一定作用，趙永福，吳達(dá)琪以及陳松煥等人在臨床實(shí)踐中應(yīng)用中草藥治療雞新城疫疾病也得到了很好的作用。

中藥一般副作用較小，不易產(chǎn)生抗藥性，且在機(jī)體內(nèi)殘留小、對環(huán)境污染小。筆者希望通過中草藥對雞胚中NDV復(fù)制的抑制實(shí)驗(yàn)，來進(jìn)一步證實(shí)中草藥對NDV的抑制作用，為臨床上預(yù)防和治療提供更為有力度參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 試劑配置

1.1.1 抗凝劑稱取枸櫞酸鈉3.21g，加去離子水溶解到50ml燒杯中，最后定容到100ml。高溫高壓滅菌后室溫或4℃保存。

1.1.2 PBS KH2PO40.24g，Na2HPO41.44g，NaCl 8g，KCl 0.2g，加去離子水約800ml充分?jǐn)嚢枞芙猓蠹尤霛恹}酸調(diào)pH至7.4，最后定容到1L。高溫高壓滅菌后室溫或4℃保存。

1.1.3 1%雞紅細(xì)胞吸入抗凝劑約1ml的滅菌采血器，分別采集3只健康成年公雞約5ml，1200轉(zhuǎn)/min離心15min，PBS洗滌3次，去白細(xì)胞等以徹底洗凈紅細(xì)胞。準(zhǔn)確觀察刻度離心管中紅細(xì)胞體積，加入99倍體積的PBS，配成1%雞紅細(xì)胞，4℃保存，備用。

1.1.4 中草藥液的制備 分別將金銀花、板蘭根、連翹、黃芩加水適量煎煮，煮沸20min后，過濾，再以煮沸蒸發(fā)法濃縮成終濃度為每毫升含生藥1g的藥液，高壓滅菌，備用。

1.1.5 制備病毒液 將NDV用PBS液作1∶5稀釋，并加入青、鏈霉素各1000ū/ml，放置4℃作用1h，備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組和接種

NDV強(qiáng)毒組； NDV強(qiáng)毒+陽性血清組；NDV強(qiáng)毒+藥液組；中草藥液對照組；PBS對照組

表1 各試驗(yàn)組雞胚死亡情況

1.3 培養(yǎng)和血凝試驗(yàn)

雞胚孵化溫度36℃，孵化濕度55%。每12h照蛋一次，并記錄雞胚死亡情況，直到108h試驗(yàn)結(jié)束。

無菌收集各試驗(yàn)組所有雞胚尿囊液，按微量凝集法檢測每組雞胚尿囊液內(nèi)病毒的血凝效價(jià)。記錄各實(shí)驗(yàn)組尿囊液血凝價(jià)，并計(jì)算其平均值。

2 結(jié)果

2.1 各試驗(yàn)組雞胚死亡情況

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明黃芩對病毒復(fù)制抑制效果極顯著，金銀花和板蘭根的抑制效果次之，連翹最差（見表1）。

2.2 不同中草藥對雞胚尿囊液中NDV血凝效價(jià)的影響

結(jié)果顯示，尿囊液中的病毒含量顯著低于強(qiáng)毒組表明金銀花、板蘭根、黃芩和連翹對病毒的復(fù)制都有很強(qiáng)的抑制作用（見表2）。

3 小結(jié)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果能夠表明中草藥在阻斷病毒的吸附、穿入、復(fù)制、轉(zhuǎn)染等環(huán)節(jié)起到直接殺滅病毒的作用。臨床應(yīng)用中結(jié)合中醫(yī)清熱解毒、涼血冷血和西醫(yī)的組織修復(fù)，消炎止血等理念，應(yīng)該可以提高新城疫疫病的治療效果。

表2 不同中草藥對雞胚尿囊液中NDV血凝效價(jià)的影響