HPLC法測定不同產地女貞子中紅景天苷、女貞苷、特女貞苷的含量

李彥靈，龔曼，曾凡一，位慧蕓，王夏影，閆福林*

(1.新鄉醫學院三全學院，河南 新鄉 453003；2.河南中醫藥大學，河南 鄭州 450046)

女貞子為木犀科植物女貞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果實，是一味補腎滋陰、養肝明目的中藥，可用于肝腎不足、頭暈耳鳴、頭發早白及兩目昏糊等病癥[1]。主要化學成分有三萜類、環烯醚萜類、苯乙醇類、黃酮類、梓醇、醌類、揮發油、脂肪酸、磷脂等成分[2-6]，現代藥理研究發現女貞子具有抗骨質疏松、抗腫瘤、保肝、降血糖、降血脂、調節免疫等作用[7-9]。女貞子主要產于我國的河南、陜西、江蘇、長江流域等地，在各地也有種植。當前藥材市場上的女貞子存在以次充好的現象，危害大眾的健康，需要對女貞子藥材進行質量控制，保障臨床用藥的安全性。因此本文應用HPLC法對不同產地的女貞子藥材進行指標性成分的測定，為女貞子藥材的質量控制提供實驗依據。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀，UV檢測器，FA2004電子F分析天平(批號：14D101-1000，上海良平儀器儀表有限公司)；HH恒溫水浴鍋(金壇市中大儀器廠)；旋轉蒸發儀(R206)(上海申生科技有限公司)；SHZ-3循環水式多用真空泵、CCA-420低溫冷卻水循環泵(鄭州杜普儀器廠)。

紅景天苷(批號：B20504)、女貞苷(批號：B20924)、特女貞苷(批號：B21240)均購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈、甲醇均為色譜純；水為超純水。實驗用女貞子樣品均由安徽普仁中藥飲片有些公司提供，經新鄉醫學院三全學院蘇慧慧鑒定為木犀科植物女貞的干燥成熟果實。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Aglient Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相水-乙腈，梯度洗脫：0～2 min，5%乙腈；2～40 min，5%～30%乙腈；40～45 min，30%乙腈；45～50 min，30%～5%乙腈。體積流量1.0 mL/min，檢測波長282 nm，柱溫25 ℃，進樣量20 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 混合對照品溶液的配制

精密稱取紅景天苷、女貞苷、特女貞苷對照品適量，使配成0.152 mg/mL、1.00 mg/mL、1.00 mg/mL的混合對照品溶液，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，接取續濾液，備用。

2.2.2 供試品溶液的配制

精密稱取過4號篩的女貞子粉末1.0 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入95%的甲醇溶液25.0 mL，稱重，超聲30 min，室溫放置10 min，再稱重，并用95%的甲醇溶液補足減失的重量。靜置20 min，取上清液，過0.22 μm微孔濾膜，接取續濾液，即得。

2.3 線性關系考察

精密吸取對照品溶液5、10、12.5、15、20 μL進樣，記錄各濃度下的色譜峰面積，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸。紅景天苷、女貞苷、特女貞苷的回歸方程、相關系數及線性范圍分別為：Y=21 899X-22 883，r=0.999，0.76～3.04 μg；Y=66 272X-24 395，r=0.999 1，5.00～20.00 μg；Y=93 479X+23 418，r=0.999 9，5.00～20.00 μg。

2.4 系統適應性試驗

精密吸取對照品溶液、供試品溶液各20 μL，注入高校液相色譜儀，按“2.1”項色譜條件進行測定，紅景天苷、女貞苷、特女貞苷色譜峰的分離度均大于1.5，理論塔板數大于3 000，具體見圖1。

注:1.紅景天苷;2.女貞苷;3.特女貞苷圖1 對照品(A)及女貞子樣品(B)HPLC圖

2.4.1 精密度試驗

精密吸取混合對照品溶液按“2.1”項下色譜條件連續進樣5次，記錄各對照品色譜峰面積，紅景天苷、女貞苷、特女貞苷峰面積的RSD值分別為0.55%、0.48%、0.85%，表明儀器精密度良好。

2.4.2 重復性試驗

精密稱取女貞子S6樣品共5份，按“2.2.2”項下平行制備5份供試品溶液，按“2.1”項下色譜方法進樣，結果紅景天苷、女貞苷、特女貞苷峰面積的RSD值分別為1.02%、2.11%、0.98%，表明方法的重復性良好。

2.4.3 穩定性試驗

精密吸取女貞子S1樣品6份，按“2.1”項下色譜方法分別在0、1、2、4、6進樣分析，記錄各對照品色譜峰面積，結果紅景天苷、女貞苷、特女貞苷峰面積的RSD值分別為2.51%、3.05%、2.11%，表明供試品在常溫條件下放置6 h穩定性良好。

2.4.4 加樣回收率試驗

精密稱取已知對照品含量的女貞子S2樣品5份，每份0.5 g，分別加入紅景天苷、女貞苷、特女貞苷對照品適量，按“2.2.2”項下制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄各對照品色譜峰面積，計算回收率。具體結果見表1。

2.5 樣品測定

取10批不同產地的女貞子藥材，按“2.2.2”項下制備樣品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行檢測，結果如表2。

3 討論

建立符合中醫藥“整體性”作用特點的質量評價體系，是當前中藥現代化進程中迫切需要解決的一項艱巨任務。中藥作用的整體性、組成成分的多樣性、作用靶點的復雜性、以及成分間相互作用的難以預測性，使得檢測單一活性成分的西藥質控方法在中藥領域中行不通[10]。中藥作用的發揮是依靠多種成分的共同作用而實現的，這一觀點已經成為共識，利用多種成分分析來控制中藥質量已經成為主流。隨著中藥用藥有效性、安全性問題日益得到重視，建立高品質的評價標準以保證藥材的質量是一項長期而艱巨的任務[11-13]。

紅景天苷是具有苯乙醇結構的苷類成分，研究結果表明其具有保肝、抗腫瘤、增強免疫等多種藥理作用[14-15]。女貞苷、特女貞苷為裂環環烯醚萜苷類成分，是女貞子的特征成分[16-17]。崔蘊慧等[18]對女貞子的指紋圖譜及紅景天苷、特女貞苷含量進行測定發現紅景天苷的含量在0.060%～0.294%，特女貞苷含量在0.473%～2.149%。參考楊光明等的方法[19]紅景天苷、女貞苷、特女貞苷分別在282 nm處有最大吸收，因此本文選用282 nm作為測定波長。實驗結果顯示紅景天苷、女貞苷、特女貞苷分別在進樣量0.76～3.04 μg(r=0.999 9)、5.00～20.00 μg(r=0.999 1)、5.00～20.00 μg(r=0.999 9)范圍內線性關系良好，平均回收率分別為99.19%、100.27%、100.46%。10個產地女貞子藥材紅景天苷、女貞苷、特女貞苷含量分別在2.06～4.34 mg/g、2.52～28.73 mg/g、8.86～46.84 mg/g范圍。紅景天苷含量以河南平頂山產女貞子最高(4.34 mg/g)，女貞苷、特女貞苷含量以河南產為最高(28.73 mg/g、46.84 mg/g)。而安徽產女貞子紅景天苷、女貞苷、特女貞苷的含量均低，分別為2.27 mg/g、10.08 mg/g、14.21 mg/g。這與任爽、鄒小燕等[20-21]的研究相一致。

表1 加樣回收率試驗結果

表2 不同產地女貞子中紅景天苷、女貞苷、特女貞苷含量測定結果

本方法用于女貞子藥材中紅景天苷、女貞苷、特女貞苷的含量測定具有簡單快捷、靈敏度高、便于操作、分離效果好的特點，因此所建立的高效液相測定方法可用于女貞子藥材的質量控制研究。