高效液相色譜同時測定游泳池水中二甲基乙內酰脲和9種鹵乙酸的方法研究

吳 飛 陳 晨

（揚州市疾病預防控制中心 江蘇 揚州 225002）

對游泳池水進行嚴格的消毒殺菌，是防止各種疾病的傳播，保障游泳者健康與池水水質的必要措施。我國 GB26370-2010《含溴消毒劑衛生標準》[1]規定，溴氯海因和二溴海因適用于游泳池水、污水和一般物體表面消毒。GB/T36758-2018《含氯消毒劑衛生要求》[2]規定，二氯海因可用醫療衛生機構、公共場所和水的消毒。

二氯海因、溴氯海因和二溴海因均屬乙內酰脲類衍生物，在水中水解生成5,5-二甲基乙內酰脲、次溴酸和次氯酸，起消毒殺菌作用。但其在消毒過程中可與水中有機物發生反應，生成對人體有害的鹵代消毒副產物。大量研究表明，鹵乙酸僅次于三鹵甲烷的第二大類 DBPs，其濃度約占DBPs總量的13%，但致癌風險占總致癌風險的91.95%以上。常見的HAAs 有 一氯乙酸、二氯乙酸、三氯乙酸、一溴乙酸、二溴乙酸、三溴乙酸、溴氯乙酸、一溴二氯乙酸、二溴一氯乙酸9 種[3]。目前文獻報道的測定乙內酰脲的方法有液相色譜法[4]；9種鹵乙酸的檢測方法有液相色譜-質譜法、氣相色譜-質譜法、氣相色譜法[3,5-6]，前兩種方法儀器設備價格昂貴，難以在基層實驗室開展檢測，后一種方法需要衍生，操作繁瑣，本實驗在保證目標化合物峰型對稱性和分離效果的條件下，通過適當加大進樣量，建立了同時測定游泳池水中二甲基乙內酰脲和9種鹵乙酸的高效液相色譜分析方法

1.實驗部分

1.1 儀器

1290型高效液相色譜儀，配自動進樣器和二極管陣列檢測器（美國Agilent公司）。

1.2 試劑

二甲基乙內酰脲、9種鹵乙酸標準品（上海安譜公司）；甲醇 (上海安譜公司CNW)；磷酸氫二鈉、磷酸（國藥集團化學試劑有限公司）。

1.3 標準儲備液與標準溶液配制

分別取適量的二甲基乙內酰脲和9種鹵乙酸標準品（精確到0.01mg）用純水溶解定容至50ml，配制濃度為1000mg/L的混合標準儲備液，置于冰箱中保存。精密吸取一定量的標準儲備液，用純水逐級稀釋成0.02mg/L～20.0mg/L混合標準溶液系列。

1.4 實驗方法

1.4.1 樣品前處理 均勻水樣經0.45μm微孔濾膜過濾后，收集約1.5ml按色譜條件進行測定。

1.4.2 色譜條件 PICKERING-C8 色譜柱（4.6 mm×250mm，5μm）；柱溫30℃；流量1.0ml/min；進樣體積100μL；檢測波長為210nm,流動相：A為甲醇，B為0.01mol/L磷酸氫二鈉（PH7.5）。梯度洗脫程序：0～6min時，A為5%；6～20min時，A由5%升至20%，20～25min時，A由20%降至5%，保持5min。

圖1 混合標準溶液色譜圖

2.結果

2.1 流動相條件的選擇

為確定合適的流動相和梯度洗脫程序,分別采用乙腈-水、甲醇-水、甲醇-0.02mol/L乙酸銨、甲醇-0.01mol/L磷酸氫二鈉作為流動相進行實驗，并比較了在不同pH條件下的分離度，在柱溫30℃；流量1.0ml/min；流動相：A為甲醇，B為0.01mol/L磷酸氫二鈉（PH7.5），0～6min時，A為5%；6～20min時，A由5%升至20%，20～25min時，A由20%降至5%，保持5min的條件下甲基乙內酰脲和9種鹵乙酸能達到有效分離且峰型對稱性好，游泳池水中尿素在此條件下不保留，不對檢測產生干擾，故選用上述流動相比例作為本實驗檢測條件。

2.2 檢測波長的選擇

利用二極管陣列檢測器在190nm～400nm之間進行波長掃描，在本流動相條件下二甲基乙內酰脲和9種鹵乙酸最大吸收波長在200nm～216nm之間，綜合考慮10種化合物的檢測靈敏度和不同檢測波長下基線噪聲因素，選擇 210nm作為本方法的檢測波長。

2.3 標準曲線和檢出限

用純水稀釋混合標準儲備溶液配制成0.02、0.05、0.10、0.25、0.50,1.00,5.00，10.0,20.0mg/L混合標準溶液,按實驗方法進行測定,并繪制標準曲線。結果表明：僅一氯乙酸0.5～20.0mg/L范圍，二甲基乙內酰脲和其余9種鹵乙酸的質量濃度均在0.02～20.0mg/L范圍內與其峰面積呈線性關系,見表1。

2.4 精密度與回收實驗

分別向自來水樣中添加低、中、高三個濃度的二甲基乙內酰脲和9種鹵乙酸混合標準溶液，按上述實驗條件分別進行6次測定，見表2。

表1 線性回歸方程、相關系數及檢出限

表2 精密度和回收實驗結果（n=6）

3.結論

本實驗建立了采用高效液相色譜同時測定游泳池水中二甲基乙內酰脲和9種鹵乙酸的檢測方法.方法的建立對了解游泳池水中的有毒有害物質，進行有毒有害物質的篩查，保障游泳者、游樂者、藝術表演者的身體健康提供了可靠的科學依據。