中國北方抑郁癥與OPRM1基因多態性的相關性研究

馬心慧，孫海昕，杜金贊，付 瑜，劉晨陽

抑郁癥是一種常見以少言寡語、情緒低落、持續性疲乏、思維緩慢等為主要癥狀的精神疾病。研究發現，我軍抑郁癥問題是一個亟待關注的重要心理衛生問題，已受到軍隊心理學與思想政治工作者的廣泛重視。本研究通過對OPRM1基因位點多態性與抑郁癥患者的關聯性研究，旨在揭示抑郁癥的致病基因，實現基因診斷，從而為軍隊選拔重要領域或崗位人才時規避易患人群提供科學的指導方法，也為增強部隊戰斗力提供堅實的理論依據。

1 對象與方法

1.1 對象 (1) 病例組：選取2016-01至2017-01在黑龍江省哈爾濱市第一專科醫院門診及住院的患者，共369例，均為男性漢族，年齡18～49歲，按照年齡分為兩組：Ⅰ組為18～33歲，Ⅱ組為34～49歲；入選標準：符合美國精神障礙診斷與統計手冊第4版(DSM.IV)診斷標準，PANSS評分>60分；無煙草、乙醇及其他精神活性物質濫用史；中國北方地區漢族自然人群；患者及家屬知情并同意；研究個體之間無血緣關系。排除標準：患有心膽肝腎等軀體疾病、內分泌及免疫系統疾病、營養不良及其他精神疾患；有過敏及激素治療史，接受過免疫制藥治療；不同意參加本研究者。(2)對照組：選取同期某部隊醫院體檢中心部隊健康官兵738例，均為男性漢族，年齡與病例組差異無統計學意義，具有可比性。

1.2 方法 按漢密爾頓抑郁量表(HAMD)17對抑郁癥狀嚴重程度做評估[1]。對合格的入選病例組人員征得患者及家屬同意后，完成HAMD-17量表和基本信息調查表。采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)技術和聚合酶鏈反應-序列特異性引物(PCR-SSP)分析技術檢測OPRM1基因上的2個位點。采集患者靜脈血5 ml于EDTA抗凝管充分混勻，分裝。PCR擴增采用12 μl反應體系，含50～200 ng基因組DNA，2×PCR緩沖液，15 mmol/L MgCl20.5 μl，5 μmol/L引物各0.5 μl，0.5 UTaq酶0.5 μl(北京天根醫藥公司)。取20 μl PCR產物，建立總體積為20 μl的酶切反應體系，加入相應的限制性內切酶(NEB，北京)，37 ℃溫育過夜，4 ℃水浴15 min終止反應。酶切產物用2.0%瓊脂糖凝膠(含溴化乙錠)電泳分離，經凝膠成像儀系統(Bio-RadgelDoc2000，美國)處理后進行基因型判讀，記錄并保存結果。OPRM1基因兩個位點引物參照文獻[2]。所有位點的引物、PCR反應、產物長度、退火溫度和內切酶(表1)。

表1 OPRM1基因擴增位點的引物序列、退火溫度及酶切片段

1.3 統計學處理 運用DNAMAN軟件包對測序峰圖進行序列判讀及比對，采用SPSS13.0軟件進行數據處理，Hardy-Weinberg平衡檢驗、基因、基因型頻率及關聯性檢驗，Haploview軟件進行單倍型重構及單倍型關聯分析。ReviewManage4.2(OxfordEngland)軟件進行Meta分析。病例組和對照組間基因型和等位基因頻率的計算采用直接計數法，組間基因型頻率及等位基因頻率的差異性比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

OPRM1基因rs1799971C/T與rs648893G/A位點多態性在對照組中的分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，且兩組人群的年齡均匹配。OPRM1基因啟動子區rs1799971C/T與rs648893G/A位點多態性的基因型與等位基因頻率分布見表2。OPRM1基因啟動子區rs1799971C/T與rs648893G/A位點在各自內切酶消化前后得到的片段見圖1、2。

連鎖不平衡程度統計結果顯示，未發現病例組和對照組的兩個多態性位點之間呈明顯連鎖不平衡現象。單體型關聯分析顯示，所有單體型在兩組之間分布差異無統計學意義。

OPRM1基因rs1799971位點基因型和等位基因頻率在34～49歲病例組及對照組間存在統計學差異(OR=0.309,95%CI:0.218～0.439,P<0.01)。而rs648893位點的基因型和等位基因頻率在兩個年齡組中病例組的基因型和等位基因頻率與對照組比較差異均無統計學意義(表2)。

圖1 中國北方男性rs799971C/T未經限制性內切酶消化所得片段

表2 中國北方兩組OPRM1基因多態性位點的基因型和基因頻率年齡分布 (n；%)

注：①Ⅰ組：年齡為18～33歲；②Ⅱ組：年齡為34～49歲

圖2 中國北方男性rs648893G/A經限制性內切酶消化后所得消化片段

消化之前：1,3,5和7道為180bp碎片。消化后：第2道180bp代表純合子AA基因型(突變型)；第4和第8道155bp代表純合子GG基因型(野生型)；6道180bp和155bp代表AG基因型(雜合子)

3 討 論

抑郁癥具有較高的患病率、復發率、死亡率、致殘率，是危害人類身心健康的常見精神類疾病。有研究表明，抑郁癥平均發病年齡為25歲，多數發病于15～19歲和25～29歲年齡段[3]，而且有10%～15%的抑郁癥患者死于自殺。國內外研究表明，軍人大多處于這個年齡階段，也是抑郁癥的高危人群[4，5]。有學者對近20年來我國軍人心理健康特點進行了回顧性研究，發現我國軍人的心理健康水平偏低，抑郁是主要的心理問題之一[4]。作戰部隊基層官兵的抑郁自評量表(SDS)陽性率60.66%，焦慮自評量表(SAS)陽性率19.79%，而且軍人中抑郁的比例有上升趨勢。

OPRM1位于基因組第6號染色體上，是人類編碼阿片受體的基因，目前，國內外OPRM1基因與精神神經類疾病的關聯性研究報道不多[6]。本研究結果未發現OPRM1基因rs648893G/A基因多態性與抑郁癥存在關聯。分析其原因可能是基因多態性有明顯的種族和地域差異，這種差異有可能導致同一種突變在不同的人群產生不同的表型效應，導致各個研究結果的不一致。近年來，大量的研究證實了遺傳學在抑郁癥的致病因素中發揮一定的作用，與抑郁癥有關的免疫系統的遺傳學已發現，某些細胞因子的多態性如編碼IL-1、TNF-α的基因可能使個體更易發展成抑郁癥[7]。

關于OPRM1基因與抑郁癥關聯性的報道尚屬首次。筆者未能發現本研究rs648893G/A多態性與抑郁癥的易感性相關：抑郁癥可能是一種多因素疾病，OPRM1基因多態性可能只發揮相對較小的作用；可能還有其他基因變異參與了抑郁癥的病理生理過程。筆者曾發現，TNF-α基因-857C/T位點與重性抑郁障礙癥存在關聯恰恰證明了這一點。后期筆者將按照不同軍種、年齡、軍齡、職別、文化程度等對軍人分組進行研究，再通過體內和體外研究將基因多態性與mRNA的轉錄和蛋白的表達聯系起來，以揭示OPRM1基因變異對表達水平產生的影響。

由此可見，從多角度研究闡明抑郁癥的發病機制，尋找潛在致抑郁靶點，最終實現基因診斷和基因治療將具有重大的理論價值和現實的指導意義。尤其是研究成果如能在部隊體檢中推廣，這對重要軍事領域及崗位的人才的選拔非常重要，可以實現規避易患人群。本研究成果將有助于研發更有效、更特異的抗抑郁藥物，如能實現基因治療，將能降低部隊官兵抑郁癥的發生或提高患病后的治療效果，從而減少自然減員，提高部隊作戰能力。

總之，本研究證實OPRM1基因第一外顯子區rs1799971C/T位點等位基因的多態性與中國北方漢族抑郁癥患者的發病呈正相關，該突變可能會增加抑郁癥的發病風險。