蒙藥材多葉棘豆種子萌發影響因子研究

，，

(1.呼倫貝爾市蒙醫醫院，內蒙古 海拉爾 021000； 2.內蒙古科技大學包頭醫學院，內蒙古 包頭 014040)

多葉棘豆為豆科類多年生植物狐尾藻棘豆[OxytropisMyriophy(Pall.) DC.]，蒙古名為“娜布其爾哈格·敖日道扎”，異名為“查干·達格沙”，具有“本草之王”的美名，是常用蒙藥材。味苦、甘，性涼；具有殺“粘”，清熱、燥黃水、愈傷、生肌、鎖脈止血、消腫等功效；主治瘟疫、炎癥、丹毒、腮腺炎、腸刺痛、腦刺痛、麻疹、痛風、游痛癥、創傷、月經過多、吐血等癥狀。是蒙醫臨床常用藥“青鳳丸”,“七雄丸”方劑中之君。近年來以多葉棘豆為主要配方，研發了擦劑、糊劑、洗劑等多種劑型，臨床應用極其廣泛。多葉棘豆化學成分、藥理作用等方面報道較多，野生馴化與栽培方面報道較少。本研究通過人工氣候箱模擬自然環境，采用物理、化學、機械法處理種子破除硬實，使發芽率提高，為多葉棘豆野生馴化種植提供實驗依據。

1 材 料

材料多葉棘豆野生種子于2016年7月中旬采自內蒙古呼倫貝爾市新巴爾虎左旗。經內蒙古民族大學蒙醫藥學院布和巴特教授鑒定為多葉棘豆種子。

烘箱(永光明醫療儀器廠101型號) ，人工氣候箱子450 N(上海森信實驗儀器有限責任公司)，電子天平(梅特勒-托利多儀器ME 204)；電子顯微鏡(奧林巴斯CX 23)，培養皿，濾紙，蒸餾水，赤霉素。

2 方 法

2.1 種子形態特征

在電子顯微鏡下觀察種子形態，并測量種子大小。對種子進行拍照。

2.2 凈度檢驗和千粒重

采用四分法，將已抽取的樣品倒在光潔的桌面上，把凈種子、廢種子和雜質(其他植物種子和夾雜物)分開，分別稱重，重復3次，計算種子凈度。千粒重的測定采用四分法，從每份中隨機取250粒，共1 000粒為1組，3次重復。

種子凈度(%)=[1-(廢種子含量+雜質含量)/種子總量]×100%。

2.3 含水量測定

稱重后磨碎105 ℃烘干，直至連續稱量3次重量不發生變化，共設3次重復。

種子水分(%)=[(烘前試樣重-烘后試樣重)/烘前試樣重]×100%。

2.4 種子發芽率測定

2.4.1 砂擦方法

采用6種(100～500目)砂紙對種子進行摩擦處理2～4 min，在電子顯微鏡觀察劃種皮程度，通過反復試驗后確定220目的砂紙處理4 min后的種子有均勻條形劃痕的同時星狀露白為標準。

2.4.2 砂擦后熱水浸泡

將2.4.1中砂擦處理的種子分別用50，60，70，80 ℃蒸餾水浸種子1 h，自然降至室溫后倒掉水，放置培養皿中進行培養，對照組用砂擦后蒸餾水常溫浸泡相同時間。

2.4.3 熱水浸種

分別用50，60，70，80 ℃蒸餾水浸種子1 h，自然降至室溫后倒掉水，用濾紙吸干種子表面的水，對照組用蒸餾水常溫浸泡相同時間。

2.4.4 赤霉素處理

用250，300，350 gm/L濃度的赤霉素分別處理6 h、12 h，傾去赤霉素，迅速用自來水沖洗3次后做發芽試驗。對照用蒸餾水浸種至相同時間。

各組實驗挑選25粒飽滿成熟種子，處理后播于放有濾紙的培養皿里，常溫作為對照組，放置10，15，20 ℃人工氣候箱內進行培養，光照8 h，16 h黑暗，每組重復3次。每天18：00時觀察記錄1次發芽數，種子發芽以種子露出胚根1 mm以上為標準，種子發芽結束以連續5 d沒有新發芽的種子為標準。試驗全程及時給培養皿補水。

初始萌發時間：培養皿第1粒種子萌發的天數；

初次計數時間：達到50%發芽率的天數；

末次計數時間：種子萌發達到最高時，以后再無萌發種子出現時的天數；

發芽勢：發芽勢測定為5 d。

2.4.5 數據處理

實驗數據采用SPSS 20.0軟件進行統計。

發芽率(%)=(n/N)×100%，式中：n為正常發芽的種子數，N為供試種子數；

發芽勢(%) =(5 d內發芽種子數/供試種子總數)×100%。

3 結果與分析

3.1 多葉棘豆生物學特征

多葉棘豆在顯微鏡下可以看到，腎臟形，顏色以褐色和黑色較多，表面光滑發亮，具有紋理，并有一層蠟狀物質，其種子長為1.22 mm，寬為0.94 mm。其千粒重為1.168 g，凈度為76%，含水量為5%。

3.2 不同方法對種子萌發的影響

3.2.1多葉棘豆種子粒小，種皮特別硬，吸水率差。通過4種方法17個試驗組都能不同程度的破除種皮，提高發芽率。由表1可看出，砂擦可顯著提高多葉棘豆萌發率，砂擦后常溫蒸餾水里浸泡的種子萌發率達到84%，發芽勢66.7%；通過用4個溫度熱水和3個濃度赤霉素浸泡對多葉棘豆種子很難破除種子硬實現象，與對照組比較萌發率無明顯提高，而且實驗過程中熱水浸泡的種子出現糜爛現象。

3.2.2從圖2可看出，砂擦組與砂擦+常溫浸泡實驗組，15 ℃萌發條件時的發芽率最高，同種實驗方式下，20 ℃效果次之，10 ℃發芽率較低。綜合來看，砂擦+常溫方式15 ℃時為最佳發芽環境。

圖1 多葉棘豆種子

表1 不同方法對種子萌發的影響

圖2 17個實驗組與不同萌發溫度下發芽率的變化曲線

4 結論與討論

多葉棘豆為豆科棘豆屬植物，具有硬實的種皮，使得其種子萌發困難，而種子萌發技術是開展多葉棘豆野生馴化、種子育苗與規范化種植的關鍵技術，目前關于多葉棘豆種子萌發的研究比較少。本實驗通過顯微鏡對多葉棘豆種子的生物學特征進行研究，并采用機械破皮法、物理法和化學法3種方法對多葉棘豆種子萌發率低的特點進行研究，實驗結果發現，3種方法中，機械破皮對種子萌發影響最大，僅經過砂擦處理的種子，萌發率在70%以上，物理法的研究發現，15～20 ℃對于多葉棘豆種子的萌發相對較好，10 ℃的萌發率相對較低。化學法發現赤霉素浸泡過的種子發芽率基本無明顯提高。從17種試驗方法中發現，砂擦與砂+常溫2種實驗方式下，15 ℃發芽溫度是最佳促發芽方法，發芽率達到84%。因此可以看出，物理法和機械破皮法對多葉棘豆的種子萌發影響較大，而化學法的影響則相對較低。本研究對于蒙藥材多葉棘豆野生馴化種植提供可靠地實驗數據的同時對于蒙藥材規模化生產中機械破皮等技術提供理論依據。