慢性乙型肝炎患者血清MIF、IL-17、IL-10變化的相關性研究

喻雪琴，陳芳，陳星，戢敏，梅怡晗，楊旺春

(1.川北醫學院附屬醫院感染科，四川 南充 637000；2.首都醫科大學，北京 610041；3.岳池縣人民醫院感染科，四川 岳池 638300)

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染人體后結果多樣，部分HBV感染者可進展為乙肝病毒攜帶者，慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)，乙肝相關性肝衰竭、肝硬化、肝細胞癌，全球每年死于因HBV感染所致相關性肝臟疾病患者約65萬人[1]。HBV感染后的部分患者將進展為CHB，體內存在免疫功能失衡，輔助性CD4+T淋巴細胞可調節宿主免疫細胞釋放不同細胞因子并參與其致病與疾病恢復過程，多種細胞因子參與了CHB發生、發展及轉歸的免疫反應調節過程。目前研究發現，巨噬細胞遷移移動因子參與了CHB的發生發展過程，在CHB炎癥誘導與抑制以及免疫調節方面發揮了對炎癥介質的調控作用[2]。有研究結果顯示，白細胞介素-10(interleukin-10,IL-10)作為一種炎性抑制因子，在阻止或減輕炎癥發生的同時也可能導致感染慢性化，作為導致炎癥發生的促炎性因子之一的IL-17，與機體炎癥反應的發生發展關系密切[3]。本文就CHB患者血清巨噬細胞遷移移動因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、IL-17、IL-10水平變化的相關性分析進行報道。

1 臨床資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年3月至2017年10月川北醫學院門診就診并隨訪48周的CHB患者38例為治療組，以2015年中華醫學會肝病學分會中華醫學會感染病學分會制定的“慢性乙型肝炎防治指南”診斷標準[4]進行診斷，其中男性23例，女性15例，年齡18～66歲，平均年齡(38.12±15.61)歲。根據HBV DNA載量分為高病毒載量組(≥105 copies/mL)30例，低病毒載量組(<105 copies/mL)18例；根據HBeAg狀態分為HBeAg (+)組28例，HBeAg (-)組10例。以同期20例健康體檢者為對照組，其中男性12例，女性8例，年齡18～64歲，平均年齡(37.98±14.42)歲。治療組與對照組在年齡、性別構成比等方面差異均無統計學意義(P>0.05)。治療組患者在48周的觀察期間僅采用了恩替卡韋、復方甘草酸苷治療，在肝功能正常后僅用恩替卡韋治療。

1.2 納入及排除標準

1.2.1研究對象排除標準 ①合并嗜肝病毒HAV、HCV、HDV、HEV感染者；②自身免疫疾病、酒精、藥物、放療等所致肝組織炎癥者；③急性乙型病毒性肝炎者；④合并非嗜肝病毒感染所致的肝組織炎癥者；⑤孕婦及哺乳期婦女者；⑥近6月使用過抗HBV治療或激素、免疫抑制治療者；⑦CHB并肝癌、脂肪肝等者；⑧原因不明的慢型肝炎者。

1.2.2 對照組納入標準 ①年齡：18-60歲；②身體健康者；③HBsAg(-)者；④自身免疫性疾病診斷標志物陰性者；⑤血常規、血葡萄糖、甲狀腺功能、肝腎功能正常者；⑥精神行為正常者。

1.3 方法

收集38例CHB患者和20名健康體檢者清晨空腹外周靜脈血5 mL，3 000 r/min離心3 min后，將分離的血清儲存于-80 ℃環境中待檢測。HBV感染標志物的檢測采用化學發光法檢測(選用美國雅培公司提供的試劑)；采用熒光定量 PCR 法檢測血清 HBV DNA(BIO-Rad公司)；用ADVIA 2400全自動生化分析儀檢測肝功能。采用 ELISA 法檢測CHB患者血清 MIF IL-17 和 IL-10 水平(美國RD 公司提供的試劑)。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 治療前兩組血清MIF、IL-17、IL-10水平比較

治療前治療組血清MIF、IL-17水平高于對照組，IL-10水平低于對照組，差異均有統計學意義(均P<0.05)。見表1。

表1 治療前兩組血清MIF、IL-17、IL-10水平比較

2.2 治療前后CHB患者血清MIF、IL-17、IL-10水平變化

治療前治療組血清MIF、IL-17水平高于治療12周、24周、48周后水平，IL-10低于治療12周、24周、48周后水平，差異均有統計學意義(均P<0.05)。見表2。

組別MIFIL-17IL-10治療前56.62±16.5130.72±2.43187.42±12.81治療12周30.72±0.4222.31±1.78207.55±2.11治療24周19.40±7.8015.13±0.31222.80±3.31治療48周10.42±0.306.61±0.23236.01±11.61F值96.71526.2846.88P值0.0010.0010.001

2.3 治療前HBV DNA載量對CHB患者血清MIF、IL-17、IL-10水平的影響

HBV高載量組血清MIF、IL-17、IL-10水平高于HBV低載量組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

組別例數MIFIL-17IL-10HBV高載量組2059.81±2.5132.21±2.74191.51±8.92HBV低載量組1853.22±8.9228.11±1.94181.42±8.73t值16.0710.366.92P值0.0010.0010.002

2.4 治療前HBeAg狀態對CHB患者血清MIF、IL-17、IL-10水平的影響

HBeAg(+)組患者血清MIF、IL-17、IL-10水平高于HBeAg(-)組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

組別例數MIFIL-17IL-10HBeAg(+)組2860.52±2.5131.44±1.62191.31±5.41HBeAg(-)組1054.61±3.5228.43±0.74178.01±6.33t值11.0511.5712.55P值0.0010.0010.001

2.5 治療前CHB患者血清MIF、IL-17、IL-10水平與ALT、AST的相關性分析

治療前CHB患者MIF、IL-17水平與ALT呈負相關關系，與AST呈正相關關系；IL-10水平與ALT、AST均呈負相關關系。見表5。

表5治療前CHB患者血清MIF、IL-17、IL-10水平與ALT、AST的相關性分析(r值)

HBV DNAMIFIL-17IL-10ALT-0.98-0.52-0.59AST0.160.16-0.21

*注：表內r值，均表示P<0.05。

3 討論

HBV感染后疾病的發生、發展、轉歸過程中存在病毒與宿主免疫系統之間的相互作用，是乙肝病毒、肝細胞及宿主免疫系統相互作用的動態平衡過程。免疫功能異常是乙肝病毒感染后導致肝損傷的重要發生機制。細胞免疫的發生與調控需通過T淋巴細胞來介導，是清除CHB患者體內HBV的主要免疫細胞，T淋巴細胞及其細胞因子比例失衡是導致CHB發生與病情惡化的重要原因，T淋巴細胞介導的免疫系統在HBV感染后被誘導、激活并釋放多種細胞因子，進而導致促炎因子與抑炎因子失衡的肝組織炎癥反應，誘導并介導肝細胞損傷，對誘導各類細胞分化增殖，導致HBV感染后肝組織炎癥持續存在發揮調控作用[5]。MIF、IL-10、IL-17代表著不同的細胞因子亞群，細胞因子MIF、IL-17及IL-10等參與CHB的發生、發展過程，具有生物學功能的多樣性，對肝細胞具有黏附、吞噬及誘導一氧化氮產生等功能，在炎性反應中起重要的調控作用[8]。

結果顯示，HBV高載量組血清MIF、IL-17、IL-10水平高于HBV低載量組，HBeAg(+)組患者血清MIF、IL-17、IL-10水平高于HBeAg(-)組；細胞因子MIF、IL-17、IL-10與HBV水平及HBeAg狀態關系密切，表明MIF、IL-17、IL-10參與了CHB的促進炎性反應與抑制炎癥反應過程，對CHB的發生、發展與轉歸起到了一定的調控作用。在田鵬飛等[6]的研究中發現，高病毒載量組血清細胞因子MIF、IL-17和IL-10水平高于中、低兩組，中病毒載量組的細胞因子水平最低；與中病毒載量組相比，高病毒載量患者MIF和IL-10水平顯著升高，這與本研究結果一致，提示病毒載量水平及HBeAg狀態與CHB患者肝組織內炎性反應關系密切，也可能是導致肝組織慢性化、肝纖維化的風險因子之一。

研究發現，MIF是巨噬細胞和淋巴細胞分泌的眾多細胞因子之一，MIF作為一種重要的炎性因子，在肝組織炎癥發生及肝組織纖維化過程中，MIF起到誘導巨噬細胞分泌IL-8并誘導和刺激釋放大量的肌酸激酶而間接激活肝星狀細胞，影響肝組織纖維化的發生[6]。本實驗通過對治療前后CHB患者血清MIF水平變化分析發現，血清MIF水平在經過治療后呈現下降趨勢，提示MIF水平反映了肝組織炎癥程度，在肝組織炎癥發生過程中起到重要作用，MIF參與CHB的發生、發展過程，其變化與肝組織損傷與炎癥程度關系密切[8]。

本研究發現，治療前CHB患者MIF、IL-17水平與ALT呈負相關關系，與AST呈正相關關系；IL-10水平與ALT與AST均呈負相關關系，提示CHB患者MIF水平變化與肝組織損害程度相關。這與田鵬飛等[6]研究發現MIF水平與ALT、AST水平呈正相關，曾鋼等[9]研究發現CHB患者MIF水平明顯升高基本一致。但本實驗結果中與田鵬飛報道[6,9]也不完全一致，而本研究顯示CHB患者MIF、IL-17水平與ALT呈負相關關系，與AST呈正相關關系，這可能與ALT主要反應肝組織的急性炎癥而非肝組織實質性炎癥等因素相關，AST則是肝細胞內線粒體損傷后釋放的肝細胞酶，在一定程度上反映了肝實質炎癥，與肝組織損傷程度一致性較高有較大關系，另外可能與樣本量的篩選因素有關，即外周血細胞因子的檢測并不單純反映局部的炎癥反應，而是反映循環中的總效應和總水平。

本研究結果顯示，治療前治療組患者血清MIF、IL-17水平高于治療12周、24周、48周后水平， IL-10水平低于治療12周、24周、48周后水平。研究發現，IL-17 主要是由活化的Th17 細胞分泌的特異性的促炎癥效應因子，可以促進機體局部產生趨化因子如IL-8、IL-6等，使單核細胞及中性粒細胞迅速增長，誘導、激活CHB患者肝組織炎癥的發生[7]，顯示IL-17在CHB的炎性反應中可能發揮重要的促炎因子作用，與肝組織炎癥程度密切相關。同時與IL-17參與誘導促炎因子、趨化因子的高表達，誘導并激活肝組織細胞通透性增加關系密切[10]，這與丁慶莉等[11]研究結果相一致。與楊波等[12]研究發現CHB患者外周血Thl7細胞頻率與ALT水平呈正相關，CHB患者肝組織內Thl7細胞數量與肝組織炎癥活動度及AST水平呈正相關的結果一致。作者研究發現CHB患者血清IL-17與AST呈正相關系，與ALT呈負相關系。其研究結果出現差異可能與CHB患者病例的入選條件差異及樣本量、檢測時機及手段等有一定關系。

Treg細胞可分泌IL-10，除Treg細胞外，Th2細胞、樹突細胞等亦可分泌。IL-10作為一種重要的抗炎因子，它能夠通過減少局部肝組織中的中性粒細胞增值、活化，并減少其與肝內皮細胞的黏附從而抑制HBV誘導下的肝細胞損害[7]。本研究發現，治療前CHB患者血清中IL-10水平低于對照組，這可能是因為此時肝組織炎癥反應較重，與炎癥反應相關的促炎因子水平占主導地位，那么此時具有抗炎作用的細胞因子處于低水平狀態、加之HBV高載量、IL-10對炎癥刺激反應出現較晚等因素相關。這顯示IL-10可抑制肝組織炎癥，抑制細胞免疫應答，但也導致機體不能有效清除HBV，從而造成乙肝病毒感染慢性化。而隨著治療進程推進與病情好轉，CHB患者血清IL-10水平逐漸升高，促炎性因子MIF、IL-17水平下降，其對肝組織的損傷也就減輕，高水平表達的IL-10的抗炎以及抑制細胞免疫應答作用得到增強，使得肝組織炎癥反應減輕并逐漸趨于慢性化，這種觀點與于曉輝等[13]大多數學者的研究結果相一致。

本研究通過比較CHB患者血清MIF、IL-17 及IL-10 水平的變化，初步分析了MIF、IL-17 及IL-10在CHB的炎性反應中的作用及意義并有望成為CHB治療的新靶點。