利用VIGS技術(shù)初步驗(yàn)證 WSR1基因功能的研究

呂亮杰，宿振起，孫麗靜，王莉梅，李 輝

(河北省農(nóng)林科學(xué)院糧油作物研究所/河北省作物遺傳育種實(shí)驗(yàn)室，河北石家莊 050035)

小麥(TriticumaestivumL.)是我國(guó)僅次于玉米和水稻的第三大糧食作物，其播種面積占全國(guó)耕地面積的20%～30%[1]。河北是我國(guó)重要的商品糧基地和小麥主產(chǎn)省，其小麥總產(chǎn)量和種植面積位居全國(guó)第三，發(fā)展河北優(yōu)質(zhì)小麥對(duì)保障全國(guó)商品小麥的市場(chǎng)需求具有重要作用[2]。淀粉是小麥籽粒的主要成分，約占小麥籽粒重量的65%[3]，總淀粉含量和直、支鏈淀粉含量對(duì)小麥品質(zhì)有重要影響[4]。近年來(lái)，國(guó)外對(duì)淀粉品質(zhì)的研究越來(lái)越重視，特別是在面條加工和食用品質(zhì)方面；國(guó)內(nèi)關(guān)于小麥淀粉性狀的遺傳研究起步較晚，主要集中于淀粉含量[5-6]及淀粉糊化特性的遺傳規(guī)律[7-8]、淀粉含量的影響因素[9]及淀粉合成相關(guān)基因的定位[10-11]等方面。淀粉的合成途徑及參與合成的酶對(duì)小麥的淀粉品質(zhì)有較大影響，其中淀粉合成過(guò)程中的酶直接影響淀粉的合成和直、支鏈淀粉的含量，進(jìn)而影響淀粉粒的結(jié)構(gòu)、淀粉理化特性，改變淀粉品質(zhì)。一般認(rèn)為ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)、可溶性淀粉合成酶(SSS)、淀粉粒束縛淀粉合成酶(GBSS)和淀粉分支酶(SBE)對(duì)淀粉合成非常關(guān)鍵[12-13]，同時(shí)環(huán)境對(duì)淀粉合成也有較大的影響[14-15]。近年來(lái)的研究主要集中在與淀粉合成途徑相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子上。Zhu等[16]研究發(fā)現(xiàn)，EREBP(乙烯反應(yīng)元件結(jié)合蛋白)可以提高Waxy(GBSS顆粒結(jié)合淀粉合成酶)基因的轉(zhuǎn)錄水平。Rook等[17]發(fā)現(xiàn)apetala2-type蛋白能提高AGPL3(葡萄糖焦磷酸化酶大亞基)的轉(zhuǎn)錄水平。Fu等[18]通過(guò)基因探針共表達(dá)分析，發(fā)現(xiàn)一個(gè)與15個(gè)水稻淀粉合成相關(guān)基因表達(dá)負(fù)向調(diào)控有關(guān)的淀粉合成轉(zhuǎn)錄因子(Rice Starch Regulatory,RSR1)。然而，目前有關(guān)調(diào)控小麥籽粒淀粉合成的調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子(wheat starch regulatory,WSR)的研究較少。

VIGS 是基于轉(zhuǎn)錄后基因沉默(post-transcriptionalgene silencing,PTGS)引起內(nèi)源mRNA 序列特異性降解發(fā)展起來(lái)的快速分析基因功能的新技術(shù)[19-20]。它通過(guò)整合部分靶基因表達(dá)序列的重組病毒侵染植物，引起植物內(nèi)同源基因沉默，誘發(fā)表型變異進(jìn)而實(shí)現(xiàn)基因的功能分析[20]。大麥條紋花葉病毒(barleystripemosaicvirus，BSMV)由于具有廣泛的寄主范圍而成為單子葉植物良好的VIGS沉默載體，為小麥和水稻等的基因功能研究提供了有效手段[21]。Scofield等[22]用BSMV-VIGS技術(shù)證明在抗葉銹病基因Lr21介導(dǎo)的抗性途徑中要有RAR1、SGT1和HSP90基因的參與。趙 丹等[23]利用該技術(shù)沉默小麥的TNBL1基因，沉默的YW642植株對(duì)黃矮病敏感，顯現(xiàn)感病癥狀。張立榮等[24]利用該技術(shù)證明小麥TaRAR1是抗葉銹病基因Lr24行使抗病作用所需要的。目前已證實(shí)BSMV-VIGS方法在小麥基因研究中的作用，但在小麥抽穗期對(duì)淀粉調(diào)控基因進(jìn)行VIGS體系優(yōu)化的研究還有待進(jìn)一步深入。

本研究以國(guó)審小麥品種冀麥325為材料，克隆小麥WSR1基因，并以小麥PDS(八氫番茄紅素脫氫酶)基因?yàn)橹甘净?，?gòu)建WSR1基因的BSMV-VIGS重組表達(dá)載體，進(jìn)行小麥葉片和幼穗接種，再通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)，檢測(cè)WSR1基因在小麥籽粒發(fā)育期間的表達(dá)，以期初步闡明小麥WSR1基因?qū)ψ蚜５矸酆铣傻挠绊?，并為通過(guò)轉(zhuǎn)基因或分子標(biāo)記輔助選擇來(lái)改善小麥品質(zhì)、提高粒重和產(chǎn)量提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料為普通小麥品種冀麥325，該品種由河北省農(nóng)林科學(xué)院糧油作物研究所培育。BSMV重組病毒載體α、β、γ和γ-PDS由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院張?jiān)銎G研究員惠贈(zèng)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1WSR1基因的克隆

以水稻RSR1基因(GenBank登錄號(hào):JN192938)為探針，在NCBI-BLASTn(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=blastn&PAGE_TYPE=BlastSearch&BLAST_SPEC=&LINK_LOC=blasttab&LAST_PAGE=tblastn)進(jìn)行同源比對(duì)，獲得的同源片段為靶序列，設(shè)計(jì)引物W1-F:5′-TGAAGTTGCT GCTGAAGG-3′和W1-R:5′-CGATGACGAC GAGAAGAG-3′進(jìn)行PCR擴(kuò)增和基因克隆，以獲得的比對(duì)得分最高的片段為靶序列，按SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit(Clontech公司，美國(guó))說(shuō)明書(shū)的要求，應(yīng)用Primer Premier 6.0軟件，在其5′端設(shè)計(jì)反向特異引物WSR1-5:5′-GCCAGATTGGTGGATGCTCG GTCAGA-3′，在其3′端設(shè)計(jì)正向特異引物WSR1-3:5′-AGATGGTCGCAATCCCTCATC GATACCC-3′進(jìn)行PCR擴(kuò)增和基因克??；將WSR1基因5′RACE和3′RACE的測(cè)序結(jié)果進(jìn)行拼接，根據(jù)拼接的全長(zhǎng)序列，在其開(kāi)放閱讀框兩端設(shè)計(jì)全長(zhǎng)引物WSR1-F:5′-TCTTCTTGAA TCGTGAGGTT-3′和WSR1-R:5′-GCTGAGG TTAGTATCTGACA-3′進(jìn)行PCR擴(kuò)增和基因克隆。本研究涉及到的引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.2.2WSR1基因的生物信息學(xué)分析

用DNAMAN軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析，用NCBI-CDD(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi)和NCBI-ORF Finder(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/)查找基因的保守結(jié)構(gòu)域和開(kāi)放閱讀框(ORF)。用GSDS(http://gsds.cbi. pku. edu. cn/)明確小麥WSR1基因的外顯子/內(nèi)含子結(jié)構(gòu)。用NCBI-BLASTP(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)對(duì)所克隆基因進(jìn)行相似性比對(duì)和同源性分析，將比對(duì)結(jié)果輸入MAGE 7.0，采用鄰接法(neighbor-joining,NJ)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，其中， bootstrap值設(shè)置為1 000，其余均為默認(rèn)參數(shù)。

1.2.3 VIGS載體構(gòu)建

根據(jù)已克隆的WSR1基因的全長(zhǎng)cDNA序列，選取2個(gè)不同位置，利用Primer Premier 6.0軟件設(shè)計(jì)帶有NheⅠ酶切位點(diǎn)和保護(hù)堿基的引物，擴(kuò)增WSR1基因的沉默片段，其對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增片段分別命名為V1和V2，V1為WSR1基因的保守區(qū)段，V2為WSR1基因的特異性區(qū)段。引物序列為V-WSR1-1F：5′-TACGCTAGCGTGT ACTTGGGTGGATTTGAC-3′，V- WSR1-1R：5′-TACGCTAGCTGACGCCTCTGTACTTGG AG-3′；V- WSR1-2F：5′-TACGCTAGCGGATA AGAGCAGCCTTGG-3′，V- WSR1-2R：5′-TAC GCTAGCCCTCCATGCCCAGGTTGGAA C-3′。用MluⅠ酶切α、γ、γ-PDS、γ-V1和γ-V2，SpeⅠ酶切β載體，酶切完成后，用TaKaRa MiniBEST DNA Fragment Purification Kit Ver.4.0(TaKaRa，日本)進(jìn)行純化，將酶切完全的γ載體和沉默基因的片段進(jìn)行連接；提取α、β、γ、γ-PDS、γ-V1和γ-V2的質(zhì)粒并對(duì)其進(jìn)行線性化，用RiboMAX Large Scale RNA Production Syetems-T7(Promega，美國(guó)) 和Ribo m7G Cap Analog(Promega，美國(guó))對(duì)線性化產(chǎn)物進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄。

1.2.4WSR1功能驗(yàn)證

在小麥開(kāi)花12 d后，選取生長(zhǎng)健壯的小麥植株。將體外轉(zhuǎn)錄好的大麥條紋花葉病毒α、β和γ轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，各取10 μL混合后，加入2倍體積(60 μL)的DEPC水，再加入120 μL的GKP Buffer(50 mM甘氨酸,30 mM K2HPO4,pH 9.2,1%膨潤(rùn)土,1%硅藻土)，制得總體積為210 μL的接種病毒混合液。接種時(shí)佩戴剛開(kāi)封橡膠手套，用DEPC水處理過(guò)的槍頭取10 μL接種液放在食指上，一只手固定麥穗，另一手用大拇指和食指輕輕來(lái)回摩擦麥穗及葉片。接種20 min后向接種部位噴施DEPC水，保濕24 h。接種后每天觀察、記錄變化，并定期取材。

根據(jù)WSR1基因cDNA序列設(shè)計(jì)qRT-PCR(實(shí)時(shí)熒光定量PCR)引物WSR1RT-F：5′-TGAAGTTGCTGCTGAAGG-3′和WSR1RT-R：5′-CGATGACGACGAGAAGAG-3′，PDS-F:5′- TCGAAGGGTTCTATCTGG -3′和PDS-R:5′-CTACAACAATGTGGCAAT-3′；分別對(duì)田間對(duì)照冀麥325和接種后5、10、15、20和25 d的冀麥325取樣， -80 ℃保存。在Icycler iQ5 Real-time PCR儀(Bio-Rad，美國(guó))上進(jìn)行qRT-PCR分析，反應(yīng)體系與程序參考SYBR Premix ExTaq Ⅱ(TaKaRa，日本)試劑盒說(shuō)明書(shū)，試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)生物學(xué)重復(fù)和3個(gè)技術(shù)重復(fù)，采用2-△△Ct法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。

采用雙波長(zhǎng)法測(cè)定籽粒直、支鏈淀粉含量,二者相加得出總淀粉含量。具體測(cè)定方法參照何照花[25]和戴 雙等[26]的方法并做適當(dāng)調(diào)整。抗性淀粉測(cè)定方法參照 Megazyme RS assay kit(Megazyme International，愛(ài)爾蘭)試劑盒說(shuō)明書(shū)并做適當(dāng)調(diào)整,每個(gè)樣品測(cè)定三次求平均作為樣本值。

2 結(jié)果與分析

2.1 WSR1基因克隆結(jié)果

根據(jù)水稻RSR1基因的同源片段設(shè)計(jì)引物，以冀麥325的cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物用1.0%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在小于500 bp處有一條帶(圖1)，該目的條帶經(jīng)測(cè)序大小為459 bp。為獲得WSR1基因的全長(zhǎng)序列，以459 bp片段為靶序列，分別設(shè)計(jì)3′ RACE和5′ RACE引物，擴(kuò)增后經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)3′ RACE的擴(kuò)增產(chǎn)物約為700 bp，5′ RACE擴(kuò)增產(chǎn)物約為1 600 bp。將擴(kuò)增片段回收克隆測(cè)序，3′RACE和5′RACE產(chǎn)物分別為710 bp和1 664 bp(圖1)，與靶序列的3′端和5′端均有重疊區(qū)，將3′RACE和5′RACE 序列進(jìn)行拼接，得到長(zhǎng)2 284 bp的拼接序列。

M：DL2000 marker；1：電子克隆PCR產(chǎn)物；2：3′ RACE 的PCR產(chǎn)物；3：5′ RACE的PCR產(chǎn)物。

2.2 WSR1基因在cDNA和DNA中的驗(yàn)證

在拼接序列的3′末端和5′末端設(shè)計(jì)特異性引物WSR1-F和WSR1-R，以冀麥325的cDNA和DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物用1.0%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在cDNA和DNA中分別擴(kuò)增出一條2 000 bp和5 000 bp左右的條帶。經(jīng)測(cè)序發(fā)現(xiàn)WSR1的cDNA長(zhǎng)2 003 bp，DNA長(zhǎng)4 316 bp(圖2)，測(cè)序結(jié)果和拼接序列基本一致。

2.3 WSR1基因的生物信息學(xué)分析

將所獲得的cDNA序列和DNA序列進(jìn)行查找比較，結(jié)果表明，WSR1基因含8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子(圖3)。用NCBI-ORF Finder查找拼接序列的ORF，結(jié)果顯示，該基因包含一個(gè)1 584 bp 的ORF，編碼527個(gè)氨基酸以及469 bp的5′非翻譯區(qū)(non translated region，UTR)和231 bp的3′UTR。SMART軟件分析結(jié)果表明，WSR1基因編碼蛋白的181～239和273～317 位的氨基酸是保守的AP2核苷酸結(jié)合域，屬于AP2/ERF家族基因(圖3)。

2.4 WSR1基因的系統(tǒng)發(fā)育分析

經(jīng)BLAST分析發(fā)現(xiàn)，小麥WSR1基因的編碼蛋白與粗山羊草(Aegilopstauschii)的一致性為96%，與大麥(Hordeumvulgare)的一致性為94%，與二穗短柄草(Brachypodiumdistachyon)的一致性為76%，與麻竹(Dendrocalamuslatiflorus)、黍?qū)?Setaria)和栗(Castaneamollissima)的一致性為70%，與高粱(Sorghumbicolor)的一致性為66%。利用MAGE 7.0對(duì)WSR1蛋白進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析(圖4)，發(fā)現(xiàn)WSR1基因與大麥、山羊草、二穗短柄草的親緣關(guān)系比較近，與水稻、麻竹、高粱的親緣關(guān)系比較遠(yuǎn)。

M：DL2000；C：cDNA的 PCR產(chǎn)物；D：DNA 的PCR產(chǎn)物。

圖3 WSR1基因的結(jié)構(gòu)域和基因結(jié)構(gòu)圖

圖4 WSR1基因及其編碼蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

2.5 WSR1基因的功能分析

以加入NheⅠ酶切位點(diǎn)和保護(hù)堿基的引物V-WSR1-1F和V-WSR1-1R、V-WSR1-2F和V-WSR1-2R分別擴(kuò)增WSR1基因上的目的片段(圖5A)，產(chǎn)物測(cè)序后驗(yàn)證，已經(jīng)成功引入酶切位點(diǎn)和保護(hù)性堿基，片段大小依次為220 bp和247 bp，并且序列沒(méi)有發(fā)生突變，與原始序列一致，2個(gè)片段分別命名為V1和V2。提取α、β、γ、γ-PDS質(zhì)粒及γ-V1和γ-V2重組質(zhì)粒并對(duì)其進(jìn)行線性化，線性化后的質(zhì)粒大約是6 kb的單一條帶(圖5B)，表明線性化成功。

在小麥開(kāi)花12 d后，選取生長(zhǎng)健壯的冀麥325，在穗部和葉片摩擦接種BSMV:00、BSMV:PDS、BSMV:V1和BSMV:V2，各接種20株。以BSMV:00為對(duì)照，以BSMV:PDS確保能將小麥的基因沉默。接種后每天觀察、記錄變化，并定期取材。發(fā)現(xiàn)接種BSMV:PDS的小麥在第5天開(kāi)始出現(xiàn)光漂白現(xiàn)象，在第10天時(shí)，光漂白現(xiàn)象比較明顯，在第20 天時(shí)光漂白達(dá)到最大程度(圖6)，而接種BSMV:00的對(duì)照組卻沒(méi)有明顯變化，接種率達(dá)90%。

為確保接種BSMV:PDS后可引起PDS基因沉默，造成光漂白現(xiàn)象，提取接種小麥的RNA，反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，對(duì)接種PDS基因的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行分析。結(jié)果如圖7A，在接種BSMV:PDS后，小麥PDS基因的相對(duì)表達(dá)量顯著降低，接種后第5天下降了37%，第15天下降了75%，持續(xù)到第25天PDS基因的相對(duì)表達(dá)量仍保持低水平狀態(tài)，而接種BSMV:00的對(duì)照組卻沒(méi)有變化。證明在該條件下利用BSMV-VIGS技術(shù)可以引起小麥穗部基因的沉默。qRT-PCR檢測(cè)接種麥穗中WSR1基因的表達(dá)情況，如圖8所示，在接種了BSMV:V1和BSMV:V2后，WSR1基因的表達(dá)量，第5天下降了50%，第25天下降到了12%，說(shuō)明沉默WSR1基因成功引起了基因相對(duì)表達(dá)量的下降。

H：λDNA/HindⅢ marker；M：Marker 2000； 1和2：擴(kuò)增片段V1；3和4：擴(kuò)增片段V2；5～10：α、β、γ、γ-PDS、γ-V1(S1)和γ-V2(S2)。

從左至右分別是：接種BSMV:00第15天的葉片，接種BSMV:PDS第5天、10天、20天的葉片。

淀粉含量測(cè)定結(jié)果如圖8所示，在接種了BSMV:WSR1之后，接種材料的直鏈淀粉含量由14.47% 增加到15.60%，千粒重由43.1 g增加到45.8 g。t測(cè)驗(yàn)結(jié)果表明，直鏈淀粉含量、千粒重與對(duì)照的差異均達(dá)到極顯著水平。支鏈淀粉含量由43.95%增加到44.80%，總淀粉含量由58.42%增加到60.40%，抗性淀粉含量由1.53%增加到 1.76%。t測(cè)驗(yàn)結(jié)果表明，支鏈淀粉含量、總淀粉含量、抗性淀粉含量與對(duì)照的差異均達(dá)到顯著水平。說(shuō)明沉默WSR1基因后促進(jìn)了淀粉合成，淀粉含量、千粒重增加。

3 討 論

植物AP2/ERF是一個(gè)龐大的轉(zhuǎn)錄因子基因家族，參與多種生物學(xué)過(guò)程，包括種子發(fā)育、植物生長(zhǎng)、病菌防御、果實(shí)發(fā)育、高鹽、干旱等[27]。本研究利用同源克隆技術(shù)和RACE技術(shù)獲得了小麥WSR1基因的全長(zhǎng)cDNA，生物信息學(xué)分析表明，該基因含有AP2保守結(jié)構(gòu)域。與已克隆的WSR1基因所編碼的蛋白進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)WSR1基因所編碼的蛋白序列與大麥、山羊草、二穗短柄草的親緣關(guān)系比較近，與水稻、麻竹、高粱、擬南芥、大豆和苜蓿的親緣關(guān)系比較遠(yuǎn)。因此推斷WSR1基因?yàn)锳P2/ERF家族基因內(nèi)調(diào)控種子中淀粉含量發(fā)育的轉(zhuǎn)錄因子。

*和**分別表示與對(duì)照的差異顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)。

AAC:直鏈淀粉含量; APC:支鏈淀粉含量;SC:總淀粉含量;RS:抗性淀粉。

BSMV-VIGS 技術(shù)的作用機(jī)制是 RNA 干擾，與研究基因功能的傳統(tǒng)方法相比具有高效、高通量、避免突變、克服基因功能重復(fù)等優(yōu)點(diǎn)；但它也存在誘導(dǎo)的靶基因未100%沉默、靶基因沉默不同步、沉默后被解除等局限性[28]。馬 猛[29]用BSMV-VIGS技術(shù)沉默小麥的PSD基因，以麥穗和籽粒作為接種的受體組織，將BSMV-VIGS技術(shù)應(yīng)用到了小麥品質(zhì)基因的研究上。李淼淼[30]也應(yīng)用 BSMV-VIGS 技術(shù)誘導(dǎo)沉默了淀粉合成相關(guān)基因SBEⅡa和SSⅡa，抑制了淀粉的合成。利用摩擦接種時(shí)，由于局部摩擦不均或濃度不均勻及病毒擴(kuò)展時(shí)效問(wèn)題，可能導(dǎo)致病毒在穗部的發(fā)展不均，基因表達(dá)不盡相同。因此要排除穗部的部分區(qū)域感染病毒不均引起的實(shí)驗(yàn)干擾。本研究探索了BSMV-VIGS技術(shù)在小麥穗部進(jìn)行WSR1基因沉默的相對(duì)最優(yōu)條件，成功構(gòu)建了WSR1基因的 BSMV 重組載體，并用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 從分子水平對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證，同時(shí)還證明 BSMV-VIGS技術(shù)誘導(dǎo)淀粉合成轉(zhuǎn)錄因子沉默的方法是可行的。

小麥籽粒淀粉合成的主要場(chǎng)所是造粉體，光合產(chǎn)物以蔗糖的形式運(yùn)輸?shù)胶铣善鞴俚呐呷榧?xì)胞中，然后水解形成葡萄糖-1-磷酸(G-1-P)，在造粉體內(nèi)腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-Glc pyrophosphorylase,AGPase)催化其 ATP 反應(yīng)生成腺苷二磷酸葡萄糖(ADP-glucose,ADPG)參與淀粉的合成。在造粉體內(nèi)淀粉合成的最后階段還有 3 個(gè)關(guān)鍵調(diào)控酶：淀粉合成酶(starch synthase,SS)、淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBE)、淀粉脫分支酶(starch debranching enzyme,DBE)[31]。轉(zhuǎn)錄因子是能與目的基因5′端上游序列結(jié)合，調(diào)控目的基因時(shí)空表達(dá)功能的蛋白質(zhì)，分為特異型和非特異性轉(zhuǎn)錄因子。它們既可以有選擇性的調(diào)控目的基因的表達(dá)；也可以對(duì)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)調(diào)控沒(méi)有選擇性，如擬南芥的CBF1轉(zhuǎn)錄因子。本研究通過(guò)VIGS技術(shù)，在WSR1基因中選取2個(gè)不同部位的片段進(jìn)行沉默，沉默的2個(gè)片段均影響了小麥淀粉的合成；在接種了BSMV:WSR1之后，直鏈淀粉含量、支鏈淀粉含量、總淀粉含量、抗性淀粉含量及千粒重均有顯著提高，表明冀麥325在接種WSR1基因后從表型上和內(nèi)部組織中均表現(xiàn)出淀粉含量增高的現(xiàn)象，說(shuō)明WSR1基因參與了小麥淀粉合成的過(guò)程，是抑制淀粉合成的轉(zhuǎn)錄因子。