CETP基因I405V、1696G/A多態(tài)與辛伐他汀療效的相關性

李俊濤 郭志斌 陳志超 保澤慶 王敏 鄭克勤

[摘要] 目的 探討膽固醇酯轉運蛋白（CETP）基因I405V多態(tài)、1696G/A多態(tài)與辛伐他汀調血脂效果的相關性。方法 選取2008年2月～2010年6月于廣東醫(yī)科大學附屬醫(yī)院治療的血脂異常患者233例，采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)（PCR-RFLP）方法檢測I405V和1696G/A多態(tài)的基因型頻率分布情況，并比較各基因型之間的各項血脂水平在辛伐他汀調脂治療前后的變化。 結果 I405V多態(tài)II、IV及VV基因型分別為63例、101例和69例，1696G/A多態(tài)GG、GA及AA基因型分別為167例、45例和21例。辛伐他汀治療后，II型患者三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）及極低密度脂蛋白膽固醇（VLDL-C）水平的下降幅度最為明顯（P < 0.05或P < 0.01）;1696G/A多態(tài)各基因型患者各項血脂水平變化量比較差異無統計學意義（P > 0.05）。 結論 辛伐他汀調血脂效果與CETP基因I405V多態(tài)相關。

[關鍵詞] 膽固醇酯轉運蛋白;血脂異常;辛伐他汀;三酰甘油;低密度脂蛋白

[中圖分類號] R589.2? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）01（b）-0127-04

[Abstract] Objective To explore the association between the lipid-regulating effect of Simvastatin with I405V and 1696G/A polymorphisms in cholesteryl ester transfer protein （CETP） gene. Methods Two hundred and thirty-three cases of patients with dyslipidemia treated in Affiliated Hospital of Guangdong Medical University from February 2008 to June 2010 were selected. Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism （PCR-RFLP） technique was used to detect the genotype frequency distribution of I405V and 1696G/A polymorphisms， and the change of each blood-fat index among different genotypes was compared before and after Simvastatin treatment. Results The distribution of II， IV and VV genotype of I405V polymorphism were 63 cases， 101 cases and 69 cases respectively. The GG， GA and AA genotype distribution of 1696G/A polymorphism were 167 cases， 45 cases and 21 cases respectively. After Simvastatin treatment， the decline of triacylglycerol （TG）， total cholesterol （TC）， low density lipoprotein cholesterol （LDL-C） and very low density lipoprotein cholesterol （VLDL-C） in II genotype patients was the most obvious （P < 0.05 or P < 0.01）. There was no statistically significant difference in the change of blood lipid levels among all kinds of 1696G/A genotype patients （P > 0.05）. Conclusion The effect of Simvastatin on blood lipid is related to the I405V polymorphism of CETP gene.

[Key words] Cholesteryl ester transfer protein; Dyslipidemia; Simvastatin; Triacylglycerol; Low density lipoprotein cholesterol

辛伐他汀通過抑制膽固醇的合成，促進血液內低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）與極低密度脂蛋白膽固醇（VLDL-C）的清除，為血脂異常患者常用的降脂類藥物[1-2]。流行病學研究表明，辛伐他汀對血脂異常患者的調脂效果存在個體差異[3-5]。膽固醇酯轉運蛋白（CETP）為膽固醇逆向轉運過程中的關鍵因子，其主要功能是促進膽固醇酯（CE）從高密度脂蛋白（HDL）流向極低密度脂蛋白（VLDL），后者進而轉變?yōu)榈兔芏戎鞍祝↙DL）再經LDL受體途徑在肝內被清除。因此作為影響膽固醇代謝的關鍵因子，CETP基因是可影響他汀類藥物調血脂效果的易感性基因之一[6-8]。I405V多態(tài)位于CETP基因第14外顯子，此位點A/G的轉變可致使第405位的異亮氨酸（I）變?yōu)槔i氨酸（V），進而導致血漿CETP活性下降[9-10]。CETP基因1696G/A多態(tài)位于3′端非編碼區(qū)的polyA位點上游92 bp，即cDNA第1696位，1696G/A多態(tài)通過降低mRNA的穩(wěn)定性進而影響CETP活性[11]。以上研究結果提示CETP基因I405V、1696G/A多態(tài)可能影響他汀類藥物調血脂效果。本研究篩查了CETP基因I405V、1696G/A多態(tài)在血脂異常患者的分布情況，并進一步探討了辛伐他汀調血脂效果與兩個多態(tài)的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2008年2月～2010年6月于廣東醫(yī)科大學附屬醫(yī)院治療的血脂異常患者233例，其中男107例，女126例，平均年齡（65.44±0.76）歲，合并原發(fā)性高血壓1級患者172例，吸煙者75例（15～20支/d）。納入標準：患者均屬血脂異常危險中危層，符合藥物治療標準。排除標準：住院前1個月內服用過調血脂類藥物者;合并冠心病、糖尿病、嚴重肝腎疾病、腫瘤、近期感染史、手術或外傷史者。患者住院后次日起服用辛伐他汀（山東魯抗醫(yī)藥集團賽特有限責任公司，批號：080112）進行調脂治療，治療4周（20 mg/d）。合并高血壓患者，調脂治療期間服用對血糖、血脂等代謝無明顯影響的鈣拮抗劑類藥物來降低血壓。采集患者治療前后的外周靜脈血各5 mL（均禁食12 h），以上血液標本采集均經本人知情同意。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取及血脂檢測? 用蛋白酶K消化-飽和氯化鈉鹽析法提取患者血液白細胞DNA。檢測患者治療前后的血脂指標，包括：膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、LDL-C、VLDL-C、HDL-C等。

1.2.2 PCR擴增? 根據GeneBank中AF027656序列并參照相關文獻[11-12]設計引物，由上海生工生物工程公司（Sangon）合成。I405V多態(tài)上游引物：5′-CTCACCATGGGCATTTGATTGCAGAGCAGCTCCGACTCC-3′，下游引物：3′-AAAGGTGAAATGGGAAGCTCTGTCA-GCCTCGG-5′。1696G/A多態(tài)上游引物：5′-TCTCTCCTACTGCCCCTCCCTT-3′，下游引物：3′-GAAGAAGGACTCCGCAGCTCTT-5′。擴增體系為50 μL：含PrimeSTARTMHS Premix制品25 μL[由寶生物工程（大連）有限公司生產，內含DNA Polymerase、Buffer、dNTP Mixture、Mg2+];引物1 μL（上下游各0.5 μL，終濃度0.25 μmol/L）;DNA模板2 μL（70～100 ng）;滅菌水22 μL。PCR參數：冷啟動，94℃預變性5 min，98℃變性10 s，60℃退火15 s，72℃延伸30 s，30個循環(huán)，最后72℃延伸10 min。

1.2.3 限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分析? I405V多態(tài)PCR擴增產物，用Tth111I限制性內切酶65℃酶切10 h;1696G/A多態(tài)PCR擴增產物，用NlaIII限制性內切酶37℃酶切10 h。酶切產物均取15 μL經1.5%瓊脂糖凝膠電泳，UV-2100凝膠分析系統鑒定基因型。

1.3 統計學方法

用Hardy-Weinberg平衡定律檢驗樣本的代表性，運用SPSS 17.0軟件對患者治療前的基線血脂水平及治療后的血脂水平變化量作單因素方差分析、Post Hoc多重比較，調整混雜因素用協方差分析。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 I405V、1696G/A多態(tài)PCR-RFLP分析

I405V多態(tài)各基因型電泳結果為：II型電泳條帶為159 bp;IV型為159 bp、122 bp、37 bp（片段小跑出凝膠，故圖中未顯示）;VV型為122 bp、37 bp。1696G/A多態(tài)各基因型電泳結果為：GG型為298 bp;GA型為298 bp、184 bp、114 bp;AA型為184 bp、114 bp。

2.2 基因型分布與Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗

在233例血脂異常患者中，I405V多態(tài)II、IV和VV型分別為63例、101例和69例;1696G/A多態(tài)GG、GA和AA型分別為167例、45例和21例。I405V多態(tài)基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡（χ2 = 3.57，P > 0.05），1696G/A多態(tài)基因型頻率分布則不符合Hardy-Weinberg遺傳平衡（χ2 = 30.87，P < 0.05）。

2.3 治療前I405V和1696G/A多態(tài)各基因型血脂基線水平比較

治療前，I405V多態(tài)各基因型TG和TC的基線水平組間比較差異有統計學意義（P < 0.05、P < 0.01），進一步多重比較結果顯示II型患者的TG水平明顯高于IV型和VV型（P < 0.05）;且II型患者TC水平也顯著高于IV型和VV型（P < 0.01）。見表1。1696G/A多態(tài)各基因型HDL-C水平組間比較差異有高度統計學意義（P < 0.01），與GA型和AA型患者比較，GG型患者HDL-C水平最低（P < 0.01）。見表2。

2.4 治療后I405V和1696G/A多態(tài)各基因型血脂水平變化量比較

治療后，I405V多態(tài)各基因型患者血漿TG、TC、LDL-C及VLDL-C的下降幅度比較，差異有統計學意義（P < 0.05或P < 0.01），II型患者TG、TC、LDL-C及VLDL-C水平的下降幅度較IV型和VV型更為明顯（P < 0.05或P < 0.01），見表3。1696G/A多態(tài)各基因型患者各項血脂水平變化量比較差異無統計學意義（P > 0.05）。

3 討論

他汀類藥物調脂效果與CETP基因多態(tài)的關聯性報道多集中在Taq IB和-629C/A多態(tài)兩個位點[13-15]。本研究選取了可能影響血漿CETP活性的CETP基因I405V和1696G/A兩個位點，對這兩個位點與辛伐他汀調脂效果的關聯性進行了探討。

在本研究結果中，辛伐他汀治療前，I405V多態(tài)II型患者TG、TC的基線水平都明顯高于IV型和VV型患者（P < 0.05或P < 0.01），此結果提示，在血脂異常患者中，II型患者繼發(fā)心血管疾病的概率可能高于IV和VV型患者。對于1696G/A多態(tài)，GA和AA型患者血漿HDL-C的基線水平顯著高于GG型患者（P < 0.01），此結果提示，血脂異常患者A等位基因攜帶者繼發(fā)心血管疾病的概率可能要低于GG型患者。當然考慮到1696G/A多態(tài)基因型頻率分布并不符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，此結論也需要擴大樣本量做進一步的研究。

本研究結果顯示，經辛伐他汀治療后，I405V多態(tài)各基因型患者TG、TC、LDL-C及VLDL-C水平變化量比較差異有統計學意義（P < 0.05或P < 0.01），相較于IV型和VV型患者，II型患者TG、TC、LDL-C及VLDL-C水平的下降幅度更為明顯，此結果提示II基因型患者對辛伐他汀的調血脂效果要更為敏感，這與壽峰勤等[12]的研究結論相似，但在Kolovou等[16]及Li等[17]的研究中卻并未發(fā)現I405V多態(tài)與他汀類藥物調脂效果的關聯性。在本研究中未發(fā)現1696G/A多態(tài)與辛伐他汀調血脂效果相關聯。

CETP基因多態(tài)影響他汀類藥物調脂效果的機制尚不明確[18-19]，故I405V多態(tài)與他汀類藥物調脂效果的研究目前仍存在爭議。有研究表明載脂蛋白E（APOE）基因的ε4等位基因可能影響I405V多態(tài)的功能[20]，由此推斷，APOE基因ε4等位基因的攜帶與否，有可能是目前I405V多態(tài)與他汀類藥物調脂效果存在爭議的主要原因之一，當然也不排除受試者遺傳背景和環(huán)境等因素的影響。

綜上所述，辛伐他汀調脂效果與CETP基因I405V多態(tài)有相關性，但其影響機制尚待進一步研究證明。此外本研究結果存在一定的局限，如篩查樣本量較小、選擇CETP基因多態(tài)位點也較少等，故對本項研究結果的解釋應充分考慮這些因素。

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（收稿日期：2018-03-30? 本文編輯：羅喬荔）